基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究

1、基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究834?辽宁中医杂志 2007 年第 34 卷第 6 期 基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究 李艳菊 ,刘辉,郭月秋.,马连学(1.大连开发区医院检验科 ,辽宁大连 116600;2.大连医科大学临床免疫学教研室 , 辽宁大连 116027;3.大连市药品检验所中药室 ,辽宁大连 116021;4.抚顺矿务局总医院检验科 ,辽宁抚 顺113)8)摘要 :目的:探讨利用中药文献信息资源筛选具有免疫调节作用的中药的可能性.方法:于药典中随机选取 1O 味中药分别查阅相关文献 ,选择有 2 个或 2 个以上单位独立完成并发表 2 篇以上支 持

2、具有免疫调节作用沦文的中药进行实验研究 ,共计有 3 种中药 (白芍,何首鸟 ,山药)入选.将 3 种中药制戍含 20%生药的 生药液 ,用该生药液给已经用卵清蛋白免疫过的小鼠灌胃，每天 1 次，每次 0.5mL/，连续 7 天,测血清中相应抗体水 平.结果:3 种中药均能使小鼠体内的卵清蛋白抗体显着升高 ,与生理盐水组比较有显着差异 (P<005). 结论:初步 证明中医药信息库的中药信息资源具有较高的可靠性 ,本文提出的筛选原则对筛选具有免疫调节作用的中药具有 一定的指导意义 .关键词 :免疫调节 ;中药信息学 ;白芍;何首乌;山药中图分类号：R96;R285.5 文献标识码

3、:B 文章编号：1000 1719(2007)o60834 一 o2TheResearchoflmnluneRegulationE 骶 ctsofThreeChineseMedicinesBasedOilChineseMedicineInformatics /2Yan-ju.,UHui,GUOYueqiu,MALian xue4(1.ExaminingDepartment,DalianDe meZoneHospital,Dalian116600,Liaoning,China;2CliniclmmunologyTeachingandResearchCenter,OalianMedicalUniv

4、ersity,Dalian116027,Liaoning,China;3.TCMoffwe,DalianlnstitutionofDrugContml,Dalian116021,Liaoning,China;4.ExaminingDepartment,FushunMineralHospital,Fushun113008,Liaoning,China)Abstract:Objective:ToinvestigatethepossibihtyofselectingtheClfinesemedicinewithimmuneregulationeffectsaccordingtotheliteratu

5、reresourcesoftheChinesemedicines.Methods:TlellChinesemedieineswere:selectedrandomly,butonlythemedicines,thosehadbeentestedbymorethantwoinstitutionsandwere:reportedbymorethantwopapersrespectivelythatwhichhadtheeffectsofimmuneregulation,couldbeselectedinthistest,atlastthreemedicines(RadixpaeoniaeAlba,

6、RadixpolygoniMuhifloriandRhizomaDioscoreaewereselected.rhecrudeherballiquidscontained20%crudeherbalmedicineofthethreemedicineswtprepared,themiceimmunedwithovalbumin(OVA)wereorlyadministratedwiththethreeherballiquidsrespeetively,midthedosewas0.5mLeachmouseoneday,andrepeated7days,thentheantibodytoOVAw

7、asdetected.Results:nlelevelsoftheantibodytotheovalbuminofthemiceofbeingorallyadministratedwiththethreeherballiquidswere:allsiguificantincreasethanthemicebeingorallyadministratedwithnormalsaline(P<0.05).Conclusions:ltwasprovedpreliminarilythattheinformationresourcesintheifformationstorehouseof

8、theChinesemedicineswerecredible,theprincipleofscreenpresentedinthispaperisvaluableforselectingtheChinesemedicineswithinanuneregulationeffects.Keywords:immuneregulationeffects;Chinesemedicineinformatics;radixpaeoniaealba;radixpolygonimultiflofi;rhizomadioscoreae近年 ,关于中药对机体免疫调节作用的研究越来越多 ,许多学者关注对中药的实验药

9、理学方面的研究 , 所涉及的中药成分和研究方法各异 .为探讨这些研究 的可比性 ,笔者利用信息学的原理 ,随机选取有 2 个或 2 个以上单位独立完成 , 并发表 2 篇以上的支持有免 疫调节作用的论文的中药 ,采用统一方法进行实验研究,为利用中药文献信息学的原理筛选具有免疫调节 作用的中药 ,深入探讨中药的免疫药理机制提供实验 收稿日期：20061128 基金项目 :辽宁省教育厅资助课题 (990221063) 作者简介：李艳菊(1968 一),女(满族),辽宁抚顺人 ,副高级检验技师 硕士,研究方向：中药的免疫作用及规律 . 通讯作者：刘辉(1960 一).男,教授,硕士生导师 . 依据.

10、1 材料和方法1.1 中药的选择于 2000 年版中华人民共和国药典随机选取 10 昧中药 ,于中国期刊网查找相关研究文献 ,凡有两个或 两个以上单位独立完成 ,并发表两篇以上的支持具有 免疫调节作用的论文的中药 ,即纳入本研究 ,其中自芍 (RadixpaeoniaeAlba)何首鸟(RadixpolygoniMuhi- flori)和山药(RhizomaDioscoreae)3 种中药符合入选 条件.3 种中药购于大连医科大学附属医院 ,经大连 市药检所鉴定均为正品 .1.2 实验动物昆明小鼠，雄性,体重 1822g,由大连医科大学 实验动物中心提供 .辽宁中医杂志 2007 年第 34

11、卷第 6 期13 实验方法1.3.1 中药水煎剂的制备取 3 种中药各 20g 分别 置于 lOOOmL 的玻璃烧杯中，各加水500mL;浸泡 lh 后.置于火上煎熬 .先武火煮沸以后改为文火 ,再煎 熬 30min 后熄火 ,用纱布滤出药液 .再向各个烧杯内 加水 300mL，用同样的方法煎熬 将 2 次滤液混合后 置于火 J 二,浓缩成 lOOmL,制成含生药 20%的药液. 将该药液密封 ,置于冰箱冷藏保存 ,以备用.1.3.2 卵清蛋白抗原的制备取市售鸡蛋 ,将壳击碎后取卵清 1mL,加生理盐水 4mL.13.3 免疫方案取小鼠 ,注射卵清蛋白抗原 ,0.2 mL/只，注射部位为小鼠大

12、腿内侧肌肉.第 1次免疫 后 1O 天,进行第 2 次免疫，第 2 次免疫后 4 天采血. 1.3.4 给药方法将小鼠随机分成 4 组,每组 16 只, 第 1 组给予生理盐水灌胃为对照组 ;第 2 组给予白芍 水煎剂灌胃,为自芍组;第 3 组给予何首乌水煎剂灌 胃,为何首乌组;第 4 组给予山药水煎剂灌胃 ,为山药 组.在第 1 次抗原注射后的第三天各组同时开始给 药，每天 1 次，每次 0.5mL/只，连续 7天.1.4 抗体效价测定 卵清蛋白抗体测定采用酶联免疫吸附试验 (ELISA). 以卵清蛋白包被酶标板 ,测定相应抗体 ,抗 体水平以 OD 值表示.主要步骤如下：用包被液稀 释鸡卵

13、白(1:5)加到酶标板中，每孔 0.1mL,置湿盒 中,4C24h;次日用洗涤液充分洗涤 3 次，甩干;将待检血清稀释 1O 倍后加入酶标板中，每孔 0.1mL,置 37(2 恒温箱 30min;取出同前法洗涤 3次，甩干;将 羊抗鼠抗体 (卫生部北京生物制品研究所出品 ),用抗 体稀释液 1:1200 稀释后，每孔加 0.1mL,置 37(2 恒温箱 30rain;取出同前法洗涤 3 次，甩干;各孔加 A,B 底物液(上海科华生物公司)各 0.05mL,置暗处约15min,其间不时观察；各孔内加入 2MH2S040.05M1,终止反应；用酶标仪(Biocell ht2 型)检测 OD 值 (

14、450ran).1.5 统计分析实验结果以均数土标准差(戈土 s)表示,两组间均值比较采用 t 检验，显着性水准 P<0.05.用 SPSS 软件协助完成 .2 结果3 种中药均能使小鼠体内的卵清蛋白抗体显着升 高与生理盐水组比较有显着差异(P<0.05),见表1.表 13 种中药 xCtJ,鼠卵清蛋白抗体生成水平的影响(; s) 拄:与对照组比较 ,P<0.05.3 讨论传统中药的使用方法多是水煎剂口服 ,考虑中药 水煎剂已包含中药的各种成分 ,于是本文采用中药水 煎剂口服的给药途径 .给机体注射抗原检查相应抗体 产生的水平 ,特别是采用酶联免疫方法

15、进行检测可以 灵敏地反映机体的免疫水平的变化 ,在中药免疫调节 作用中已有成功地应用 j,抗体的产生需要 T 细胞 ?835?的辅助和细胞因子的参加 ,因此检测抗体的水平也可 以在一定程度上反映细胞免疫的情况 ,是一种评价机 体免疫的有效方法 .故本文统一采用抗原激发以酶联 免疫测相应抗体的方法对依据文献选出的中药的免疫作用进行实验 .白芍系毛莨科植物的去外皮干燥根 ,有文献报导 白芍水煎剂对巨噬细胞功能有明娩的促进作用;对白芍总苷（Totalglucosidcsofpaeony,TGP 的系列研 究,使白芍总苷的免疫调节作用得到广泛证实叫.山药为薯蓣科多年生宿根蔓草植物山药的块根 , 又名白

16、苕 ,土薯,大薯,薯药】 ,山药富含多糖 ,可刺激 和调节免疫系统的功能【 9】 ,山药磷脂类成分有提高免 疫功能的作用 .何首乌,又称首乌 ,赤首乌,为寥科植物何首乌的 干燥块根 .何首乌有促进老龄小鼠胸腺呈明显形态和 超微结构逆转变化的作用，有实验表明，何首乌能 增加老年大鼠胸腺胞浆蛋白和核酸含量 1 引,从而起到 促进胸腺细胞增生 ,保护胸腺组织 ,提高免疫力的作 用.何首乌能使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显上 升,提高机体的非特异性免疫功能 ,同时还能提高 正常小鼠脾脏抗体形成细胞数 l 引 ,从而使机体特异性 免疫功能增强 .笔者的实验表明 ,口服以上 3 种药物水煎剂均能 使小鼠卵清

17、蛋白抗体有明显的升高作用（表 1）,进一 步证实了 3 种药物的免疫调节作用 .也说明了本文所 使用的验证试验方法有效 .初步证明中医药信息库的 中药信息资源具有很高的可靠性 ,本文提出的筛选原 则 （有2 个或 2 个以上单位独立完成 ,并发表 2 篇以上 的支持有免疫调节作用的论文 ）对筛选具有免疫调节 作用的中药具有一定的指导意义 .参考文献1国家药典委员会中华人民共和国药典（一部）M.北京:北京 化学工业出版社 ,2000:13172 杨光.党参多糖对小鼠免疫功能的影响J.中药药理与临床，2005,21(4):393 常波.灌服中药三仙汤对小鼠免疫应答的影响J.中华实用中西医杂 ,2004,4(5):6764 姜宪辉.补骨脂对激发态小鼠的体液免疫影响的实验研究J.辽宁中医学院 ,2004,6(2):116梁雯若白芍抗炎免疫药理作用研究J.新中医,1989,21 (3):51李俊白芍总苷对 B 淋巴细胞增殖和白细胞介素 I 生成的调节作 用J.中国药理学和毒理学杂志，1994,8(1):537 划烨.白芍总苷负调节大鼠腹腔巨噬细胞诱生TNF 的定量分析J.数理医药学杂志，1998,11(1):18 明-李时珍.本草纲目(下册)M.北京:人民卫生出版社.1982:16769 蒋艳玲.怀山药多糖对衰老小鼠免疫器官组织的影响J.