双向电泳所需试剂配方及器材清单

1、附 录 溶液配制1. 100 mmol/L PMSF母液PMSF 异丙醇5ml 使用前配制，4保存。2. 10%（w/v）TCA/丙酮提取液TCA10 g丙酮 100 mlPMSF1mmol/L1ml母液（用前现加）DDT0.1%（w/v）（用前现加）TCA和丙酮使用前配制，棕色瓶中-20预冷至少2h。3. 80%丙酮洗液丙酮80mlddH2020mlPMSF1mmol/L1ml母液（用前现加）DDT0.1%（w/v）（用前现加）丙酮和ddH20使用前配制，棕色瓶中-20预冷至少2h。4.水化液尿素7mol/L硫脲2mol/LCHAPS4%（w/v）DDT65mmol/L （用前现加）Biol

2、yte (pH3-10 0.3%（v/v）（用前现加）用容量瓶定容后分装后在-20保存，用前室温溶解。5.蛋白浓度测定（1）1mg/ml BSA配制BSA为10x浓缩液，再将其稀释10倍。（2）考马斯亮蓝G-250溶液100mg G-250溶于50ml 95%乙醇，再加入120ml 85%磷酸，于容量瓶中定容至1L。室温保存，用前过滤。（3）标准曲线建立按下表中数值配制建立标准曲线所需的各个溶液对照123456BSA水化液（l）01020406080100水化液（l）10090806040200BSA浓度（g/l）01G-250染液（ml）55555556. 1%溴酚蓝母液溴酚蓝 1%Tris

3、50mmol/L用容量瓶定容后在4保存。7. SDS-PAGE 12%分离胶的配制试剂（reagent）体积（volume）30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）和0.8%（w/v）甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide）L去离子水（ddH2O）L10%十二烷基磺酸钠（SDS）L四甲基乙二胺（TEMED）L10%过硫酸氨（APS）L共计(TotalL8. 12.5% 丙烯酰胺凝胶配制ddH2030% 丙烯酰胺50ml10% SDS2ml10% APS2mlTEMED共计 200ml其中APS在加入前配制成溶液后再加入到全部溶液中。9. 胶条平衡母液尿素6M50mmol/L甘油30

4、%（v/v）SDS2%（w/v）1%溴酚蓝母液0.002%（w/v）用容量瓶定容后分装后在-20保存，用前室温溶解。使用时溶液配制第一次平衡液5ml母液+0.05g DDT（65mmol/L）第二次平衡液5ml母液+0.125g IAA（135mmol/L）10. 电泳缓冲液甘氨酸192mmol/LSDS0.10%Tris25mmol/L 11. 1%低熔点琼脂糖封胶液电泳缓冲液 50ml低熔点琼脂糖1%溴酚蓝母液100l用容量瓶定容后在4保存。12. 胶体考染液(1固定液 （40% 甲醇和 10% 乙酸） 乙醇400 ml乙酸100mlddH2O500ml(2染色液（0.12% G-250、

5、 10%(NH42SO4、10% H3PO4和20%甲醇）ddH2O200mlH3PO4 100ml(NH42SO4 100g（充分搅拌溶解）G-250 搅拌30minddH2O 800ml（定容）甲醇200ml(3脱色液（5%(NH42SO4和10% 甲醇）ddH2O800ml(NH42SO450g（充分搅拌溶解）G-250 ddH2O定容至900ml甲醇100ml注意配制的溶液中均使用ddH2O附 录 器材1. 叶片蛋白提取所需器材研钵、离心管（0.5ml、1.5ml、2ml、10ml、50ml）、量筒（50ml、100ml、1000ml）、磁力搅拌器、磁力珠、移液枪（10、200、1000微升）、枪头（10、200、1000微升）、超速低温离心机（满足最高转速12000rpm）、干燥箱、培养皿（直径9cm）、称量纸（一次性油性纸）、分光光度计（满足595nm）、2. 双向电泳所需器材IPG固相胶条（ph4-7L，17cm）、水化盘（满足17cm胶条）、镊子（BIO-RAD专配平口镊子）、聚焦盘（17cm）、盐桥、篮板（用于放1.5或2.0ml试管）、矿物油、圆形滤纸（直径19cm）、摇床、秒表、灌