关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC-7901细胞分泌白细胞

1、关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC-7901细胞分泌白细胞介素-8的作用【摘要】目的观察戊己水煎液(太平惠民和剂局方)对幽门螺杆菌(Hpylori)感染的SGC-7901细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的作用。方法将Hpylori接种于SGC-7901细胞,然后加入不同浓度的戊己水煎液,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测SGC-7901细胞分泌细胞因子IL-8的含量。结果戊己水煎液对Hpylori感染的SGC-7901细胞分泌的IL-8含量明显低于对照组,差异有显著性意义(P0.01)。结论戊己水煎液对Hpylori感染的SGC-7901细胞分泌IL-8有抑制作用。【关键词】幽门螺杆

2、菌；戊己水煎液；SGC-7901细胞；白细胞介素-8自1983年澳大利亚学者分离和培养Hpylori以来,人类对Hpylori与胃黏膜疾病的关系进行了广泛深入的研究()。一系列研究结果表明,Hpylori是慢性活动性胃炎的主要致病因素1-2,其引起的炎症反应是致病机制之一3。我国属Hpylori的高感染区,由于化学药物和抗生素的应用,产生了大量的耐药菌株。因此,许多学者从中药中寻求解决的办法。近几年研究显示,运用中药体内外抗Hpylori均有明显的优势,存在很大的潜力。I know no such thing as genius, it is nothing but labour and di

3、ligence. 中药经方戊己丸(太平惠民和剂局方)是传统治疗胃部疾患的良好方剂。在治疗慢性胃炎、消化性溃疡的临床观察中,其疗效早有报道,但是治疗机理尚不十分清楚。本实验欲从体外探讨戊己丸对Hpylori感染性胃部疾患的作用机理(医药学/临床医学论文 )。现报道如下。1实验材料Good counsel never comes too late. 1.1菌株和细胞Throw away the apple because of the core. Hpylori采用国际标准菌株SS1(sydneystrain1),该菌株含有细胞空泡毒素(VacA)和细胞毒素相关基因(CagA)。人胃上皮细胞系SG

4、C-7901细胞引自中南大学湘雅医学院细胞实验中心。1.2药物The love of money is the root of all evil. 戊己水煎液成分取自戊己丸(由黄连、吴茱萸、白芍等比例组成),湖南中医药大学药学院植物药化学分析研究室与药物制剂研究室制备(浓度1g/mL)。抗生素混合液(万古霉素10mg/L,两性酶素B2mg/L,多粘菌素B0.25mg/L)自配。1.3试剂空肠弯曲菌琼脂基础(上海腹泻病控制上海试剂供应研究中心),RPMI1640培养液(美国GIBCO公司),小牛血清(杭州四季青生物制品有限公司),白细胞介素-8(IL-8)试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)。胰蛋

5、白酶、DMSO(美国Difco公司),蛋白质试剂盒(美国Sigma公司)。First try, and then trust. 1.4仪器WMZK-02型厌氧培养箱,浙江义乌冷冻机总厂；X-SB-1A型倒置显微镜,广西梧州光学仪器厂；3111型CO2水套培养箱,美国FORMA公司；TECANSUNRISE型酶标分析仪,奥地利。论文包括学年论文、毕业论文、学位论文、科技论文、成果论文等. 2实验方法Money is a bottomless sea, in which honour, conscience, and truth may be drowned. 2.1Hpylori的活化取0.1m

6、L冻融的Hpylori菌置于改良Skirrow琼脂培养基平板上,涂布均匀,于37微需氧环境(N285%,CO210%,O25%)培养72h。2.2细胞培养God sends fortune to fools. SGC-7901细胞用含20%小牛血清的RPMI1640培养液进行培养,转种时调整细胞的密度(1105个/mL)。2.3白细胞介素-8的测定利用Huang等4-5方法进行。将SGC-7901细胞(1105/mL)加入24孔培养板中,用RPMI1640完全培基培养(含20%小牛血清,加双抗),48h后用Hanks液清洗细胞2次；感染Hpylori：调整Hpylori的浓度,使细胞孔中细菌浓

7、度分别为1104、1105、1106、1107CFU/mL,加入细胞培养孔,4mL/孔。37,微需氧环境培养24h。取出细胞离心,收集上清,用ELISA法测IL-8(按照说明书严格操作),492nm处测得OD值,按照标准曲线得出IL-8的浓度。最后确定Hpylori对SGC-7901细胞的最佳感染浓度。测出感染Hpylori的SGC-7901细胞中IL-8的含量,选择IL-8含量最高的Hpylori浓度作为感染培养细胞的浓度,然后观察药物在不同浓度(1160、1320、1640、11280)下对Hpylori的抑制作用及对IL-8含量的影响。2.4统计学方法测得指标均用xs表示,采用SPSS1

8、1.0进行统计分析。3结果Silence in times of suffering is the best. Death when it comes will have no denial. 4讨论论文分为专题型、论辩型、综述型和综合型四大类 本实验用的Hpylori为标准菌株SS1,结果证实,该菌可以刺激SGC-7901细胞分泌IL-8；将中药戊己水煎液加入感染Hpylori的细胞中,发现该药对Hpylori感染的SGC-7901细胞所分泌IL-8的含量明显降低。转贴于论文教育信息网 目前Hpylori的作用机制尚不十分清楚,但炎症反应是Hpylori感染致病过程中的一个重要环节。其中IL

9、-8显著增加,在黏膜炎症中起着重要作用6-7。目前认为,胃上皮作为与Hpylori相互作用的主要部位是IL-8的一个主要来源。IL-8是Hpylori相关性胃炎发生发展中的一个重要调节因子8-10。MartinGuerrero等11和Kim等12发现,Hpylori感染者胃黏膜IL-8mRNA及蛋白产生显著增加,其增加程度与Hpylori数量等相关。Suzuki13的研究结果与上述研究结果相仿,同时,用IL-8抗体处理黏膜组织后发现有Hpylori感染黏膜对中性粒细胞的趋化能力明显下降,提示IL-8在Hpylori相关性胃肠疾病发病中的作用。张氏等14的研究结果与上述结果相符。同时显示胃窦活动

10、性炎症程度随着胃黏膜内IL-8含量增加而加重,它们之间有显著的相关性。这进一步表明,Hpylori感染诱导IL-8表达增加,加重局部炎症；提示Hpylori在致胃细胞因子表达、炎症迁延中起关键作用。陈氏等15检测Hpylori阳性患儿血清IL-8水平,结果显示,Hpylori患儿组较阴性组血清IL-8水平明显升高,差异有显著性(P0.01)。该结果证实细胞因子IL-8参与了Hpylori感染后的致病过程；Hpylori感染胃黏膜产生的炎症反应损伤与IL-8的过量产生有关。IL-8是一种促炎症因子,能选择性诱导中性粒细胞,T淋巴细胞及嗜碱性粒细胞趋化,属一种C-X-C趋化因子。有资料报道,IL-

11、8的增多与幽门螺杆菌感染具有时间-剂量依赖关系,根除幽门螺杆菌后胃液中IL-8含量急剧下降,胃黏膜中性粒细胞浸润的平均密度也明显降低16。本实验的结果与此报道一致。Hpylori感染引起胃黏膜大量炎性细胞浸润,由多种趋化因子介导,IL-8能将血液循环中的中性粒细胞聚集到炎症局部,从而导致胃黏膜炎症,引起一系列胃肠道症状。The small courtesies sweeten life; the greater ennoble it. 本实验的结果表明,戊己水煎液具有减少因Hpylori导致IL-8增加的作用。这可能是戊己水煎液抑杀Hpylori,减少细胞炎症,使IL-8含量减少(因为所用SS

12、1标准菌株含又细菌毒力岛-CagA,它诱导IL-8的分泌)；也可能是戊己水煎液刺激胃上皮细胞的抗炎症细胞因子分泌,抑制IL-8生成的结果,进而通过抑制胃黏膜细胞IL-8生成,减轻Hpylori对胃黏膜细胞的损伤程度,从而达到治疗Hpylori相关性胃部疾患的目的。Hpylori可以抑制细胞的生长繁殖,而戊己水煎液通过抑杀Hpylori,保护感染细胞不坏死；通过调节感染细胞IL-8分泌量,减少细胞炎症；可能通过保护胃细胞内的脱氢酶等,而使细胞存活率提高。以上实验表明,中药复方戊己水煎液治疗Hpylori相关性胃病有一定的价值,值得进一步探讨。It is a small flock that ha

13、s not a black. 【参考文献】1DooleyCP,CohenH,FitzgibbonsPL,etal.PrevalenceofHelicobacterpyloriinfectionandhistologicgastritisinasymptomaticpersonsJ.NEnglJMed,1998,321：15621566.2BlaserMJ.GastricCampylobacter-likeorganisms,gastritisandpepticulcerdiseaseJ.Gastroenterology,1997,93：371383.3余跃,侯晓华.细胞因子在幽门螺杆菌致病过程

14、中的作用J.国外医学消化系疾病分册,1999,19(2)：7780.4JinzhouHuang,PaulWOtoole,PeterDoig,etal.Simulationofinterleukin-8productioninepithelialcelllinesbyhelicobacterpyloriJ.InfectionandImmunity,1995,63：17321738.5ChiDaeKim,HyunHeeKim,DiWhanHong.Inhibitoryeffectofrebamipideontheneutrophiladherencestimulatedbyconditionalm

15、ediaformhelicobacterpylori-infectedgastricepithelialcellsJ.TheJournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics,1999,288：133138.6丁华,许国铭,纪徐准,等.幽门螺杆菌对胃上皮细胞分泌IL-8的影响J.第二军医大学学报,1998,19(5)：452454.7LiSD,KersulyteD,LindleyIJ,etal.Multiplegenesinthelefthalfofthecagpathogenicityislandofhelicobacterpyloriarere

16、quiredfortyrosineKinase-dependenttranscriptionofinterleukin-8ingastricepithelialcellsJ.InfectImmun,1999,67(8)：38933899.8AiharaM,TsuchimotoD,TakizawaH,etal.Mechanisminvolvedinhelicobacterpyloriinducedinterleukin8productionbyagastriccellline,MKN-45J.InfectImmun,1997,65：32183224.9RiederG,HatzRA,MoranAP

17、,etal.Roleofadherenceininterlukin8inductioninhelicobacterpyloriassociatedgastritisJ.InnfectImmun,1997,65：36223630.10ShimoyamaT.ChemkinemRNAexpressioningastricmucosaisassociatedwithHelicobacterpyloricagApositivityandseverityofgastritisJ.JClinPathol,1998,51(10)：765770.11MartinGuerreroJM,HerguetaDelgad

18、oP,EstebanCarreterJJ,etal.Pathogenicimplicationsofinterleukin8activityandbacterialphenotypeinarrtralgastritiasassociatedwithHelicobacterpyloriJ.RevEspEnfermDig,2000,92：301315.12KimJM,KimJS,JungHC,etal.VirulencefactorsofHelicobacterpyloriinKoreanisolatesdonotinfluenceproinflaimmatorycytokimegeneexpressionandapoptosisinhumangastricepithelialcells,nordothesefactorsinfluencetheclinicaloutcomeJ.JGastroenterol,2000,35：898906.13SuzukiT,InaK,NishiwakiT,etal.Differentialrolesofinterleuki