土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件

1、思索：如何研讨细菌的分别与计数，他的研讨思绪是什么呢？思索：如何研讨细菌的分别与计数，他的研讨思绪是什么呢？ 挑选菌株；统计菌落数目；设置对照。挑选菌株；统计菌落数目；设置对照。 提出的问题提出的问题 ？ 处理问题处理问题的思绪？的思绪？ 处理问题的原理处理问题的原理 ？ 高温高温 其他菌，选出耐高温细其他菌，选出耐高温细菌，从菌，从 菌种提取耐高温酶。菌种提取耐高温酶。 如何寻觅耐高温的酶？如何寻觅耐高温的酶？寻觅什么环境？寻觅什么环境？ 挑选的方法：挑选的方法：利用选择培育基进展分别利用选择培育基进展分别以尿素为以尿素为独一氮源独一氮源的培育基的培育基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培育基培育基

2、是分别分别尿素尿素细菌细菌作对照作对照判别实验判别实验组培育基组培育基有无选择有无选择性性实验组实验组对照组对照组培育基类型培育基类型能否能否接种接种 目的目的 结果结果只生长分解只生长分解尿素的细菌尿素的细菌生长多种生长多种微生物微生物是是配置好培育基后，该实验流程的下一步是什么？优点：直观、快速，能察看微生物的形状特征且技优点：直观、快速，能察看微生物的形状特征且技术简单术简单1操作方法：稀释涂布平板操作方法：稀释涂布平板统计菌落数统计菌落数2原理：原理： 1个菌落推测个菌落推测1个活菌个活菌3统计原那么：统计原那么：思索：为了保证结果准确，普通选择多少数目的菌落思索：为了保证结果准确，普

3、通选择多少数目的菌落数的平板上进展计数？数的平板上进展计数？ 他如何知道该平板中培育出的菌落在他如何知道该平板中培育出的菌落在30 300个？个？ 测细菌数：普通用测细菌数：普通用104、105、106稀释液稀释液 测放线菌：普通用测放线菌：普通用103、104、105稀释液稀释液 测真菌数：普通用测真菌数：普通用102、103、104稀释液？稀释液？ 他如何使统计菌落的结果更具有准确性？他如何使统计菌落的结果更具有准确性？ 例：两位同窗用稀释涂布平板法测定同一土壤样例：两位同窗用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为品中的细菌数。从对应稀释倍数为106106的培育基中，的

4、培育基中，得到以下两种统计结果。得到以下两种统计结果。 1 1、甲同窗在该浓度下涂布了一个平板，统计的、甲同窗在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为菌落数为230230。 2 2、乙同窗在该浓度下涂布了、乙同窗在该浓度下涂布了A A、B B、C C三个平板，三个平板，统计的菌落数分别为统计的菌落数分别为2121、212212、256256，该同窗以这三，该同窗以这三个平板上菌落数的平均值个平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。 他以为这两位同窗的作法正确吗？假设有问题，他以为这两位同窗的作法正确吗？假设有问题，错在哪？错在哪？ 甲：没有反复实验至少涂布甲：没有反复实验至

5、少涂布3 3个平板个平板 乙：乙：A A组结果误差过大，不运用于计算平均值。组结果误差过大，不运用于计算平均值。 他从中得到什么启示？他从中得到什么启示？ V:所用稀释液的体积；所用稀释液的体积； M:稀释倍数。稀释倍数。 利用选择培育基进展尿素分解菌的分别利用选择培育基进展尿素分解菌的分别过程中，从对应稀释倍数为过程中，从对应稀释倍数为106106的培育基中，的培育基中，A A、B B两同窗分别得到以下两种统计结果。两同窗分别得到以下两种统计结果。 1 1、A A同窗挑选出同窗挑选出150150个菌落。个菌落。 2 2、B B同窗挑选出同窗挑选出5050个菌落。个菌落。 B B以为以为A A

6、的培育基被杂菌污染了，或培育基的培育基被杂菌污染了，或培育基中混入了其他含氮物质，因此导致不能分解尿中混入了其他含氮物质，因此导致不能分解尿素的细菌也能在该培育基中生长。素的细菌也能在该培育基中生长。A A确认本人确认本人的操作无误，但也拿不出能令人服气的证据。的操作无误，但也拿不出能令人服气的证据。 请他协助请他协助A A同窗改良实验，提供具有阐明同窗改良实验，提供具有阐明了的证据。了的证据。 实验设计实验设计的内容：包括对实验方案、实验设计的内容：包括对实验方案、仪器、资料、器具和药品，详细的仪器、资料、器具和药品，详细的实验步骤及时间安排等的综合思索实验步骤及时间安排等的综合思索和安排。

7、和安排。实验设计的要求：缜密细致。实验设计的要求：缜密细致。实验流程土壤取样土壤取样 样品稀释样品稀释 取样涂布取样涂布 微生物的培育与察看微生物的培育与察看 细菌的计数细菌的计数实验操作1土壤取样：土壤取样： 从肥沃、潮湿的土壤中从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土取样。先铲去表层土3cm左右，再取样。左右，再取样。将样品装入事先预备好的信封中。将样品装入事先预备好的信封中。本卷须知：本卷须知： 无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。后面无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。后面称取土壤、将称好的土样倒入锥形瓶、稀称取土壤、将称好的土样倒入锥形瓶、稀释土壤溶液，每一步都要在火焰旁操作。释土壤溶液，每一步都

8、要在火焰旁操作。实验操作2制备培育基：制备培育基： 制备牛肉膏蛋白胨培制备牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基。育基和选择培育基。 牛肉膏蛋白胨培育基可作为对照，判牛肉膏蛋白胨培育基可作为对照，判别选择培育基能否起到了选择作用。将菌别选择培育基能否起到了选择作用。将菌液稀释液稀释103107倍。每个稀释度下需求倍。每个稀释度下需求3个选择培育基，一个牛肉膏蛋白胨培育基。个选择培育基，一个牛肉膏蛋白胨培育基。因此共需求因此共需求15个选择培育基，个选择培育基，5个牛肉膏个牛肉膏蛋白胨培育基。预备蛋白胨培育基。预备 支灭菌的试管支灭菌的试管和和 支灭菌的移液管。支灭菌的移液管。 支滴管。支滴管。实验操作

9、3样品稀释：样品稀释： 将将10g土样参与盛有土样参与盛有90ml无菌生理无菌生理盐水的锥形瓶中，充分摇匀，汲取上清液盐水的锥形瓶中，充分摇匀，汲取上清液1ml，转移至，转移至盛有盛有9ml生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度。稀释度。4微生物的培育与察看微生物的培育与察看 按照由按照由107103稀释度的顺序分别汲取稀释度的顺序分别汲取0.1 ml菌菌液涂布平板，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，然液涂布平板，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，然后将平板置于后将平板置于30培育箱内培育培育箱内培育2d。 每隔每隔24h比较一次牛肉膏蛋白胨培育基

10、和选择培育比较一次牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基菌落的数量、形状等，并做好记录。基菌落的数量、形状等，并做好记录。 挑选选择培育基中不同形状的菌落接入含酚红指挑选选择培育基中不同形状的菌落接入含酚红指示剂的培育基的斜面上，察看能否产生颜色反响。示剂的培育基的斜面上，察看能否产生颜色反响。本卷须知：本卷须知： 做好标志：本实验运用的平板和试管做好标志：本实验运用的平板和试管比较多。为防止混淆，最好在运用前就做比较多。为防止混淆，最好在运用前就做好标志。例如，在标志培育皿时，应注明好标志。例如，在标志培育皿时，应注明培育基种类、培育日期以及平板上培育样培育基种类、培育日期以及平板上培育样品的稀释度

11、等。品的稀释度等。 在进展系列稀释的时候，为防止试管在进展系列稀释的时候，为防止试管相互混淆，可以将曾经进展过稀释操作的相互混淆，可以将曾经进展过稀释操作的试管，按稀释度递增的顺序，依次放置在试管，按稀释度递增的顺序，依次放置在试管架的另一行。这样，试管的位置就能试管架的另一行。这样，试管的位置就能清楚地表示出稀释进展到哪一步。清楚地表示出稀释进展到哪一步。实验操作5细菌的计数细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进展计数。在同一稀释度的平板进展计数。在同一稀释度下，至少对下，至少对3个平板进展反复计数，然后个平板进展反复计数，然后求出平均值，

12、并根据平板所对应的稀释度求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。计算出样品中细菌的数目。结果分析与评价1、培育物中能否有杂菌污染、培育物中能否有杂菌污染 对照的培育皿中无菌落生长，阐明对照的培育皿中无菌落生长，阐明培育基未被杂菌污染。反之，那么被培育基未被杂菌污染。反之，那么被杂菌污染。杂菌污染。结果分析与评价2、选择培育基能否挑选出菌落、选择培育基能否挑选出菌落 牛肉膏培育基上的菌落数目大于选牛肉膏培育基上的菌落数目大于选择培育基上的数目，阐明选择培育基择培育基上的数目，阐明选择培育基已挑选出一些菌落。已挑选出一些菌落。结果分析与评价3、样品的稀释操作能否胜利、样品的稀释

13、操作能否胜利 假设得到了假设得到了2个或个或2个以上菌落数目个以上菌落数目在在30300的平板，那么阐明稀释操作的平板，那么阐明稀释操作比较胜利，并可以进展菌落的计数。比较胜利，并可以进展菌落的计数。结果分析与评价4、反复组的结果能否一致、反复组的结果能否一致 假设不同同窗选取的是同一种土样，假设不同同窗选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。假设结果相差统计的结果应该接近。假设结果相差太远，需求分析产生差别的缘由。太远，需求分析产生差别的缘由。 关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。

14、 关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形状、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 六、例题解析六、例题解析 在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最猛烈的时期是显著最猛烈的时期是A A调整期调整期 B B对数期对数期 C C稳定期稳定期 D D衰亡期衰亡期C C1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是对细菌群体生长规律测定的正确

15、的表述是 A. A.在液体培育基上进展在液体培育基上进展 B. B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C. C.接种一个细菌接种一个细菌 D. D.及时补充耗费的营养物质及时补充耗费的营养物质 2.2.运用选择培育基的目的是运用选择培育基的目的是 A. A.培育细菌培育细菌 B. B.培育真菌培育真菌 C. C.使需求的微生物大量繁衍使需求的微生物大量繁衍 D. D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分别是( )( ) A.CO2 A.CO2和和N2 B.N2

16、 B.葡萄糖和葡萄糖和NH3NH3 C.CO2 C.CO2和尿素和尿素 D. D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A A C CD D4.4.以下说法不正确的选项是以下说法不正确的选项是 A. A.科学家从科学家从70708080度热泉中分别到耐高温的度热泉中分别到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B. B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C. C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试要设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测

17、试要素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D. D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中参与参与 A. A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B. B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C. C.青霉素类药物青霉素类药物 D. D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C例例3 320192019年江苏抗生素作为治疗细菌感年江苏抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和宏大的经济价值使抗生素工业染的药物，其高效性和宏大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应器具有划时代的意经久不衰。其中青霉素的发现和应器具有划时代的意义。义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌