高脂血症患者血清抵抗素水平及与补体调节蛋白CD55、CD59表达的关系

1、高脂血症患者血清抵抗素水平及与补体调节蛋白CD55、CD59表达的关系               作者：王燕炯刘永铭滕永军严祥杨正方刘彩成 【摘要】  目的 观察高脂血症患者血清抵抗素与补体调节蛋白的表达的关系。方法 高脂血症患者例，年龄、性别、体重与其匹配的健康对照例，使用酶联免疫法测定空腹血清抵抗素浓度，使用流式细胞仪测定外周血白细胞、的表达。结果 高脂血症患者空腹血清抵抗素浓度较正常对照增高(P005)，女性血清抵抗素浓度高于男性(P005)，抵抗

2、素与血清总胆固醇明显正相关(r=0297，P005)，与体重指数、腰臀比、血糖均无相关性，与补体调节蛋白CD55、CD59阳性细胞平均荧光强度及百分率亦无相关性。多元回归分析腰臀比是CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度的独立预测因子，腰围是CD55阳性单核细胞百分率的独立预测因子。结论 高脂血症患者空腹血清抵抗素浓度增高，有性别差异，且与血清总胆固醇明显正相关，提示抵抗素可能参与脂代谢紊乱。高脂血症者补体调节蛋白表达下调，且与腰臀比、腰围密切负相关，提示肥胖，特别是中心型肥胖可影响补体调节蛋白的表达。空腹血清抵抗素与补体调节蛋白CD55、CD59表达无相关性，是否有其他脂肪细胞因子参与影响补体调节

3、蛋白的表达有待进一步研究。 【关键词】  高脂血症；抵抗素；补体调节蛋白CD55、CD59动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症1。 补体系统参与了AS的发生、发展 2。近几年研究表明抵抗素与炎症及AS的发生发展也存在一定联系。高脂血症是AS的重要危险因素。我们在近几年的研究中发现高脂血症患者CD55表达下调，CD55与腰围、 腰臀比值呈负相关3。提示脂肪因子可能参与CD55表达的调节，CD55表达下调降低组织细胞对补体活化的抑制，可加重炎症反应。脂肪组织是否通过影响补体系统而参与AS，目前尚不清楚。本文通过高脂血症患者抵抗素表达及其与补体调节蛋白关系研究，进一步探讨抵抗素是否参与脂代谢

4、及其是否通过参与补体系统而影响AS的发生、发展。1 资料与方法11研究对象      高脂血症患者50例，为2005年6月2006年1月门诊及住院患者，其中高胆固醇血症22例，混合型高脂血症15例，高甘油三酯血症13 例，男25例，女25 例。年龄、性别、身高、体重相匹配的健康人21例作为对照组。入选标准：高脂血症诊断标准参照1997年我国制订的血脂异常防治建议，血清总胆固醇(TC) 572 mmol/L 和(或)甘油三酯(TG) 170 mmol/L 作为入选条件。不同日期血脂达上述标准2次以上可入选。排除标准：肝肾疾病、甲状腺功能

5、低下等引起的继发性高脂血症；有明确自身免疫性疾病者；1个月内有严重感染、手术和外伤史；慢性感染性疾病患者；急性冠状动脉综合征患者、半年内有急性心肌梗死或脑卒中病史者；严重肝肾功能不全、恶性肿瘤患者；就诊时已使用他汀类药物治疗者（但不包括曾使用汀类药物而在就诊时已自动停药2个月以上者）。12 标本的采集与处理      空腹12 h以上，取肘静脉血，分离血清，当日送检血脂及补体调节蛋白，其余血清置-80冰箱保存以备测定血清抵抗素。记录入选对象的年龄、身高、体重、腰围、臀围、血压、腰/ 臀比值,通过公式计算。体重指数(BMI) = 体重/

6、身高2（kg/m2) 。13 实验室方法131 血脂检测      采用酶法，使用美国Beckman Coulter公司LX20 全自动生化分析仪测定。TC 采用CHODPAP 法，测定值批内变异系数(CV) 30%，批间变异系数 45%。甘油三酯( TG) 采用GPOPAP 法，测定值批内变异系数 25%，批间变异系数 30%。TC、TG试剂购自广州标佳科技有限公司。低密度脂蛋白胆固醇(LDLC) 采用直接法，测定值批内及批间变异系数均 50%，试剂购自美国Gcell 公司。高密度脂蛋白胆固醇(HDLC) 采用直接法,测定值批内变异

7、系数 40%，批间变异系数50%，试剂购自英国Randox 公司。高脂血症患者血脂水平检测应有二次结果方可确诊。132 血清抵抗素检测      受试者空腹血清测定。采用酶联免疫法，试剂购自美国R&D公司，批号：228881，批内变异系数53%，批间变异系数92%，最小测定值:0026 ng/ml。133 白细胞补体调节蛋白检测      采用全血流式法。空腹取肘静脉血2 ml，置含依地酸二钠的真空采血器，取血后30 min 内开始测定。将鼠抗入CD55PE、CD59

8、FITC 单克隆抗体及阴性对照抗体10 l 分别加入标记的试管中，每管中加入100l新鲜抗凝全血，震荡混匀后室温避光反应15 min，然后用全自动全血细胞制备仪裂解红细胞，最后用流式细胞仪检测CD 分子平均荧光强度及阳性细胞百分率。流式细胞仪为美国CoulterEPICSXL型，补体调节蛋白CD55、CD59 单抗购自美国Caltag Laboratories公司。14 统计学处理      采用SPSS100统计软件进行统计分析。计量资料用x±s表示，两组间比较用独立样本t检验，指标间的关系用直线相关分析、偏相关及多元回归

9、分析。2 结果21 临床资料      高脂血症组腰围、腰臀比值、TC、TG、LDLC、HDLC、 Lp（a）、oxLDLC高于对照组，年龄、身高、体重、体重指数、臀围、收缩压、舒张压、空腹血糖等两组间差异无统计学意义（见表1）。表1 两组一般临床资料(略)22 血清抵抗素的表达及相关因素分析      高脂血症患者空腹血清抵抗素浓度（1352±641 ng/ml）高于正常对照组（957±486 ng/ml）,两组间差异显着(P005)。女性空腹血清抵抗素浓度（14

10、18±735 ng/ml） 高于男性（1057±432 ng/ml），差异有统计学意义（P005）。所有病例（n=50+21）相关分析显示：血清抵抗素浓度与TC呈明显正相关(r=0297，P005)，与腰围负相关，与体重指数、腰臀比、血压、血糖、年龄均无相关性。偏相关分析：所有病例控制性别后，血清抵抗素浓度与TC仍显着正相关，与腰围无相关性。控制腰围与性别后，血清抵抗素浓度与TC依然显着正相关。多元逐步回归分析：空腹血清抵抗素浓度是影响血清总胆固醇的独立因素,回归方程:TC=4969+0075×血清抵抗素浓度，标准化回归系数为0297。23 补体调节蛋白 CD55

11、、CD59的表达及影响因素分析     高脂血症组CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度及百分率均低于对照组（P005），CD59阳性粒细胞百分率低于对照组（P005），（见表2，表3）。所有病例男性CD59阳性淋巴细胞百分率（6242±1210）低于女性(6820±870)，P=0024，差异有统计学意义。直线相关分析（n=50+21）显示：CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度与体重指数（r=-0238，P=0045）、腰围（r=-0253，P=0033）、腰臀比(r=-0325，P=0006)负相关，CD55阳性单核细胞的百分率与体重指数（

12、r=-0361，P=0002）、腰围（r=-0338，P=0004）、腰臀比(r=-0301，P=0011)负相关。CD59与上述指标无相关性。CD55、CD59与血脂、血糖、血压、年龄无相关性。同一CD分子（CD55或CD59）在不同细胞（淋巴细胞、单核细胞、粒细胞）的表达强度有明显相关性（r=04220970，P均0000 1）。多元回归分析CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度=34401516×腰臀比，标准化回归系数为（-0325）。CD55阳性单核细胞百分率=1342450592×腰围，标准化回归系数为（-0338）。表2  两组患者白细胞补体调节蛋白CD55

13、、CD59平均荧光强度（略）表3  两组患者白细胞补体调节蛋白阳性细胞百分率的变化（略）24 抵抗素与补体调节蛋白CD55、CD59相关性分析     所有病例（n=50+21）直线相关分析，血清抵抗素与补体调节蛋白CD55、CD59阳性细胞平均荧光强度及百分率均无相关性。3 讨 论           抵抗素，是由Steppan等4在小鼠体内发现的一种多肽类蛋白质，利用逆转录PCR技术证实人类抵抗素与小鼠抵抗素具有高度同源性5。 目前抵抗素的生

14、理功能还不是十分确切，起初人们认为，抵抗素可能联系着肥胖及胰岛素抵抗4，但近几年有研究表明抵抗素并不是联系肥胖和胰岛素抵抗的主要纽带6。本研究也发现，高脂血症患者空腹血清抵抗素浓度与体重指数、腰围、腰臀比等肥胖（特别是中心型肥胖）指标没有明显的关系，与LEE研究结果6一致。抵抗素是否在肥胖及胰岛素抵抗中起主要作用值得进一步研究。                    目前，国内外关于抵抗素与血脂的研究结果尚存在分歧。

15、Jove研究7发现人抵抗素mRNA水平与TC呈负相关，也有研究认为血清抵抗素与血脂各成分均无相关性6。我们此次研究发现空腹血清抵抗素水平与血清总胆固醇浓度呈显着正相关，且不受其他因素影响，多元逐步回归分析血清抵抗素是影响TC的独立影响因素，与上述结果不一致。但以上结果均提示抵抗素可能参与脂代谢的调节，抵抗素参与血脂代谢的机制目前尚不明确，有待进一步研究。           高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素，近几年研究表明抵抗素与炎症及动脉粥样硬化的发生发展也存在一定联系。抵抗素在鼠和人动脉

16、粥 样硬化斑块有阳性表达，并且抵抗素mRNA的表达水平在鼠的主动脉粥样硬化进展期斑块中显着增加8,9。抵抗素还可导致血管内皮细胞功能紊乱10，刺激内皮素1、各种黏附分子和化学因子表达增加11，促进血管平滑肌细胞迁移增殖12，激活炎症通路13。我们在此次研究中发现高脂血症患者，空腹血清抵抗素水平明显高于正常对照组，且与血清总胆固醇浓度呈显着正相关，进一步提示抵抗素参与脂代谢的调节并有可能参与动脉粥样硬化的发展过程。           Gui14等发现 ，雌性鼠较雄性鼠抵抗素m表达增加，Nogue

17、iras15在大鼠体内也发现抵抗素的表达受性别、性激素的影响，认为与抵抗素基因表达的二重性有关。我们也发现，女性组抵抗素浓度高于男性，与LEE6结果一致，提示抵抗素表达受性别影响。           目前认为动脉粥样硬化是一种慢性炎症，以动脉管壁单核细胞、淋巴细胞浸润、泡沫细胞形成、脂质沉积和钙化为特点。补体系统是固有免疫的组成部分，是炎症反应的重要介质和效应分子。大量证据表明，补体参与动脉粥样硬化发生、发展的整个过程，补体活化也是缺血再灌注损伤 和糖尿病大小血管并 发症的重要原因16,17。

18、补体系统组成的多样性和补体调节蛋白的存在为动脉粥样硬化的防治提供了多个潜在的干预靶点。补体活化受补体调节蛋白的调控，CD55、CD59是重要的膜结合补体调节蛋白，在内皮细胞、血细胞、神经细胞等多种组织细胞表达。CD55又称衰变加速因子，抑制C3、C5转化酶的形成，防止补体活化；CD59又称保护素，阻碍C7、C8与C5b6的结合，抑制C5b9形成，从而防止自身组织受到补体活化的损伤。我们在近年来研究中发现，高脂血症患者补体调节蛋白CD55表达下调3，CD55表达强度与体重指数、腰臀比值负相关，腰臀比值是CD55表达的预测因素。我们在此次研究中更进一步证实了以上结果，高脂血症组CD55阳性淋巴细胞

19、平均荧光强度及百分率均低于对照组，CD59阳性粒细胞百分率低于对照组，腰臀比、腰围分别是CD55阳性淋巴细胞平均荧光强度、CD55阳性单核细胞百分率的显着预测指标。以上结果提示肥胖尤其是腹型肥胖可能抑制补体调节蛋白CD55的表达。脂肪细胞 是非常重要的内分泌器官18，释放大量的生物活性分子，如TNF、IL6、FFA、瘦素、脂联素、抵抗素、纤溶酶原激活物抑制1（PAI1）等，上述脂肪因子不仅仅在胰岛素抵抗的发病有显着的作用，而且还是重要的血管活性因子，直接影响内皮功能和血管健康。脂肪因子直接影响血管平衡的能力，可能是代谢综合症病人心血管疾病的重要基础机制。然而在此次研究中，我们并未发现空腹血清抵

20、抗素浓度与补体调节蛋白CD55、CD59表达有相关性，抵抗素可能没有影响CD55、CD59的表达，但其是否影响补体系统的其他成分以及其他脂肪细胞特异因子如脂联素（adiponectin）、瘦素（leptin）等参与补体调节蛋白的表达还有待进一步研究。【参考文献】  1 Bin S,Wu ZGInflammation and AtherosclerosisJCardiology Development，2004；25(1)：2 刘永铭,严祥,刘艳英,等补体与动脉粥样硬化J中华心血管病杂志,2005；33：86693 刘永铭,何津春,杨京港,等阿托伐他汀对高脂血症患者补体调节蛋白CD55

21、、CD59表达的影响J中华心血管病杂志,2005;33:107594 Steppan CM，Bailey ST，Bhat S,et alThe hormone resistin links obesity to diabetesJNature，2001;109(18)：307125 Teppan CM，Lazar MAResistin and obesityassociated insulin resistanceJTrends Endocrinol Metab,2002;13:18236 Lee JH，Chan JL，Yiannakouris N,et alCirculating resis

22、tin levels are not associated with obesity or insulin resistance in humans and are not regulated by fasting or leptin administration：crosssectional and interventional studies in normal，insulinresistant，and diabetic subjectsJJ Clin Endocrinol Metab，2003;88:4848567 Jove M,Planavila A,Cabrero A,et alRe

23、ductions in plasma cholesterol levels after fenofibrate treatment are negatively correlated with resistin expression in human adipose tissueJMetabolism，2003；(3):35158 Burnett MS,Lee CW,Kinnair TD,et alThe potential role of resistin in atherogenesisJAtherosclerosis,2005;182(2):24189 Jung HS，Park KH，Cho YM,et alResistin is secreted from macrophages in atheromas and promotes atherosclerosisJCa