尿中ALA测定实验报告._第1页
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文档简介

1、08 检疫HapyWu尿中 氨基 酮戊酸 ( ALA) 的测定一、实验目的学会用乙酸乙酯萃取对二氨基苯甲醛比色法测定尿中 氨基 酮戊酸 (ALA) 的含量，从而了解铅吸收和铅中毒的诊断。二、实验原理在 PH 为 4.6 及温度为 100的条件下， ALA 与乙酰乙酸乙酶缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显示剂（对二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。三、实验步骤1. 标准曲线的绘制取具赛比色管 10ml6 支，按下表配置标准色列：试剂012345ALA标准应用液（ ml） 0.00.10.30.50.71.0水（ ml）2.01.91.71.51.31.0

2、ALA含量（ ug)0135710A. 各管中加入 2ml 乙酸缓冲液， 0.4ml乙酰乙酸乙酯，混匀，于沸水中加热 10 分钟，取出冷至室温。B. 各管加入 4ml 乙酸乙酯，加塞振摇1 分钟，离心 5 分钟、取出静置分层。C.各取乙酸乙酯提取液2ml 于另外 6 支管中，各管加入2ml 显色剂，加塞振摇，静置10 分钟。D.用分光光度计（波长554），以零管作参比，测其吸光度。根据ALA浓度与吸光度的关系绘制标准曲线。2. 尿样测定A. 预先测定尿液比重，测得尿样比重为1.010 。B. 分别取 1ml 尿样于两支上述一样的管内，各加入水 1ml，乙酸缓冲液 2ml, 混匀。其一为样品管，

3、另一为空白管。向样品管中家兔 0.4ml乙酰乙酸乙酯，空白管中加入0.4 乙酸缓冲液，充分混匀，同时置沸水浴中加热 10 分钟，取出冷至室温。C.按标曲绘制的 BD进行，以乙酸乙酯作参比，进行比色定量。四实验结果与计算1. 标准曲线绘制管号012345ALA含量0135710（ ug)吸光度 A00.0540.1520.2420.2880.4792. 尿样结果 空白管为 0.022 ，样品管为 0.110 。带入标准曲线查得样品管中ALA含量为 1.83ug 。根据尿样比重为1.010 ，在正常范围内，故尿中 ALA（mg/L)=样品管中 ALA含量（ ug)=1.83mg/L五实验结论根据铅实验室检测指标值，尿中氨基 酮戊酸 (ALA)的诊断值为 8mg/L，因此本实验所用的尿样样品未超标。六实验讨论1.进行比色定量时，为什么样品测定时用乙酸乙酯作参比？原因是标准曲线用的是应用液，可以用零管参比， 而测定管中的最大容积为乙酸乙酯， 为了最大限度的消除背景吸收等带来的误差，因此选择乙酸乙酯作为参比。2.若鸟样比重不在正常的范围内，测的结果应如何计算此时应先进行校正，采用公式：尿中 ALA（mmol/L）

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