商陆总皂苷提取工艺研究[1]

1、性, 便用冰醋酸调节pH, 冰醋酸的浓度分别为0. 2% , 0. 5%, 1. 0%, 最终确定流动相比例为甲醇. 0. 5% 冰醋酸( 60. 40)。笔者在本实验中采用正交实验设计的方法对提取工艺进行了加水量、浸泡时间的考察和煎煮次数以及煎煮时间的优化, 通过试验使得原工艺更加完善科学和可控, 为工艺的稳定提供了保障, 也为本品的药材浸膏和制剂的质量控制提供了基础。 DO I . 10. 3870 /yydb. 2011. 05. 033 参考文献 1 . 周平兰, 夏新华, 欧阳恒, 等. 紫铜消白颗粒的提取工艺研究 J . 医药导报, 2005, 24( 5): 435- 436.

2、2 . 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) M . 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 附录33- 36. 3 . 周浓. 玄参的质量评价及其指纹图谱研究 D . 重庆: 西南大学, 2008: 26- 28. 4 . 王建华, 谢丽华, 刘洪宇, 等. 玄参不同加工中哈巴俄苷与肉桂酸的HPLC 含量测定 J. 中国药学杂志, 2000, 35 ( 6): 375- 379. 5 . 张洪霞, 赵怀清, 巩克民, 等. RP.H PLC 法同时测定玄参中肉桂酸、哈巴酯苷的含量 J. 沈阳药科大学学报, 2006, 23( 8) : 507- 509. 6 . 李振东, 徐位良,

3、 罗娇艳. HPLC法测定玄麦甘桔颗粒中哈巴俄苷与肉桂酸含量 J. 广东药学院学报, 2008, 24( 2): 130- 132. 商陆总皂苷提取工艺研究詹十音(湖北省新华医院药学部, 武汉. 430015) 摘. 要 . 目的. 用正交设计法优化商陆总皂苷提取工艺。方法. 以商陆皂苷A 为考察指标, 通过单因素及L9 ( 34 ) 正交实验优选商陆总皂苷的提取工艺。考察乙醇浓度、浸提时间、提取次数、乙醇用量对商陆皂苷A 含量的影响。结果. 最佳工艺条件为70%乙醇提取3次, 乙醇用量400 mL, 浸提3 h。该结果在验证实验中得到确认。结论. 正交设计优化提取工艺可较好地提取商陆中皂苷类

4、化合物, 适用于商陆总皂苷的提取。 关键词 . 商陆; 商陆皂苷A; 总皂苷; 提取工艺 中图分类号 . R286; R927. 1. . . 文献标识码 . A. . . 文章编号 . 1004- 0781( 2011) 05- 0646- 03 . . 商陆为商陆科植物商陆( Phy tolacca acinosa Roxb. )和垂序商陆(Phy tolacca Americana L. ) 的干燥根, 味苦性寒, 有毒, 归肺、脾、肾、大肠经。功能逐水消肿, 通利二便, 解毒散结, 主治水肿胀满, 二便不利, 痈肿, 疮毒, 为历版.中华人民共和国药典.收载品种 1 。主产于湖北、河南

5、。文献报道商陆根提取物有利尿作用 2 , 煎剂有祛痰作用 3 ; 商陆多糖有免疫调节作用 4.5 和抗肿瘤作用 6 。商陆主要含有三萜皂苷类成分, 笔者未见有商陆总皂苷提取工艺的研究报道。为研究总皂苷的提取工艺, 笔者在本实验中以商陆的主要成分商陆皂苷A 为含量测定的成分, 采用质量型蒸发光散射检测器检测含量, 考察总皂苷的提取工艺。1. 仪器与试药. 1. 1. 仪器. Waters1525高效液相色谱仪, 725型自动进样器; A lltechELSD.2000ES型蒸发光散射检测器。电子分析天平( SHANGPING FA1004, 上海分析仪器厂)。 收稿日期 . 2010- 09-

6、14. 修回日期 . 2010- 10- 06 作者简介 . 詹十音( 1978- ), 女, 湖北武汉人, 药师, 学士, 主要从事医院药学工作。电话: 027 - 65600751, E.m a i:l zsy20071104 yahoo. com. cn。1. 2. 试药. D.101大孔吸附树脂(天津海光化工有限公司)。商陆皂苷A 对照品(湖北省药品检验所提供) , 商陆(本院药剂科提供, 由本院中药师鉴定为Phy tolacca acinosa Roxb. 的根) , 乙腈(天津市科密欧化学试剂公司, 色谱纯) , 其余试剂均为分析纯。2. 方法与结果. 2. 1. 色谱条件. 色谱

7、柱Hypersil ODS 柱( 150 mm . 4. 6mm, 5 .m ) , 流动相为乙腈.水( 70. 30) , 流速1 mL. m in.1, 柱温35 . , ELSD 条件: 漂移管温度60 . , 载气流速2. 0 L. m in.1。2. 2. 对照品溶液的制备. 商陆皂苷A 对照品储备液: 精密称取商陆皂苷A 对照品10. 1 mg置于10 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释, 定容, 制成浓度为1. 01mg. mL.1储备液, 置4 . 冰箱备用。2. 3. 供试品溶液的制备 7 . 称取商陆药材粗粉, 每份50 g, 按正交表设计的提取溶剂、溶剂用量、提取次数和提取

8、时间进行回流提取, 过滤, 浓缩至无醇味, 得浸膏。将浸膏用适量纯化水溶解, 抽滤, 除去难溶性杂质。将滤液通过处理好的D.101大孔吸附树脂柱, 先用纯化水洗涤至流出液近无色, 再用95%乙醇洗脱, 收集洗脱液。. 646. H erald ofMedicine Vo l.30 N o.5M ay 2011减压回收乙醇, 80 . 烘箱干燥得商陆总皂苷, 称质量。精密称取以上干燥产物约0. 2 g, 用甲醇溶解, 并定容至100mL, 用孔径45 .m 微孔滤膜过滤后进样20 .L, 记录峰面积, 代入标准曲线计算含量。2. 4. 系统适应性实验. 取一定浓度的对照品溶液和供试品溶液, 按照

9、. 2. 1.项色谱条件, 各进样20 .L, 记录HPLC 图谱。结果表明商陆皂苷A 与其他杂峰分离良好。商陆皂苷A 的保留时间约为7. 8 m in, 结果见图1。. . 图1. 商陆皂苷A对照品及样品高效液相色谱图. A. 对照品; B. 样品; 1. 商陆皂苷A 2. 5. 标准曲线的绘制. 精密量取商陆皂苷A 对照品储备液2. 0mL, 置于10mL量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 静置, 配制成浓度为202 .g. mL.1的甲醇溶液; 精密取5, 10, 20, 30, 40, 50 .L进样, 按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标, 质量为横坐标, 计算回归方程得标准曲线

10、如下: Y = 276 921X - 13 618 ( r = 0. 999 7)。结果表明商陆皂苷A 的浓度在1. 01 10. 1 .g范围内与峰面积具有良好线性关系。2. 6. 精密度实验. 取浓度为202 .g. mL.1商陆皂苷A 对照品溶液进样, 每次进样20 .L, 重复进样6 次, 测得峰面积。计算得RSD为1. 79%。2. 7. 重复性实验. 取同一批药材6份, 按. 2. 3.项方法制备供试品溶液, 测定商陆皂苷A 的含量, 计算得含量RSD 为2. 05% , 表明该方法重复性好。2. 8 . 稳定性实验. 取商陆供试品溶液, 用孔径0. 45 .m微孔滤膜过滤, 于室

11、温0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 h后分别进样, 记录峰面积并计算RSD, 结果为1. 97%。可见供试品溶液在12 h内稳定。2. 9. 回收率实验. 采用加样回收法, 精密称取0. 75% 商陆药材粉约0. 5 g 6 份, 分别加入浓度为1. 01mg. mL.1标准品溶液1. 5, 1. 5, 3, 3, 4. 5, 4. 5mL, 每个梯度平行2 份; 按照. 2. 3.项制备方法制备供试品溶液, 测定并计算, 结果见表1。平均回收率为99. 73% , RSD= 1. 78%。2. 10. 样品测定. 精密称取商陆药材粉末9份, 每份50 g, 按. 2. 3.项操作,

12、 依法分别制得供试品溶液。各进样20 .L, 按上述色谱条件测定, 记录色谱图, 用标准曲线方程计算样品中商陆皂苷A的含量。2. 11. 正交实验设计. 按照预实验的提取工艺, 经过多次单因素对比实验, 将较重要的影响因素确定为浸提时间、乙醇用量、乙醇浓度和提取次数等4个因素, 每个因素考察3个水平(表2) , 以商陆皂苷A 的含量为考察指标, 用L9 ( 34 )正交表安排实验。见表3。表1. 商陆皂苷A加样回收率实验结果. 药材量/ g 原有量加入量测得量mg 回收率/ % 0. 5 3. 75 1. 52 5. 24 98. 03 0. 5 3. 75 1. 52 5. 23 97. 3

13、7 0. 5 3. 75 3. 03 6. 80 100. 66 0. 5 3. 75 3. 03 6. 83 101. 65 0. 5 3. 75 4. 55 8. 27 99. 34 0. 5 3. 75 4. 55 8. 36 101. 32 表2. 正交实验因素与水平考察表. 水平乙醇浓度( A ) /% 提取次数( B ) 乙醇用量( C) /mL 浸提时间( D) /h 1 60 1 200 1 2 70 2 300 2 3 80 3 400 3 表3. 正交实验设计与结果. 序号A B C D 含量/% 1 1 1 1 1 0. 41 2 1 2 2 2 0. 48 3 1 3

14、3 3 0. 69 4 2 1 2 3 0. 51 5 2 2 3 1 0. 63 6 2 3 1 2 0. 62 7 3 1 3 2 0. 61 8 3 2 1 3 0. 53 9 3 3 2 1 0. 57 K1 1. 58 1. 53 1. 56 1. 61 K2 1. 76 1. 45 1. 56 1. 71 K3 1. 71 1. 88 1. 93 1. 73 R 0. 18 0. 43 0. 37 0. 12 . . A. 乙醇浓度; B. 提取次数; C. 乙醇用量; D. 浸提时间2. 12. 最佳提取条件的确定. 表3中含量的R 值来分析, 影响提取含量的因素排序为B C A

15、 D。说明提取过程中提取次数对商陆皂苷A 的含量影响最大, 乙醇用量对商陆皂苷A 含量的影响也较大。乙醇浓度和浸提时间则影响较小。从K 1、K 2、K 3的数值比较来看, 所得的商陆皂苷A 含量最佳的工艺条件为A2 B3 C3D3。因此, 以商陆皂苷A 含量为指标, 考察商陆中总皂苷地提取工艺, 结果确定最佳提取工艺条件应为: 70%乙醇提取3次, 乙醇用量400mL, 浸提时间3 h。2. 13. 验证实验. 为验证最佳工艺, 取商陆叶粉碎, 过医药导报2011年5月第30卷第5期. 647.内径0. 425mm 筛( 40目筛), 称取50 g, 按照优化后所得最佳提取工艺用乙醇浓度为70

16、%, 提取次数为3次, 乙醇用量为400mL, 浸提时间为3 h。按. 2. 3.项操作, 依法分别制得供试品溶液。各进样20 .L, 按上述色谱条件测定, 记录色谱图, 计算样品中商陆皂苷A 的含量, 结果商陆皂苷A的含量平均值为0. 75%。可知与正交实验表中的最优水平基本一致, 说明本研究所确定的工艺合理。3. 讨论. 参考文献 8, 9中商陆皂苷A 地提取方法有超声提取、乙酸乙酯萃取法等。笔者在以上文献的基础上加以改进, 采用HPLC 法, 以乙醇为溶剂提取商陆中总皂苷, 并用大孔树脂纯化。结果表明, 所得色谱图中商陆皂苷A 的峰可以与其他峰分开而不受干扰。而且本法提取效果较高, 能够

17、作为提取商陆中总皂苷的方法。根据正交实验结果得出用乙醇为溶剂浸提商陆中的总皂苷最佳工艺条件为乙醇浓度为70%, 提取次数为3次, 乙醇用量为400 mL, 浸提时间为3 h。该结果在验证实验中得到确认。说明正交设计优化的提取工艺可较好地提取商陆中皂苷类化合物, 适用于商陆总皂苷的提取。 DO I . 10. 3870 /yydb. 2011. 05. 034 参考文献 1 . 国家药典委员会. 中华人民共和国药典( 一部) M . 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 266. 2 . 赵一, 原思通, 李爱媛. 炮制对商陆毒性和药效的影响 J. 中国中药杂志, 1991, 16( 8):

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