纯化水、注射用水微生物检验方法确认

1、纯化水、注射用水微生物检验方法确认纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案(VB文件编号：VP-JY-0026-01项目名称：纯化水、注射用水微生物检验方法学验证VP-JY-0026 纯化水、注射用水微生物-01检验方法学验证方案Page 7Of 24项目部门职务签名日期起草人质量管理部化验员年月日审核人质量管理部中心化验室主任年月日审核人质量管理部质量管理部经理年月日批准人验证领导小组质量副总经理年月日目录1 引言41.1 验证实施进度计划41.2 概述42验证所需设备清单43验证人员、职责43.1 项目验证小组成员43.2 验证变更43.3 验证培训44验证目的55验证内容51.1 培养基

2、配制51.2 菌种51.3 菌液的制备51.4 薄膜过滤法检测微生物61.5 结果评价76 验证过程中的偏差及处理7 验证结果的评定与结论78附件8验证文件1引言1.1 验证实施进度计划实施时间计划安排在年月日至年月日。1.2 概述通过验证以确认R2A适用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。根据培养基及验证菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，则R2A可用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物2验证所需设备清单2.1. XG1.D脉动真空灭菌器2.2. MJ-250-I型霉菌培养箱（2025C）2.3. LPH-250生化培养箱（3

3、035C）2.4. WG11-230BE电热鼓风干燥箱2.5. 微波炉3验证人员、变更及培训3.1项目验证小组成员项目验证小组由中心化验室微生物检验员、质检员、化验室主任、质量管理部经理等组成，由化验室主任任项目验证组组长，验证小组成员见附表1,具体分工、职责如下:人员职务职责Q谑主任负责组织验证小组成员起草验证方案，组织验证工作的实施，并根据验证结果起草验证报告QA人员负责验证实施过程监督。微生物检验员负责验证的实施，对样品进行检验。3.2验证变更验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书（附件2）,报验证领导小组批准后执行。3.3验证培训

4、验证过程中，确认方案以及验证中应该掌握的技能应该进行培训，培训应遵循员工培训管理规程。培训情况记录于附件3。4验证目的与适用范围4.1 验证目的根据中国药典2015版四部1105项下微生物检查法的规定，验证纯化水、注射用水微生物检查方法的适用性，即确认检品、所设定的检验条件及检验程序对供试品中可能存在的各类微生物无抑制作用，其方法可行有效。4.2适用范围适用于纯化水、注射用水微生物检验方法学验证。5验证内容培养基在使用前应进行适用性的检查，合格后方可进行，通过R2A琼脂培养基.上的菌落与营养琼脂对照培养基和TSA对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行性。5.1 培养基的制备取适用性检查

5、合格的R2A琼脂培养基按照15.2g加入1000ml纯化水的比例进行配制，加热使其完全溶解，分装于的锥形瓶中，装量不得超过容器的三分之二，盖塞，用无菌布包扎好后进行湿热灭菌121C、15min,灭菌后PH值7.2±0.2。冷却后放入28c冰箱备用。5.2 菌种铜绿假单胞菌CMCCB)10104金黄色葡萄球菌CMCCB)26003枯草芽抱杆菌CMCCB)63501白色念珠菌CMCCF)98001黑曲霉CMCCF)98003使用以上各种菌株传代次数均不得超过5代5.3 菌液的制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆豚液体培养基上，3035c培养1824小

6、时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基上，2025c培养23天，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数10100CFU(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，2025c培养57天,加入35ml含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案VP-JY-0026-01Page910100CFU的抱子悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保

7、存在28c可在24小时内使用。5.4 菌液的计数：(每种菌液每种培养基接种2个平皿)5.2.2.1 分别接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌至培养皿，每皿接种1ml菌液(10100cfu),倾注TSA对照培养基，凝固后于3035c倒置培养不超过5天。营养琼脂对照培养基、R2A琼脂培养基方法同TSA对照性关官人口斤/05.2.2.2 分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液(10100cfu),倾注胰酪大豆陈琼脂对照培养基，凝固后于3035c倒置培养不超过5天。5.2.2.3 用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将黑曲霉制成每1ml含抱子数10100cfu

8、的抱子悬液。取1ml菌液至胰酪大豆陈琼脂对照培养基3035c培养不超过5天。5.4 薄膜过滤法检测微生物5.4.1 制备平皿取在28c冰箱中保存的培养基，微波炉溶化后按标准操作程序传至微生物限度检查室，待培养基冷却至50c左右浇注平皿(每皿30±2ml,注意培养皿不得破裂，装量应相同，尽量避免形成气泡)。5.4.2 水样的检测取纯化水5ml加入灭菌纯化水50ml薄膜过滤，按照标准操作规程进行水样微生物的检测后，取膜置于R2A琼脂培养基，在3035。叵温培养箱进行培养5天。取注射用水100ml薄膜过滤，按照标准操作规程进行水样微生物的检测后，取膜置于R2A®脂培养基，在303

9、5。叵温培养箱进行培养5天。5.4.3对照样品另取含菌数10100CFUI勺铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉1ml加入滤杯内，分别取纯化水、注射用水同上操作过膜后，取膜置于R2A琼脂培养基，在3035。叵温培养箱进行培养5天。TSA寸照培养基和营养琼脂又1照培养基上方法同R2A琼脂培养基。5.4.4 阴性对照Of24另取灭菌纯化水50ml薄膜过滤后置于R2A琼脂培养基、TSA对照培养基和营养琼脂对照培养基上，作为阴性对照。在3035。叵温培养箱进行培养5天。5.4.5 空白对照另取灭菌的滤膜置于R2A琼脂培养基、TSA对照培养基和营养琼脂对照培养基.上，作为空白对

10、照。在3035。叵温培养箱进行培养5天。5.5 结果评价逐日观察培养皿微生物生长情况，被检培养皿与营养琼脂和TSA对照培养皿比较菌落形态大小应一致，菌落平均数的比值在0.5-2(50%-200%)范围内，则可确定R2A琼脂培养基适用于薄膜过滤法进行制药用水微生物检测。6验证过程中的偏差及处理在执行验证过程中，检测人员需要及时记录出现的任何偏差，并按照偏差处理管理规程进行处理。7验证结果的评定与结论验证各项验证工作结束后，验证项目小组负责收集、汇总各项验证、试验结果记录，依据各项验证结果起草验证报告，对验证结果进行评定与结论，报验证领导小组。评定与结论至少包括以下内容：1) 验证项目是否有遗漏？

11、2) 验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？3) 验证记录是否完整？4) 验证结果是否符合标准要求？5) 如有异常情况、偏差处理是否合理？是否需要进一步补充验证？6) 验证项目是否通过验证，可否投入使用？7) 日常监测(使用)的建议。8) 再验证周期。验证文件纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案VP-JY-0026-01Page 13Of 248附件附件1验证小组成员名单验证方案名称验证方案编号姓名所在部门岗位及验证中负责工作附件2验证方案修改申请及批准书验证方案名称验证方案编号修改内容修改原因及依据修改后方案审批起草人：日期：项目验证组组长：日期：验证领导小组

12、组长：日期：附件3验证培训记录（一）培训时间培训对象培训讲师培训内容：被培训人员签名序号姓名考核结果考核人合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格验证文件VP-JY-0026 纯化水、注射用水微生物Page 17Of 24-01检验方法学验证方案合格口不合格合格口不合格合格口不合格附件4验证所需文件序号文件名称编号存放地点附件5纯化水菌落回收率记录'培R2AR2A营营养TSATSAR2营TS回收养基琼琼养琼脂对对A养A率脂脂琼对照昭八、昭八、琼琼对与与培培脂培培脂脂昭八、TS营养养对基养培培对培A养菌种基基昭八、(1m基养养昭八、

13、养对琼(5(1培l菌(5(1基培基照月旨mlml养液mlml(养(培对供菌基+50m供菌阴基阴养昭八、试液(5l灭试液性(性基培品+50ml菌水品+50对阴对比养+50ml供薄膜+50ml昭八、性昭八、较基ml灭试过ml灭)对)比灭菌品滤）灭菌昭八、较菌水+50菌水)水薄ml水薄薄膜灭薄膜膜过菌膜过过滤）水过滤）滤）薄滤）膜过滤）枯草芽抱杆菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌黑曲霉菌与对照培养基比较，菌落大小、形态是否一致标准规定与对照培养基比较，菌数比值应在0.5-2(50%-200%)范围内。结果确认：验证文件VP-JY-0026 纯化水、注射用水微生物Page 19Of 24-01检验

14、方法学验证方案检验人/日期：复核人/日期：附件6注射用水菌落回收率记录培二<R2AR2A营营养TSATSAR2营TS回收琼养琼脂对对A养A率J1脂琼对照昭八、昭八、琼琼对与与培培脂培培脂脂昭八、TS营菌养养对基养培培对培A养种基基昭八、(1m基养养昭八、养对琼(1(1培l菌(1(1基培基昭八、脂00mml养液00mml(养(培对l菌基+100l菌空基空养昭八、供+10(1ml供供液白(白基培试品薄膜过凝0ml供试品薄膜过滤）00ml供试品薄膜过滤）试品薄膜过滤）试品薄膜过凝+100ml供试品薄膜过滤）对昭八、）空白对昭八、）对昭八、）比较养基比较枯草芽抱杆菌铜绿假单验证文件纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案VP-JY-0026-01Page 22Of 24胞菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌里八、曲霉菌与对照培养基比较，菌落大小、形态是否一致标准规与对照培养基比较，菌数比值应在0.5-2(50%-200%)范围内。结果确认检验人/日期：复核人/日期：附件7验证过程的偏差及处理验证方案名称/编号偏差描述处理方式偏差报告人报告人：日期：评价验证项目组长：日期：验证文件VP-JY-0026 纯化水、注射用水微生物Page 24Of 24-01检验方法学验证方案批准