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文档简介

1、现代生物科技专题一.基因工程含有一个或多个限制性内切酶的切点,具有某些标记1. 运载体是基因工程中的重要工具,能够自我复制, 基因等,是运载体必须具备的基本条件。但有启动子与终止子。cDNA文库中获取目的基因,或用人工化学合成的方法获2. 用逆转录方法构建的 cDNA文库不具有内含子,3. 如果要将人生长激素基因导入大肠杆菌,应从 取。4. 用限制性内切酶切割得到的人胰岛素基因,导入大肠杆菌细胞后不能得到有效的表达。5. 检测受体细胞是否导入了目的基因,以及受体细胞中导入的目的基因是否转录出mRNA可用相同的目的基因探针进行诊断。6. 基因探针可以是DNA双链、单链或RNA单链,但探针的核苷酸

2、序列是已知的7. 转基因作物与原物种不是同一物种。基因工程实质是基因重组,基因工程为定向变异。8. 标记基因(通常选抗性基因)的作用是:用于检测重组质粒是否被导入受体细胞(不含抗性)。抗生素 针对的不是目的基因,而是淘汰不具有抗性的没有导入目的基因的受体细胞。DNA留下的9. 用相同的限制性内切酶切割DNA留下的粘性末端是一定相同的;用不同的限制性内切酶切割粘性末端一定是不相同的。10. 要获得转基因植物,可选用植物的体细胞作受体细胞,然后通过组织培养技术获得;如果要获得转基 因动物,也可选用动物的体细胞作受体细胞,然后通过动物细胞培养技术获得。11. 通过转基因方式获得的抗虫棉具有永久抗虫的

3、能力。12. 采用转基因方法将人的凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出了转基因羊。但是人的凝血因子只存在 于转基因山羊的乳汁中。这说明,在该转基因山羊中,只有乳腺细胞中存在人凝血因子基因,而其他细胞 中不存在。DNA分子杂交;一种基因探针能够13. 基因治疗是指将缺陷基因诱变为正常基因;基因诊断依据的原理是 检测水体中的各种病毒。14. 通过基因工程培育抗虫品种时,为了避免抗虫基因传递到近源物种,通常把抗虫基因导入到雄性的原 始生殖细胞的线粒体或叶绿体中。15. 下图为科学家通过基因工程方法培育转基因抗虫棉的大致过程。请据图分析回答:苏云金芽也杆苗(1)图中过程需要的酶有,图中A的组成,除了目的

4、基因外,还必须有和复制原点。(2)将目的基因导入 Ti质粒上的,而获得重组质粒;再将重组Ti质粒转入农杆菌时,可以用处理农杆菌,使重组 Ti质粒易于导入。3(3)将目的基因导入植物细胞,除采用上图所示的方法外,还可采用基因枪法和上。若目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达的关键是其是否插入到植物细胞中 插入成功,欲检测目的基因是否表达出相应的蛋白质,常采用的检测方法是(4) 图中过程常采用的生物技术是 (5) 生产实践中种植转基因抗虫棉时,需要在行间种植一些 抗性基因频率增加的速率。,其原理是O棉花以减缓害虫DNA复制,产生子代噬菌体,最终导致细菌破 。在转基因16. (9分)入噬菌体有极强的侵

5、染能力,能在细菌中快速进行裂(称为溶菌状态);或者整合到细菌基因组中潜伏起来,不产生子代噬菌体(称为溶原状态)技术中常用 入噬菌体构建基因克隆载体,使其在受体细菌中大量扩增外源DNA,以备研究使用。相关操作如下图所示,请回答:(EUkbS序列中S含揑fl用e 土 席到S列丄噬菌体DNA人工恂A Aet10ft(K43.4kb)勰 milHIirrm434基 E含目的基因的外源臥A(1)组装噬菌体时,可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为3651kb,则入gtIO载体可插入的外源 DNA的最大长度为kb,为获得较大的插入能力,在改造载体时可删除入噬菌体DNA组成中序列以缩短其长度。(2)入噬菌体D

6、NA上通常没有适合的标记基因,因此人工改造时需加装适合的标记基因,如上图入gtIO载体中的imm434基因,该基因编码一种阻止入噬菌体进入溶菌状态的阻遏物。在构建基因克隆载体时,需用到的酶是,外源DNA的插入位置应位于imm434基因(之中/之外),使经侵染培养后的受体菌处于状态,表明已成功导入目的基因。(3)包装用的蛋白质与 DNA相比,特有的化学元素是,若对其进行标记并做侵染实验,则实验结论是(4)合成噬菌体所需的小分子原料主要是。分离纯化噬菌体重组 DNA时,将经培养10小时左右的大肠杆菌一噬菌体的培养液超速离心,从(上清液、沉淀物)获得噬菌体。二克隆技术1. 植物的扦插、嫁接;杂交瘤细

7、胞的形成;PCR进行的DNA分子扩增都属于克隆。2. 外植体:由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体。3. 在动物细胞培养与植物组织培养中,都需要对培养基灭菌,还都需要用到CQ培养箱。4. 在植物组织培养的过程中,脱分化阶段不需要光照,再分化阶段需要给予光照的条件。5在植物组织培养过程中,加入适量的蔗糖不仅可以为细胞提供能源物质,而且可以调节培养基的渗透 压。6.用于植物组织培养的培养基只能加庶糖,而用于动物细胞培养的培养基只能加匍萄糖。 7个四倍体的某植物体细胞与一个二倍体的另一种植物体细胞进行杂交,如果形成的杂交细胞中染色 体没有丢失,则该杂交细胞通过组织培养长成的植株

8、属于6倍体,而且是可育的。&动物细胞培养与植物组织培养依据的原理都是细胞的全能性。9.动物细胞培养中,细胞具有贴壁生长以及接触抑制的特点,因此在培养中需要用胰蛋白酶处理贴壁的 细胞并进行分瓶培养,分瓶后的培养称为传代培养。10动物细胞培养中配置的培养基属于合成培养基与液体培养基,在使用时,该培养基中还需要添加血清 等天然成分。10代以内的培养细胞,以保证供体11 如果要通过动物细胞培养提供动物克隆的供体细胞,一般应选用 细胞正常的遗传基础。12 诱导动物细胞融合只能用灭活的病毒进行处理。诱导植物细胞杂交只能用聚乙二醇处理。13.将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行诱导融合,培养液中融合后的细胞即为杂交

9、瘤细胞。14 杂交瘤细胞具有既能产生抗体又能无限增殖的特点;单克隆抗体具有特异强、灵敏度高、可大量制备 的特点。15 制备单克隆抗体所涉及到的生物技术包括:动物细胞融合与动物细胞培养;获得番茄一马铃薯种间杂种个体用到的技术包括:植物体细胞杂交与植物组织培养;获得转基因抗虫棉用到的技术只是转基因技术。16植物产生的种子能发育成新的个体,是种子细胞全能性的体现。17通过核移植获得的克隆动物,完全继承了供核个体的遗传性,因此其性状表现只与供核个体相关,与 其他个体无关。18 在制备单克隆抗体过程中,只要用选择性培养基筛选出杂交瘤细胞;就可以把杂交瘤细胞进行体内或 体外培养,成功提取单克隆抗体。19

10、同一株绿色开花植物不同部分的细胞经组织培养获得的愈伤组织细胞基因都是相同的。20 将愈伤组织包埋在人工种皮中,就形成了人工种子。人工种皮需要具有透气与透水等特点。21 通过细胞工程技术, 利用甲、乙两种高等植物的各自优势,培育具有抗病、耐盐优良性状的杂种植株。BJ细 胞 分 裂、PEG -/诱导再 生 细 胞 壁选择一用钠盐浓度为0.6%的目的植株二H C 4愈伤组织一固体培养基培养(1) A处理目前最常用的方法是;PEG诱导形成B的原理是;幼苗C都具步骤四:充分振荡摇匀后将培养瓶放入中,在条件下培养。的优良性状。从 C得到目的植株的选择,根本上改变了该植物群体的22 (6分)某科研单位研制出

11、一种新型药物X,不知其是否能抑制某类肿瘤细胞的增殖。现提供以下实验仪器和材料:培养瓶、CQ培养箱、含有肿瘤细胞的培养液、生理盐水、溶解于生理盐水的药物(1) 请你完成相关实验:等处理成单个细胞。步骤一:培养之前,肿瘤组织必须先用步骤二:取两只培养瓶,编号 1号、2号,两瓶中装入等量的X, 2号培养瓶中加入步骤三:1号培养瓶中加入一定量的溶解于生理盐水的药物6.用二苯胺试剂可以代替甲基绿染色观察DNA的分布步骤五:一段时间后观察并记录细胞增殖代数。(2)预期实验结果及相应结论:若1号培养瓶相比2号培养瓶细胞,则说明药物X对此类肿瘤细胞的增殖有抑制作用。三生态工程1.建立生态农业(桑基鱼塘),能提

12、高能量传递效率。人工生态系统(农田、城市)中人的作用非常关键。2.生态工程是无消耗、多效益、可持续发展的工程体系。该生态工程是无消耗、多效益、可持续的工程体系。3.我国古代的“无废弃物农业”,从生态学上看是遵循了物质循环再生原理。4. 下图是一个庭院生态工程的模式图。请据图分析回答:(1) 该生态系统中生产者是,处于第二营养级的生物是5,能量(2) 构建这种以沼气池为中心的生态模式实现了物质(3) 建立生态工程所遵循的五项基本原理有整体性原理、物种多样性原理、系统学和工程学原理以及生物技术与实践一. 光学显微镜操作技术1. 光圈、放大倍数都会影响显微镜视野的明亮程度:光圈越大,放大倍数越小,则

13、视野越亮。2. 制作洋葱根尖有丝分裂装片的步骤是:解离、染色、漂洗、制片。3. 在观察植物根尖有丝分裂的实验中,如果能清晰观察到分散的细胞,但不能观察到处于不同分裂时期的 细胞,则导致这种结果的因素不包括解离与压片。4. 观察质壁分离实验时,细胞无色透明,如何调节光线?用大光圈或用平面反光镜。5. 观察质壁分离与复原的实验材料只能用洋葱的外表皮6. 观察动物细胞中核酸的分布,用盐酸处理可改变细胞膜通透性。二. 生物体内物质分离、鉴定技术1. 利用无水乙醇、碳酸钙和二氧化硅可分离绿叶中的光合色素。95%的冷酒精去除杂质。2. 粗提取DNA分子时可利用不同浓度的NaCI溶液、3. 用蒸馏水处理鸡血

14、红细胞并离心获得纯净细胞膜。4.双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验、二苯胺试剂鉴定DNA的实验都需沸水浴。5. 检测脂肪的实验中花生子叶切片染色后用清水漂洗7. 用健那绿与吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布S3图1是利用紫色洋葱叶肉细胞进行的质壁分离实验现象,实验时外界溶液是滴入少量红墨水的的蔗糖溶液,那么图中 A C两处的颜色分别是图2是利用洋葱根尖进行的有丝分裂实验现象,细胞D与E的染色体数之比为 ,核DNA;若要观察减数分裂过程,常用植物的做切片,实验中装片制作的流程&下图是以洋葱为实验材料的实验现象或结果,请据图回答下列问题:(1)0.3g/ml(2) 数之比为

15、为O(3)图3是分离洋葱管状叶中色素得到的滤纸条,由该结果可知洋葱管状叶中A.色素的种类B.不同色素在层析液中溶解度的相对大小C.不同色素的相对含量D.各种色素的颜色3中色(4 )某同学在秋天做色素提取分离实验时,提取和分离过程操作正确,而实验结果只出现了图 素带1和2,最可能的原因是 O(5)有同学用洋葱鳞片叶内表皮细胞进行图1所示实验,为清晰观察到实验现象,需对光学显微镜的光圈进行的操作是二.微生物培养与利用1.2.3.4.只能用平板划线法接种才能在固体培养基上获得单个菌落。果酒和果醋发酵的装置均须密封。为了倒平板可以将已凝固的固体培养基加热熔化。 果酒、果醋的发酵,需要对发酵原料进行严格

16、的灭菌5筛选土壤中能分解尿素的细菌,培养基应以尿素为唯一氮源,同时添加酚红指示剂。6. 低温、无菌条件下暗培养胡萝卜外植体以获得愈伤组织。7. 在测定泡菜中的亚硝酸盐含量时,在泡菜汁中加入提取液与氢氧化铝的作用是吸附汁液中的碎片及有机 大分子,以使汁液变澄清。N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合,生成砖8. 在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮反应后,与 红色的显色反应9. 消毒与灭菌的本质是相同的,但灭菌能杀死所有的微生物包括芽孢与孢子,消毒的条件则相对温和,一 般不能杀死芽孢与孢子。PHf倒平板7灭菌7(冷却后)10. 平板培养基配制的基本流程为:计算称量7溶化(包括琼脂)7调节 倒置

17、平板11. 用血球计数板计数某酵母菌样品中的酵母菌数量。在取样前应该摇匀待测液10-100个左12. 微生物计数时,计数前必须进行稀释。一般将菌液稀释接种后可能在培养基的平板上形成 右的菌落,比较适宜,统计的菌落数比较准确可信13. 为了从泡菜汁中筛选分离出发酵产酸速度快、亚硝酸盐降解能力强的乳酸菌,科研人员做了如下实验。请回答问题:(1)在无菌操作下,使用无菌水对泡菜汁进行,将不同稀释度的泡菜汁涂布于添加了 CaC03的乳酸细菌培养基(MRS培养基)平板上。在适宜条件下培养后,挑取有落,继续在MRS平板上用 法分离,得到单菌落。的菌(2)取分离到的乳酸菌接入 MRS液体培养基中,间隔取样测定

18、 pH,目的是筛选出的乳酸菌。(3)取上一步筛选出的乳酸菌接入含有NaN02的MRS培养基中,培养一段时间后,用方法测定NaN02的含量,筛选出(4)乳酸菌细胞结构的最主要特点是 的菌株。,其代谢类型为14.常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵,而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精,但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室,用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,然后将瓶中的液体用.法接种于固体培养基上,在适宜的条件下培养,获得各种菌落。(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA经大量扩增获得目的基因。(3)将目的基因连接到质粒上,该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时,应选择缺乏能力的酿酒酵母作为受体菌。(4)将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以为碳源的培养基中进行发酵能力测,即说明所需菌株培育成功。试。随着发酵的持续进行,若该

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