金灯藤种子化学成分的研究

1、    金灯藤种子化学成分的研究        摘要: 对金灯藤的干燥成熟种子进行了化学成分的系统分离，共得到12个化合物，鉴定了10个，分别是：-谷甾醇，棕榈酸，饱和脂肪酸混和物, 硬脂酸，花生酸，胡萝卜甙，羟基马桑毒素(Tutin)，对羟基桂皮酸，马桑亭(Coriatin)，咖啡酸。其中羟基马桑毒素、对羟基桂皮酸、马桑亭、咖啡酸都是首次自该植物中分得，羟基马桑毒素、马桑亭为首次自本科植物中分得。关键词： 金灯藤；羟基马桑毒素；马桑亭分类号：R284.1Study on C

2、onstituents of the Seed from Cuscuta JaponicaGuo HongzhuLi JiashiWu Nan(Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029)ABSTRACT: 12 compounds have been isolated from the seed of Cuscuta japonica Choisy. Based on spectroscopic data, 10 compounds have been determined as follows: 1. -sitosterol

3、, 2. hexadecanoic acid, 3. mixture of hexadecanoic acid, 4. stearic acid, 5. eicosanoic acid, 6. daucosterol, 7. Tutin, 8. p-coumaric acid, 9. coriatin, 10. caffeic acid. It is the first report of compound 7, 8, 9, and 10, which are isolated from this plant and 7, 9 from the family.KEY WORDS: Cuscut

4、a japonica; Tutin; Coriatin金灯藤，又称为日本菟丝子，为旋花科菟丝子属植物Cuscuta japonica Choisy.。我国一些地区用其种子作为大菟丝子药材入药，或作为菟丝子的代用品。目前有关金灯藤化学成分的研究少有报道，为了系统地研究菟丝子药材，区别与其他菟丝子药材的异同,我们对金灯藤的干燥成熟种子进行了化学成分的系统分离，从中共得到12个化合物，鉴定了10个。其中羟基马桑毒素(Tutin)；马桑亭(Coriatin)均为首次自旋花科植物中分得。1实验部分熔点测定用德国PHMK05型显微熔点测定仪(温度计未校正)；红外光谱用Nicolet 20SXB红外光谱仪测

5、定；核磁共振氢谱和碳谱用VIRIAN GEMINI 300型核磁共振仪测定，TMS为内标。X-衍射用面探仪为DIP-2000型。质谱用VG MM70-70H型质谱仪测定。柱层析和薄层层析用硅胶为山东海洋化工厂产品。实验用生药购自四川省成都市莲花池药材市场，经作者鉴定为日本菟丝子Cuscuta japonica Choisy.的种子，药材标本保存于北京中医药大学中药鉴定室。1.1提取与分离金灯藤干燥成熟种子3 kg，粉碎后，用95%乙醇回流提取3次，减压浓缩，浸膏加等量的水分散，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压浓缩得各部位。石油醚部分：取浸膏25 g，行硅胶干柱层析，石油醚乙酸乙酯

6、梯度洗脱，分段切割，经石油醚等溶剂反复重结晶,分别得到化合物1(20 mg)，化合物2(15 mg),化合物3(20 mg),化合物4(约30 mg)，化合物5(8 mg),化合物6(约10 mg)。氯仿部分：取浸膏5 g，行硅胶真空柱层析，氯仿甲醇梯度洗脱，分部收集，合并相同组分。得化合物7(约15 mg)；得无色针晶(约3 mg)，为化合物9。乙酸乙酯部分：取浸膏20g，与聚酰胺粉拌样后，行聚酰胺减压柱层析，水乙醇系统梯度，洗脱，其中30%乙醇部分析出固体，经硅胶柱层析，氯仿甲醇(103)洗脱，得淡黄色结晶25 mg，为化合物10；刮取色带A、B，以甲醇浸取，得微量成分11。正丁醇部分：取

7、浸膏20 g，行聚酰胺低压柱层析，水乙醇梯度洗脱，60%部分析出白色粉末，经甲醇重结晶，得白色粉末14 mg，为化合物12。1.2化合物的结构鉴定化合物1：无色针晶(石油醚)，mp 135137，Lieberman-Burchard反应阳性。EI-MS(m/z) 414为M+峰，经与谷甾醇样品对照，混和熔点不下降，CO-TLC结果一致，确定其结构为-谷甾醇。化合物2：白色蜡状固体(石油醚)，mp 5759，EI-MS （m/z）：256(M+), 227, 213, 199, 185, 171, 157, 143, 129, 115, 97, 85, 73(100), 60。与标准谱对照，确定

8、为棕榈酸，即十六烷酸(Hexadecanoic acid)。化合物3：白色固体(石油醚)，mp 3539，EI-MS (m/z)给出分子离子峰256, 另外还有270的离子峰, 说明III为混和物，两个组分之间差质量数为14的碎片，其余的离子峰与棕榈酸相同，确定其结构为棕榈酸及其同系物十七烷酸的混和物。化合物4：白色片状结晶(丙酮)，mp 5961，溴酚兰反应阳性,EI-MS (m/z): 284(M+), 269, 241, 185, 129, 73; 经与硬脂酸样品对照，TLC及熔点基本一致，确证其结构为硬脂酸(Stearic acid)。化合物5：白色颗粒状结晶(丙酮)，mp 7577，

9、IRcm-1:3000, 2920, 2850, 1700,1295; EI-MS (m/z): 312(M+), 297(M-CH3), 241, 185, 129, 73; 经与质谱标准谱库中花生酸的谱对照，确定化合物为花生酸(Eicosanoic acid)。化合物6：白色粉末(甲醇)，mp 285287, Molish反应阳性；与胡萝卜甙共薄层层析，位移值一致，且混和熔点不下降，酸水解有葡萄糖和甙元谷甾醇产生，确定其结构为胡萝卜甙(Daucosterol)。化合物7：无色方形晶体(氯仿)，mp 212214,1HNMR(ACETONE-d6)ppm: 1.32(s,3H), 1.93(

10、s,3H), 2.63(d,1H,6.12), 3.04(d,1H,3.06), 3.12(dd,1H,4.1/0.9), 3.24(m,H), 3.68(d,1H,3.15), 3.97(d,1H,6.15), 4.20(s,H), 4.69(s,H), 4.84(d,1H,0.75), 4.85(d,1H,1.2)；13CNMR (ACETONE-d6)ppm: 20.7, 23.14, 45.6, 50.0, 50.4, 51.8, 52.0, 60.2, 61.0, 65.9, 72.4, 77.9, 84.4, 110.9, 142.9, 176.0；示结构中含有内酯及环状结构；由于

11、晶体较大，符合X-衍射测试要求，故进行了X-衍射测试，晶体呈无色透明块状，属正交晶系，空间群为P212121，经面探仪收集衍射强度数据。应用直接法(SHELXS-86)解析结构，交迭使用最小二乘法和差值Fourier法获得全部非氢原子位置。用最小二乘法修正结构参数，并用几何计算法与差值法获得18个氢原子坐标，最终可靠因子Rf=0.055，Rw=0.050(W=1/F)。确定化合物V为羟基马桑毒素，即Tutin。同文献报道数据1,2,3对照，碳谱、氢谱数据基本一致。化合物8： 白色针晶(丙酮)，mp211213，EI-MS （m/z）: 164(M+, 100), 147, 136, 119,

12、107, 101, 91, 77, 65, 51, 45, 39；1HNMR (ACETONE-d6)ppm：6.33(d, H, J=15.9 Hz), 6.90(d, 2H, J=8.64 Hz), 7.54(d, 2H, J=8.55 Hz), 7.60(d, H, J=15.9 Hz)。确定结构为对羟基桂皮酸(P-coumaric acid)。化合物9： 无色结晶，mp 263265，1HNMR(ACETONE-d6)ppm: 1.07 (s, 3H), 1.37 (s,3H), 1.45 (s,3H), 1.58 (dd,1H, 15.4/3.3), 1.99 (d,1H,15.6)

13、, 2.50 (m,1H), 2.81 (d,1H,4.1), 3.02 (m,1H), 3.03 (d,1H,4.05), 3.18 (d,1H,3.03), 3.71 (d,1H,3.06), 4.85 (m,1H)；经X-衍射实验分析，该结晶属正交晶系，空间群为P212121；晶胞参数为a=6.917(1)、b=13.696(2)、c=14.853(3)A；晶胞体积V=1407.1(4)A3，晶胞内分子数为Z=4，晶体计算密度Dx=1.399 mg/m3。用DIP-2000K面探仪收集衍射强度数据，在微机上用直接法(SHELXS-86)解析分子结构（方法均同化合物7），确定该化合物的结构

14、为马桑亭，即Coriatin。 化合物10：淡黄色结晶(水甲醇)，mp 223225, 溴酚兰反应蓝色；EI-MS （m/z）: 180(M+,100), 163, 152, 145, 136, 123, 117, 107, 89, 77, 63；1HNMR(ACETONE-d6)ppm: 6.26(d, 1H, J=15.9 Hz), 6.86(d, 1H, J=8.01 Hz), 7.00(dd, 1H, J1=8.2 Hz, J2=1.68 Hz), 7.16(s, 1H), 7.52(d, 1H, J=15.9 Hz),化合物10结构为咖啡酸(Caffeic acid)。2小结金灯藤的

15、干燥成熟种子中，所含化学成分以有机酸为主，黄酮类成分尚未发现，这与菟丝子的化学成分有着较大的差异。因此，有必要全面地比较研究金灯藤种子与菟丝子化学成分及药理作用的异同。羟基马桑毒素和马桑亭均为马桑内酯类化合物，主要存在于马桑中，在临床上曾被用于治疗精神分裂症，虽有一定的疗效但副反应较大，并且马桑中这类成分的含量较少，在药源的研究中曾发现寄生于马桑上的马桑寄生可以富集此类成分4，这也间接证实了金灯藤在寄生于马桑时而富集马桑内酯类成分的可能性。药理结果表明该类化合物具有神经毒性3，这与菟丝子的功效是矛盾的。因此，以金灯藤的种子作为大菟丝子入药，应当慎重。作者简介：郭洪祝,男,30岁,医学博士作者单位：郭洪祝（北京中医药大学中药学院中药鉴定室北京100029）（北京医科大学药学院生药学生物技术研究室;北京 100083）李家实（北京中医药大学中药学院中药鉴定室北京100