葡萄酒中9种有机酸RPHPLC检测体系的相关研究

1、中国农业大学硕士学位论文葡萄和葡萄酒中9种有机酸RP-HPLC检测体系的建立及其相关研究姓名：段云涛申请学位级别：硕士专业：食品生物技术指导教师：黄卫东;潘秋红20070601摘要本研究以葡萄酒，冰酒和葡萄果实为试材，研究和建立了一种新的、同时准确测定葡萄酒和葡萄果实中种有机酸的反相高效液相色谱分析方法，并应用该方法，检测了种不同类型的澳洲千红葡萄酒、种国内外不同类型冰酒的有机酸含量，分析比较了赤霞珠（）和霞多丽（皿）两个主要酿酒葡萄品种果实成熟过程与赤霞珠（）和北醇（）两个酿酒葡萄品种的葡萄酒发醇过程中种有机酸的动态变化结果表明：葡萄酒中的有机酸主要以苹果酸，酒石酸、巍酸、乙酸种有机酸的含量

2、较高。种澳洲干红葡萄酒之间，以有机酸总含量最高，并且主要贡献者为乳酸，釉有机酸含量最低。在检测的种国内外冰酒中。以长白山冰酒有机酸总含量最高，主要贡献者为卜苹果酸，龙域有机酸含量虽低试验中还对澳溯干红、国内井冰酒中有机酸含量进行了主成分分析（）与线形判别分析（）在赤霞珠和霞多丽葡萄果实发育过程中，苹果酸从开始逐渐上升，到第达最大值，尔后逐渐下降；滔石酸从开始含量便一直呈逐渐下降趋势，至发育结束；草酸、丙酮酸、一抗坏血酸、一乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸种有机酸无明显变化，并且含量很少在赤霞珠和北醇干红葡萄酒发酵过程中，草酸、丙酮酸、抗坏血酸，乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸等种种有机酸均无明显变化。在赤

3、霞珠（）阳北醇（）发酵过程中，苹果酸和酒石酸含量前呈逐渐下降趋势，此后无明显变化，至酒精发酵结束。关键词：反相高效液相色谱，有机酸，葡萄，葡萄酒，冰酒（）（，）（）垂，：，（）、撕（竹出）（出），正，：邸，图表清单图有机酸代谢图瑁图葡萄酒中主要有机酸分子结构图有机酸抗菌作用模式图表种有机酸混标含量表种有机酸紫外最佳吸收峰）图种标准有机酸色谱图（）图色谱图（）图磕萄酒样品色谱图（）（）图葡萄酒样品色谱图（）（），图葡萄采实样品色谱图（）（）图葡萄果实样品色谱图（）（）表种有机酸的保留时间和回归方程、检测限虹，表葡萄酒样品种有机酸精密度和加标回收试验分析（）表葡萄果实样品种有机酸精密度和加标回收试

4、验分析（）（）表葡萄酒样品重复性试验（）（；）表葡萄果实样品重复性试验（）（）表国内外冰酒样品信息表澳洲干红葡萄酒样品信息表澳洲干红葡萄酒有机酸含量且呻路表国内外冰酒样品有机酸含量，表干红葡萄酒中各个有机酸相关系数矩阵表干红葡萄洒有机酸主成分提取方差分解变化分析目图干红葡萄酒有机酸主成分碎石图表干红葡萄酒有机酸主成分分析初始因子载荷矩阵图有机酸主成分图）弘证血“表种类型的澳洲干红葡萄酒新变量数据协图种类型的澳洲干红主成分图缸表冰酒中各个有机酸相关系数矩阵表冰酒有机酸有机酸主成分提取方差分解变化分析钔嗽图冰酒有机酸主成分碎石图越表冰酒有机酸主成分分析初始因子载荷矩阵出血表国内外冰酒新变量数据砒图

5、种类型的国内外冰酒主成分图￥表基于不同酒庄澳洲干红判别因子特征值表基于不同酒庄澳洲干红有机酸判别因子载荷表基于不同酒庄澳洲干红葡萄酒分类，图赤霞珠生长发育过程中种有机酸变化规律凼（）图霞多丽生长发育过程中种有机酸变化规律（）图”霞多丽与赤霞珠葡萄总有机酸变化比较图赤霞珠干红葡萄酒发酵期间糖度、温度变化（）图赤霞珠干红葡萄酒发酵过程中种有机酸变化规律（）图北醇干红葡萄酒发酵过程中种有机酸变化规律）图北醇与赤霞珠酿造期间总有机酸变化比较独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研

6、究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名。段丢尚时间：勿眵年占月心日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：彰琢有导师签时间：叼年莎月压日时间：中国农业大学硕士论文第一章文献综述第一章文献综述有机

7、酸是一类含有羧基的化学物质，通常在果实生长过程中积累，在成熟过程中作为糖酵解、三羧酸循环（循环）等呼吸基质，以及糖原异生作用基质而被消耗在植物体内，有机酸不仅可以作为植物碳元素代谢的媒介，而且在一些植物应对养分缺乏，金属胁迫以及根一土界面中操纵植物微生物间的交互作用方面都发挥着关键作用（等，）。大量研究表明，有机酸具有抑菌、抗病毒、增加冠脉流量、抑制脑组织脂质过氧化物生成、消炎、抗突变、抗癌、软化血管，促进钙、铁元素的吸收、帮助胃液消化脂肪和蛋白质等生理功能（，；等。）葡萄与葡萄酒中的有机酸主要包括酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸等有机酸是葡萄酒中重要的里味物质，是葡萄酒酸度的主要决定因素

8、。有机酸的种类、含量和比例调节着酸碱平衡，影响着葡萄酒的口感、色泽及生物稳定性（，和，）而葡萄酒中的有机酸主要来自于葡萄果实与发酵过程因此建立灵敏、准确的有机酸分析方法对于评价葡萄酒的营养价值、口感风味和研究葡萄酒的生物功能都具有重要的理论和实际意义植物体内有机酸的代谢和作用植物组织的一个重要特性是它的有机酸总体含量较高。在不同的物种和不同的栽培方式下，植物有机酸含量水平不同，甚至在相同的生长条件下，同一植物的不同组织问有机酸含量也有差异。此外，为了应对环境的压力，有机酸的生物合成、积累、根部捧泄和运输水平也有显著的增圭（等，）田卜有机酸代谢图（等，）培如忸有机酸的新陈代谢是一些生化反应路径在

9、细胞水平的重要化学反应，包括产生能量，氨基酸生物合成前体物质的形成和在植物水平的调节以适应环境。如图卜所示，植物在呼吸过程中，通过循环形成的一系列有机酸，将电子转移给氧化型辅酶和，形成、和这一系列的有机酸主要包括：丙酮酸、柠檬酸、异柠檬酸、一酮戊二酸、琥珀酸、延胡索酸、苹果酸、草酰乙酸等。有机酸主要在线粒体中产生，一部分作为乙醛酸循环体，参与乙醛酸循环。有机酸只在线粒体中少量存在，而在液泡中储存（，）植物组织中确定有机酸的积累或从根部的捧出与它们特定的生化功能是相一致的（等，中目农业大学硕十论文第一章文献综述）有机酸存在于线粒体和液泡中并不断进行着交换从过量产生柠檬酸盐的转基因植物中可以看出，

10、草酰乙酸盐和乙酰辅酶同时存在与细胞质中，它们参与了柠檬酸盐的生成（等，岫有机酸既可以在液泡中积累，也可以由特定的蛋白质载体转运到非原质体中，将其运输到植物韧皮部进而从根部捧泄到体外（等，）等（）报道葡萄浆果着色成熟期，果实呼吸商增大为，表明此时以苹果酸为呼吸底物进行氧化脱羧。成熟果实中有机酸含量的多寡是有机酸在果实中合成，液泡贮存和转移的一种平衡结果（等，）（）根据对酸来檬（折自和妇）果实中有机酸的不断增加和蔗糖不断降解过程中并未伴随己糖的积累，推测上述代谢变化与细胞壁的形成、转化，果实的呼吸作用，芳香物质、油性物质的形成等有关果实有机酸代谢是一个极为复杂的过程，有机酸含量的高低是内在的遗传特

11、性、外在的自然环境和栽培措施等因素共同作用的结果虽然人们对果实有机酸的来源、有机酸酶在细胞内的分布，果实发育过程中有机酸含量及相关酶活性的动态变化等已有一定的认识，但还有许多方面尚不清楚。尚待人们进一步的研究葡萄与葡萄酒中的有机酸葡萄与葡萄酒中主要有机酸概述葡萄在生长发育过程中，总有机酸含量逐渐升高，生长停止转入成熟阶段，有机酸含量下降（等，；等，）高温可以促进葡萄呼吸代谢，蚺酉石酸是葡萄中的主要酸，它对这种呼吸代谢作用有抗性，而含量位于第二位的“苹果酸则没有这种抗性（等，）在酒石酸与苹果酸的比例中，早期酒石酸的比例较大，而在成熟的开始和初期阶段随着苹果酸的上升而下降，然后在成熟期的最后阶段这

12、个比例又重新上升（等，）葡萄酒中主要有机酸（酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸）分子结构如图：中国农业大学硕十论文第一章文献综述：十。号。一酒石酸刊洲一占一吨苹果馥乳酸柠檬酸一占一琥珀酸臂。乙酸一田葡萄酒中主要有机酸分子结构图酒石酸（）又名葡萄酸，它是葡萄和葡萄酒中的主要有机酸，也是葡萄的特征酸酒石酸是抗葡萄果实呼吸氧化作用和抗酒中细菌作用的酸类，对葡萄着色与抗病有重要作用。葡萄酒中酒石酸含量为，葡萄酒的大部分取决于酒石酸的含量它的浓度主要取决于合成作用，即品种特性及采收时果实的大小等（）发现葡萄中存在的酒石酸的异构体是（）型。是葡萄耱经过半乳糖醛酸、葡萄耱醛酸、抗坏盘酸等合成的髓着时

13、问的推移，葡萄酒中部分酒石酸与乙醇酯化成二酒石酸乙酯。等（）用模拟系统研究了葡萄汁和葡萄酒中存在的主要有机酸的缓冲能力对由酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸单一地或以，种酸以相同体积浓度混合的水溶液和乙醇溶液的缓冲能力进行研究得出：单一酸水溶液的缓冲能力较乙醇溶液高，其中酒石酸的缓冲能力最高苹果酸（）是葡萄果实中自然形成的有机酸之一葡萄中存在的苹果酸的异构体是（）型，由葡萄糖经丙酮酸合成（等，）苹果酸含量随葡萄品种以及成熟期温度条件引起的呼吸作用的不同而有很大变化，它的最终浓度也受浆果大小的影响。分析葡萄果实、葡萄汁、发酵液及葡萄酒的苹果酸含量可以帮助判断葡萄果实的成熟情况，成品酒质的优劣情况等（

14、，和，）。等（）在对个葡萄酒样品的有机酸组成进行测定后得出：苹果酸与乳酸，乙酸和琥珀酸呈负相关，而与酒石酸，总酸和苹果酸，酒石酸呈正相关，这说明苹果酸在葡萄酒有机酸组成中起着重要的作用在果粒成熟过程中细胞呼吸作用可以引起葡萄果实中苹果酸的减少，苹乳发酵过程也可引起葡萄酒中苹果酸的减少或消失（等，）苹果酸通过苹果酸乳酸发酵，几乎能完全转化成乳酸。它的钙盐的溶解度很小，在碳酸钙处理和酵母发酵过程中可部分除去（，）。柠檬酸（）是葡萄酒的一种正常组分不论生青葡萄或者成熟葡萄，都含有柠檬酸。纯粹的酒精发酵作用也经常形成小量的柠檬酸，其含量可达葡萄酒中柠檬酸的含量变化很大，相差倍到倍。红葡萄酒含有的柠檬酸

15、往往少于白葡萄酒的含量，这是因为中国农业大学碗十论文第一章文献综述当细菌使红葡萄酒发生苹果酸乳酸发酵作用的同时，会平行地消耗现存的柠檬酸，消耗率几乎达到全部柠檬酸含量的程度许多乳酸菌可以发酵柠檬酸，使其变成醋酸琥珀酸（）主要来自葡萄酒中糖分子的发酵作用。极少量则来自葡萄汁所含谷氨酸的变化。是酒精发酵的一种正常剐产物。谷氨酸的存在以及脯氨酸的含量减少都会增加琥珀酸的含量谷氨酸生成琥珀酸是通过一系列氧化作用完成的即谷氨酸“酮戊二酸一琥珀酰琥珀酸琥珀酸在葡萄酒中是比较稳定的，可溶于水及酒精，能抵抗细菌性发酵的破坏作用琥珀酸的味很复杂，既酸又苦，能参加酒味的形成，这是葡萄酒所含有机酸类中最富于味觉反应

16、的一种酸。乙酸（）是葡萄酒酿造，储存过程的“晴雨表”，其含量过高表明已感染细菌病害，是管理不良的标志（，和，）等（）发现冰酒中有可能含有高浓度的乙酸，这是葡萄汁中高糖度产生的商渗透压影响酵母而使其生成的副产物。乳酸（）是葡萄酒二次发酵阶段的苹果酸乳酸发酵产生的，它在葡萄酒中的浓度范围为几由于乳酸的酸味比苹果酸低很多，同时稳定性高，所以乳酸发酵可使葡萄酒酸度降低且使酒体更加稳定，不易变质（等。）葡萄酒发酵过程中主要有机酸的变化在葡萄酒发酵过程中酒石酸是不会被代谢的，但是大量的酒石酸会由于酒石酸氢钾的沉淀作用而失去等（）将放射性标记元素用于加汽葡萄酒生产过程中酒石酸代谢物生成途径时发现有来源于酒石

17、酸中标记的在其他化合物中被发现，并在有机酸片段中发现有高活性，特别是苹果酸中。还在中被发现，并在酮酸中有少量发现。这表明对于由酵母产生的酒石酸与其新陈代谢引起的其他化合物（尤其是苹果酸）的利用是有可能实现的。同样作为葡萄汁中的主要有机酸，苹果酸不同之处在于既可被酵母代谢，又可被合成。大多数参与葡萄酒酿造的酵母都具有不同程度分解代谢苹果酸的能力。但还没有报道说降解苹果酸超过的（】四等，）柠檬酸在发酵过程中是不会发生非常大的变化的它对葡萄酒风味影响较小，有时作为络合剂加入葡萄汁或酒中，用以吸附一些离子如矿或防止金属凝胶的形成等，）等（）将葡萄汁与葡萄酒中有机酸的高效液相色谱法应用于西班牙加汽葡萄酒

18、，结果显示苹果酸含量从发酵开始时的鲫，在个星期后降为；柠檬酸和酒石酸含量分别从和鲫降为和鲫（）发现与非圆叶葡萄酒中酒石酸和苹果酸占总有机酸含量以上不同，圆叶葡萄酒中酒石酸和琥珀酸是主要酸类。在发酵开始时琥珀酸的含量可以忽略不计，但在发酵末期，它的含量上升到。这个水平可以贯穿整个陈酿期。苹果酸含量在个星期后迅速下降，而酒石酸则是慢慢消失最初酒石酸与苹果酸、琥珀酸、乳酸和柠檬酸的摩尔比分别为：，：。：和；个月后比值变为；：，：和：。在圆叶葡萄酒的酿造过程中，琥珀酸的出现使得总的有机酸含量增加。有机酸与人体健康中国农业大学硬十论文第一章文献综述由于某些由天然成分组成的有机酸（甲酸、乙酸，丙酸、丁酸、

19、乳酸、山梨酸、延胡羧酸、苹果酸、酒石酸和柠椽酸等）及其相应的盐能够存在于人体内。并发挥类似于抗生素添加剂的预防疾病和促进生长作用，它们逐渐受到人们的密切关注（等，：等，）有机酸能够抑制胃肠道细苗对可利用养分的竞争作用和减少可能的细菌代谢产物的毒性作用还能够抑制胃肠道中潜在病原菌（大肠杆菌和沙门氏菌）的定植和繁殖，从而有益于人体的健康研究认为，无论是来源于肠道的微生物发酵还是外源性的添加，有机酸都有着重要的抗菌效果（等，）妣等（）报道，一些研究已经表明。在没有明显降低胃肠道值的情况下，有机酸有较强的杀苗作用有机酸除可通过降低肠道值而影响微生物等（）研究认为，仅非解离的有机酸（非离子化）才能产生明

20、显的抗菌效果，解离形式的有机酸即使是很大的浓度也没有理想的抗菌效果但是有机酸阴离子还具有独特的杀菌功能，大量阴离子在胞内积聚，从而改变胞内的渗透，而造成细菌中毒，如糖酵解和核酸合成的停止，酶解反应受阻，膜转导紊乱等（等，）和（）研究发现有机酸的抗菌效果随着有机酸碳链的增长和不饱和度的增加而增强挥发性有机酸和非挥发性有机酸及无机酸的抗菌效果存在明显差异，挥发性有机酸（甲酸，丙酸、丁酸）具有较好的杀菌作用。直接扩散进入细胞内，通过降低细胞内值，抑制某些大分子如，、蛋白质或脂类等细胞膜的组成成分的代谢，破坏病原苗细胞膜的完整性，从而达到杀菌作用（等，）；非挥发性有机酸（如乳酸）和无机酸（如磷酸）具有

21、显著的抑菌作用，由于这些酸化剂通过降低病原菌细胞间质的值，破坏病原菌渗透压体系，阻止细胞正常繁殖，从而阻止病原菌的发育和生长（等，）如图，等（）总结了有机酸的作用模式：破坏细菌细胞膜，抻制细菌的基础代谢功能，调节细菌内的值和有毒阴离子在细菌内的聚集。圈有机酸抗蓝作用模式图等（）及以上的乙酸对半数指示菌有抑制作用，既包括革兰阳性菌（蜡样芽胞杆菌），也包括革兰阴性菌（志贺痢疾杆菌和大肠埃希菌）乳酸，乙酸和乳酸混合物，乙酸和乳酸混合物对种指示菌均有抑制（等，）。丙酸能够有效抑制霉菌，是有机酸中对霉菌抑制效果最广的：甲酸能够减少细菌和酵母菌的产生：甲酸和丙酸对沙门氏菌、芽孢杆菌有较强抑制作用；延胡索酸

22、能杀死大肠杆菌、葡糖球菌、链球菌；乳酸可杀灭某些病毒和革兰氏阴性菌延胡索酸能够保护饲料免受细菌和真菌的破坏且能够减少胃肠道中的有害菌如大肠杆菌（等，中国农业大学硕十论文第一章文献综述）葡萄与葡萄酒中有机酸的分析测定方法葡萄酒和葡萄汁中有机酸的测定是很重要的这是因为它们对葡萄饮料的感官特性（味道、色泽和香气），稳定性和微生物控制有很大的影响这些有机酸的分析可以确定葡萄的成熟度，控制葡萄酒制作过程中不同时期的酸度（酒精发酵时期，苹乳发酵时期陈酿时期，等等）（，幂，）葡萄酒中的有机酸主要来源于葡萄汁（酒石酸，柠檬酸和苹果酸）和发酵过程（琥珀酸乳酸和乙酸）（等，）此外，葡萄酒中还含有一些低含量的有机酸

23、，比如半乳糖醛酸，葡萄糖酸，顺式苹果酸，甘油酸，丙酮酸，酮戊二酸等（等。）这些有机酸由于提供了酒中酸度的变化，因而对于葡萄酒的变化和腐败检测也有重要作用，例如，一些葡萄酒的变化与酒体中乙酸和乳酸水平有直接关系（，和，）有机酸的检测方法有很多种，包括分光光度计法、酶法、薄层色谱法，气相色谱法、液相色谱法、高效液相色谱法，离子色谱法，电泳法等分光光度计法基于有机酸与一已确定物质的反应，使其生成可在特定波段检测到的复合物或着色化合物。为了避免其它物质的干扰，有机酸常常用沉淀，离子交换树脂等方法分离。（。）用分光光度计法测定了酒石酸、苹果酸和乳酸其他检测酒石酸的方法以（）的方法为基础也得到了发展（等，

24、），但这些方法都非常单调，而且尚未见到用该方法检测一些重要有机酸如琥珀酸，柠檬酸或乙酸的报告。酶化学法大多数用于葡萄酒与葡萄汁中苹果酸、乳酸和柠檬酸的定量分析（，）。尽管如此，此法也可用于其他酸的检测，如酒石酸、乙酸、删坏血酸、蚁酸、葡萄糖酸、异柠檬酸、草酸和琥珀酸（，；，）。酶化学法是基于测定酶或酶活性的增加或减少来检测有机酸的，这些酶有自身的吸光区域。一般用分光光度计测其处的吸光值（，）。酶法的主要优点在于它的高特异性，因为用此法使某些酸的。或异构体的检测很容易成为现实但实验中只有一个有机酸被测定，并且耗时，这是酶法的最大缺点近年来。毛细管电泳法已经用来分析不同方面的有机酸如临床样品（和，

25、），食品样品（等，；，；，等，；等，：等，；等，孙；等，：等，：和，；等，）法可以检测大部分的有机酸，如葡萄汁中的酒石酸，苹果酸、柠檬酸和葡萄酒中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸。也可以检测到其他低含量有机酸，如脂肪酸、戊二酸、莽草酸（等，）和富马酸（和，）。等（）以磷酸盐电解液的经直接紫外检测分析了来源于种不同西班牙品牌认证（）的种西班牙红葡萄酒中酒石酸、琥珀酸、乙酸、苹果酸和乳酸。和（）用毛细管层析法测定葡萄酒中的有机酸，此法的准确性要高于化学法。这个方法的主要优点是它的检测速率快，能在一个样品中检测出几乎所有的基本酸。毛细管电泳法（）有很多技术上的优点，如简单操作、自动化、分

26、析时间短、试剂和样品的低成本消耗。样品前处理简单也是毛细管电泳法（）的优点之一，这是因为该技术对于复杂化合物即使进行简单前处理也可以分离小分子物质，因此，只中国农业大学硕十论文第一章文献综述有对样品进行稀释和过滤是必须的与酶法和色谱法相比，毛细管电泳法的主要缺点是它的低重复性所以有的人用内标或内参化合物来改进其重复性。薄层色谱法（）等）￥此法对葡萄酒和葡萄汁中的酒石酸、苹果酸、乳酸、琥珀酸、柠檬酸和顺式苹果酸进行了分离和定性分析和（）￥薄层色谱法（）和气相色谱法（）定性分析了葡萄汁和葡萄酒中的大部分有机酸尽管有高灵敏性和选择性，法也很少用于有机酸的检测大部分短链有机酸是非挥发性的，所以要将其进

27、行衍生过程，如生成三甲基色氨酸衍生物（）（，），甲基醢（等，），乙基酯（，）。由于葡萄酒和葡萄汁中复杂化合物的存在，有机酸衍生化反应前的分离有时是必须的分离采用的方法一般有盐析法（和，）。离子交换树脂（，）和固相萃取法（等，）为了减少样品准备的时问，（）统一了分离和衍生过程：将样品在离子交换树脂中直接酯化现在，有些有机酸可直接进行分析而无须进行衍生化反应，如乙酸、乳酸和苹果酸。（）（）检测了个液体饮料样品（其中包括葡萄汁）中种挥发性短链有机酸。并得到了良好的检测限结果总之，由于本身的高成本和复杂性，用此法进行有机酸的检测是很有限的液相色谱法是检测葡萄酒和葡萄汁中有机酸用的最多的方法（等，），有

28、机酸的分离与定量一般用离子色谱（）或高效液相色谱（）用可以分离和定量分析葡萄酒和葡萄汁中的有机酸。此法的优点在于测定有机酸所表现出来的特异性和灵敏性，由于传导检测器的使用和用此法时糖分的最小干扰。这些方法使得复杂的前处理过程例如提取和分离变得不必要。对法，（）用柱分离和定量分析了没有经过前处理的葡萄汁和葡萄酒样品中的主要有机酸。等（）运用离子律斥色谱法测定了果实中的有机酸和糖分）运用了梯度法分离有机酸离子，用梯度洗脱柱测定了有机酸和无机阴离子测定葡萄酒中有机酸最为成熟的技术就是玎技术它的分离模式与检测方法多种多样，可以根据样品的构成与性质来选择合适的色谱条件（等，；等。柱。）￥梯度洗脱和，；等

29、，）。此法样品的前处理过程可分为两类。第一类处理样品只需要稀释和过滤，第二类处理中样品要经过复杂的操作过程。在检测葡萄汁和葡萄酒中的有机酸时。前处理的主要目的是为了捧除和避免可同有机酸一起洗脱出的糖分和着色剂的干扰。最平常的前处理过程是经过离子交换柱，固相提取和衍生化反应等（）比较了直接进样和用管进行固相萃取两个方法，得出经过稀释和过滤的直接进样法的准确度和重复率要高于固相萃取法。等（）发展了一种完全自动化的样品前处理系统，它在分析前运用，可以除去复合物中大分子和小分子带来的干扰系统运用于葡萄酒和葡萄汁时有良好的重复性和灵敏性关于衍生化前处理。有的用咖基酯进行衍生化检测葡萄汁和葡萄酒中的有机酸

30、（等，）等撇￥苯甲酰甲基酯衍生化检测种有机酸的方法。将样品混合苯甲酰甲基谱图结果都很好溴，再充入丙酮气体加热进行缓冲这个方法很精确，重复率高达，精确度和所得色另一方面，许多分离装置方法得到发展，例如，反向高效液相色谱法、离子交换高效液相色谱法和离子排斥高效液相色谱法。反向高效液相色法是运用最广泛的方法。等（）中国农业大学硕七论文第一章文献综述用此法和检测器测定了葡萄汁中的有机酸，前处理只有稀释和过滤。这是个很简单的方法，但是分析时间较长（）和（瘁用了离子捧斥高效液相色谱法，此法可以直接测定葡萄汁和葡萄酒中的有机酸等（）用高效液相色谱法和傅立叶转换红外检测器测定了葡萄酒中的有机酸、碳水化合物和酒

31、精等）运用高效液相色谱法和电化学检测与光敏二极管检测测定了啤酒中的酚酸和有机酸（）采用固相萃取法进行前处理，用高效液相色谱法和检测与光敏二极管检测测定了！葡萄中的有机酸和酚酸和（运用离子交换高效液相色谱法和两个连接着的检测器（和砌）测定了葡萄汁和葡萄酒中的有机酸（）也用子交换高效液相色谱法和两个连接着的检测器（和）的方法测定有机酸。这种方法的直接进样可以减少时问和降低成本。还可同时测定有机酸、糖分和乙醇和（）比较了用反向高效液相色谱法和离子交换高效液相色谱法测定葡萄汁和葡萄酒中的有机酸，他们推荐用反向高效液相色谱法测定酒石酸、苹果酸和乳酸，用离子交换高效液相色谱法测定柠檬酸和乙酸离子交换分离方

32、法要求有机酸处于离子状态。所以对葡萄汁和葡萄酒拘值有严格的控制要求（）用二重阳离子交换柱而不需样品前处理的如法将有机酸混合物在柏分钟内分离和量化，并且重复率高，可靠稳定，所得结果与蒸馏法和酶分析法相一致等（）用高效液相结合电化学法分析了葡萄酒软木塞中的草酸，此法适合检测残留在软木塞中的草酸等（）用两概反向。柱进行高教液相测定了四种意大利啤酒中的有机酸，有机酸在同一流动相条件下被分离和定性等（）用高效液相色谱法（卸？）与傅立叶转换红外光谱法（）的联用为葡萄酒中大多数物质的检测提供了一种新的可行的直接测定的方法等（）运用一种直接进样的喊分离和测定葡萄酒中含羧基有机酸。所测定的酸经一个反向柱得到分离

33、，再经过稀释后乙酸的冲洗在处进行紫外检测。此法可将酒石酸、苹果酸、乳酸和柠檬酸检测到，并应用于葡萄汁、干红和干白葡萄酒的检测并且不受塘分的干扰。等（）用（）分析柱对来自西班牙北部的红酒进行了反向高效液相色谱法的检测，并发现此品种有高含量的乙醇、丙二酸、乙醛酸、酒石酸和苹果酸。等（）发展了用可见光检测分析柠檬酸，乳酸，苹果酸，草酸和酒石酸的高效液相色谱法，此法可同时适用于牛奶，果汁，软饮料、葡萄酒和啤酒的检测。等（）发展了一种简单快速测定葡萄酒中常见的七种有机酸的法，分析柱为反向（柱，此法适于干红和干白等（）运用（艟测了种不同干白葡萄和葡萄汁中的有机酸分析柱为柱（），保护柱为柱（）。等）用个连接柱子的反向高效液相色谱法和检测器分析了许多葡萄酒样品，样品为直接进样此法得到了较好的结果吼等（）运用了：去和检测，反向柱涂了一层持久的十六烷基氯。葡萄酒样品的前处理为稀释和过滤等（）应用了一个连接着电化学检测器的系统来测定葡萄酒酿造过程中的有机酸含量。总之，分析有机酸不仅简便快速，而且选择性好，准确度高因