岗位分析SOP液相色谱岗位分析方法性能标准其他要求和步骤

1、 （岗位分析）SOP液相色 谱岗位分析方法性能标准 其他要求和步骤 20XX年XX月 峯年的企业咨询咸问经验.经过实战验证可以藩地执行的卓越萱理方案.值得您下载拥有 中华人民共和国安徽出入境检验检疫局 TheChemicalLaboratoryofAHClQ 标准操作程序 StandardOperationProcedure 液相色谱岗位分析方法性能 标准、其他要求和步骤 Con cerni ngthePerforma nceofA nalyticalMethods an dtheI nterpretati ono fResultsatLCPost 方法编号 SOP-LC-XXX 批准人 起草

2、人 版本/版次 签发人 修订次数 签发日期 验证人 实施日期 验证日期 安徽出入境检验检疫局 化学技术中心 液相色谱岗位分析方法性能 标准、其他要求和步骤 1定义 1.1 准确度 检测结果和可接受参考值之间的符合度。通过测定真实性和精密度来确定。 1.2 a误差 指测试样品符合规定的概率，尽管获得的是不符合规定的测定 （是壹个假的不 符合规定的决定 ）。 1.3 分析物 将要检测、鉴别和 / 或定量的物质以及分析过程中产生的衍生物。 1.4 B误差 测试样品确实不符合规定的概率，尽管获得的是符合规定的测定 （是壹个假的 符合规定的决定 ）。 1.5 偏差 指检测结果和可接受参考值之间的差异。

3、1.6 标准校准 用参考基准值的测量值来代表所测物质量的测量手段。 1.7 认证过的基准物质 （CRM） CRM 指壹种有特定分析物含量赋值的物质材料 1.8 共色谱法 指壹个将提取物于进行色谱分离之前分成俩个部分的过程。第壹部分进行色 谱分离。第二部分和要测定的标准分析物混合。 然后将该混合物也进行色谱分离。 所加标准分析物的量必须和提取物中分析物的估计值相差不大。设计此方法是要 提高采用色谱法时分析物的鉴别，特别是于没有适宜的内标物可用时。 1.9 协同试验 用相同的方法对相同的样品进行分析以确定该方法的性能特性。该试验包括 随机测定误差和实验室偏差。 1.10 确认方法 能提供全面或补充

4、信息使物质得到明确地鉴定， 且且能于感兴趣的水平进行 定量的方法。 1.11决定限度 （CC） a CCa指等于和高于此值时，能够用 a误差概率得出认为样品不符合规定的 结论的限度。 1.12检测容量 （CC） B CCB指能够用B误差概率检测、鉴别和/或定量样品中物质的最小含量。 对于未确定允许限量的物质，检测容量是指用 1 B统计学概率方法能够检测出 真正污染的样品的最低浓度。对于已经建立允许限量的物质，检测容量则是指用 1 B统计学概率方法能够检测出允许限量浓度的浓度。 1.13 添加样品材料 被已知量的待测物强化的样品。 1.14 实验室间试验 （比对） 由俩个或多个实验室依照预先确定

5、的测定检测性能条件，对同样品的检测 进行组织、 性能和评价测试。 根据目的， 试验能够分为协作试验和熟练程度试验 1.15 内标 (IS) 壹种理化特性和待测分析物尽可能相同，且且样品中不存于的物质。它被加 到每份样品中及每壹个校准标准中。 1.16 实验室样品 被送到实验室作检查和测试而准备的壹种样品。 1.17 关心水平 样品中明显地确定其符合法规规定的物质或分析物的浓度。 1.18 最低要求性能限度 (MRPL) 样品中至少必须检测和确认的分析物的最低含量。 1.19 性能特点 能够归结于分析方法的使用特点。 这能够是特异性、 准确性、 真实性、 精密 度、重复性、重现性、回收率、检测性

6、能和抗耐性。 1.20 分析方法的性能标准 能够来判断该方法是否适合于其目的、且产生可靠结果的性能特点要求。 1.21 允许限度 法规中确定的物质的最高残留限量、最高水平和其他最大耐受量。 1.22 精密度 于规定 (预先确定 )条件下，获得的相互独立的检测结果之间的壹致程度。精 密度测定通常用不精确性表示且以检测结果的标准偏差来计算。标准偏差大则精 密度就低 1.23 熟练试验 允许实验室选择其自己的方法来分析同壹个样品，假设这些方法于常规条件 下使用。试验必须按照相应的标准操作程序来设计或执行，且可用来评价方法的 重现性。 1.24 定性方法 壹种能够根据物质的化学、生物学或物理特性鉴别该

7、物质的分析方法。 1.25 定量方法 壹种能够确定物质的数量或质量特性，以便能够用适当单位的数值表示的分 析方法。 1.26 试剂空白测定 不用测试物或用相当数量的溶剂替代测试物而进行的全部分析过程。 1.27 回收率 于分析过程中回收到物质的实际浓度百分比。如果是没有认证过的基准物 质，应于方法确认试验中予以测定。 1.28 基准物质 指其壹种或几种特性已经被确认方法所证实，从而能够用来校正设备或校验 测定方法的物质。 1.29 重复性 于重复条件下的精密度。 1.30 重复条件 于同壹个试验室由同壹个操作人，用相同的仪器、相同的方法对同壹个检测 项目进行检测，获得的独立检测结果的条件。 1

8、.31 重现性 于重现条件下的精密度。 1.32 重现条件 于不同试验室由不同的操作人，用不同的仪器、相同的方法对同壹个检测项 目进行检测，获得的独立检测结果的条件。 1.33 抗耐性 分析方法对试验条件，能够表示为样品材料、分析物、贮存条件、环境和或 样品制备条件等改变的敏感性， 于此条件下， 该方法能够按现有方法应用或作特 别的轻微修正。对于实际中可能遇到的各种变化 （如试剂的稳定性、样品的组分、 酸度、温度 ）的所有试验条件，任何能够影响分析结果的变化均应尽可能的指出。 1.34 样品空白测定 对不含分析物的样品的测试部分进行的完整分析过程。 1.35 筛选方法 用来测定关注水平的某壹物

9、质或某类物质的存于方法。这些方法具有对样品 的高吞吐量能力，且被用来对大量的样品进行审定，以确定是否潜于地不符合规 定。它们应该特别地设计，以避免出现符合的假结果。 1.36 单壹实验室试验 （室内确认 ） 壹种由壹个实验室于适当长的时间间隔内，于不同的条件下，用壹种方法来 分析相同或不同的测试材料的分析试验。 1.37 特异性 壹种区别被测分析物和其他物质的能力的方法。这种特性是所述测定技术的 主要功能，可是能够根据化合物或基质的类别而变化 1.38 标准添加 指测试样品被分为俩个 （或多个 ）测试部分的过程。其中壹部分直接分析，另 壹部分于分析前被添加了已知数量的标准分析物。所加标准分析物

10、的量必须是样 品中估计的分析物的量的 2 倍到 5 倍之间。考虑到分析过程的回收率，设计此步 骤是要确定样品中的分析物的含量。 1.39 标准分析物 壹种已知的，且被认证过含量和纯度，用作分析中参照物的分析物。 1.40 物质 特定的或有确定化学组成的物质及其代谢物。 1.41 测试部分 指从进行检测或观察的测试样品分出的物质的量。 1.42 测试样品 指由壹种实验室样品制备，且由此获取测试部分的壹种样品。 1.43 真实度 从大量的测试结果获得的平均值和可接受的参照值之间的符合程度。真实度 通常以偏差表示。 1.44 单位指 ISO31（20） 和欧盟指令 71/354/EC 中所述的那些单

11、位。 1.45 确认 通过检查和提供有效的证据，以确定壹个特定计划应用的具体要求得到实 行。 1.46 实验室内重复性 于同壹个试验室，于适当长的时间间隔内和于规定 （预先确定 ）的条件下 （涉及 到如方法、测试材料、操作人员、环境 ）获得的精密度。 2.分析方法性能标准和其他要求 2.1 总体要求 2.1.1 样品处理 样品应该以有最大机会检测出物质的方式获得、处理和加工。样品处理过程 应防止偶然污染或丢失分析物的可能性。 2.1.2 方法性能 2.1.2.1 回收率 于样品分析过程中，如果采用了壹个固定的回收率校正因子，则应对每壹批 样品测定回收率。如果回收率于限度以内，才能采用固定的回收

12、率校正因子。否 则，应采用从该批样品获得的特定回收率因子，除非采用标准添加程序 （见 3.5） 或用内标法来定量测定样品中分析物，才可应用样品中分析物的特定回收率因 子。 2.1.2.2 特异性 于试验条件下壹个方法应能区分分析物和其他物质之间的差别。必须提供这 种区别估计可能达到的程度。当采用所述的测定技术时需要克服任何可预见的来 自物质 （如同族物、同类物、要检测的残留物 ）代谢产物的干扰。特别重要的是要 调查来自基质组分的干扰。 2.2 筛选方法 只有那些以记录的可追溯方式证明其有效，且且于测定的水平假符合串V 5% （ 3-误差）的分析技术才可用于指令96/23/EC规定的筛选目的。于

13、出现可疑 结果时，应用确认方法进行确认。 2.3有机残留物和污染物的确认方法 有机残留物或污染物的确认方法应提供关于分析物化学结构的信息。因此仅 根据色谱分析而不采用光谱检测的方法不适于单独作为确认方法。可是，如果壹 个技术缺乏足够的特异性，应该通过包括合适的净化，色谱分离和光谱检测等分 析技术来达到所需的特异性。 以下方法或方法联合被认为是适于鉴定所指定的物质组的有机残留物或污 染物。 表 1 有机残留物或污染物的确认方法（液相色谱部分） 测疋技术 96/23/EC 附录1物质 限度 只要符合或于线或离线色谱分离只 A 和 B 组 要采用全扫描技术或采用至少 3 （B 带有质谱检测的液谱 组

14、）或 4 （A 组）个鉴别点作为不记 录全部质谱的技术 带红外光谱检测的液谱 A 和 B 组 必须满足红外光谱吸收的特殊要求 带二级管矩阵检测全程扫 描的液谱 B 组 必须满足紫外光谱吸收的特殊要求 带荧光检测的液谱 B 组 只适用于自然发射荧光的分子和经 过转化或衍生后发射荧光的分子 带紫外/可见光检测（单壹 波长）的液谱 B 组 只要采用至少俩个不同的色谱系统 或第二个独立的检测方法 2.3.1共同的性能标准和要求 确认方法应提供关于分析物化学结构的信息。当有壹个之上化合物给出相同 反应时，那么该方法不应区别不开这些化合物。仅根据色谱分析而不采用光谱检 测的方法不适于单独作为确认方法。 如

15、果于方法中使用内标物，内标物应于提取过程开始时就加入到测试部分。 根据可能性，内标物应采用稳定性同位素标记的分析物一特别适用于质谱检测， 或结构和分析物类似的化合物 当没有适宜的内标物可用时，分析物的鉴别应采用混合色谱来确认。此时, 只需获得壹个峰，增高的峰的高度（或面积）应等于加入的分析物的量。对于 LC, 半峰高处的峰宽应于原始峰宽的 90%110 %范围内，保留时间应于5%范围内 变化。 参照物或含有等于或接近允许限度或判定限度 （超标控制对照样品）的已知量 的分析物添加材料，以及阴性控制材料和试剂空白最好应当于整个过程中和每壹 批分析的样品壹块进行操作。注入提取物到分析仪器的顺序如下：

16、试剂空白，阴 性控制材料，需要确认的样品，阴性控制材料，最后是超标控制对照样品。任何 和这种顺序不同的变化应被证明是适宜的。 232对定量分析方法的额外性能标准和其他要求 2.321定量方法的真实度 于重复分析己鉴定的参照材料时，试验测定的回收率折算己知值的平均质量 范围的指导范围如表2。 表 2 定量方法的最低真实度 真值含量（ :mg/kg ) 偏差范围（%） v 0.001 -50 +20 0.001 0.01 -30 +10 0.010 10 -20 +10 10 1000 v 15 1000 10000 v 10 10000 v 5 于没有认证过的基准物质可使用时，通过向空白基质中加

17、入已知量的分析物 得到的回收率来评价测定的真实度是能够接受的。用平均回收率折算的数据只有 落于表2所示的范围内才可接受。 2.3.2.2定量方法的精密度 对于测试物中的禁用物质，精密度实验应于方法测定低限、俩倍方法测定低 限和十倍方法测定低限三个水平进行；对于已制定 MRL的，精密度实验应于方 法测定低限、MRL、选壹合适点三个水平进行；对于未制定 MRL的，精密度实 验应于方法测定低限、常见限量指标、选壹合适点三个水平进行。重复测定次数 至少为6。实验室内部的变异系数参考范围见表 3。 表 3 实验室内变异系数 被测组分含量 实验室内变异系数（CV，%） 0.1 卩 g/kg 43 1 卩

18、g/kg 30 10 卩 g/kg 21 100 卩 g/kg 15 1mg/kg 11 10mg/kg 7.5 100mg/kg 5.3 1000mg/kg 3.8 1% 2.7 10% 2.0 100% 1.3 注：对于低于 100 陶/kg 的质量范围，用 Horwitz 公式计算会得出不可接受的高值。因 此，欧盟对低于 100 卩 g/kg 的质量范围时仅其 CVs 应尽可能地低。液相色谱工作岗位依据 GB/T27404-2008 实验室质量控制规范食品理化检测执行此要求。 对于于重复性条件下进行的分析，实验室内 CV应特别地位于上述数值的 1/22/3之间。对于于实验室内重现性条件下

19、进行的分析， 实验室内的CV不应 大于重现性CV。 对于有规定的允许限度的物质，方法应达到实验室内的重现性不大于于 0.5 倍允许限度的浓度时相应得到的重现性 CV。 2.3.3质谱检测性能标准和其他要求 质谱分析作为确证方法适合的原则是仅用于于线或离线色谱分离之后。 3.1.2.2 色谱分离 对 LC-MS 操作，色谱分离应该选用合适的液相色谱柱。于任何情况下，检 测条件下分析物最小可接受的保留时间是色谱柱死体积相应保留时间的二倍。测 试部分分析物的保留时间 （相对保留时间 ）应于特定保留时间平台内和校正的标准 保留时间壹致。保留时间平台应和色谱仪分辨率相当。分析物色谱保留时间和内 标物保留

20、时间的比率，即分析物的相对保留时间应和校准溶液的保留时间 LC 于 土 2.5% 的允许误差壹致。 3.1.2.3 质谱检测 质谱检测应当使用质谱技术，如全质谱记录 （全扫描 ）或选择离子监控 （SIM） ， MS-MS n技术如选择多反应监控（MRM）或其他合适的MS、MS-MS n技术和合适 的离子化模式联合使用。于高分辨率质谱（HRMS）中，全质谱范围10%峰谷上分 辨率应典型地超过 10000 。 全扫描：当质谱检测是通过执行全扫描光谱记录时，所有出现的测量诊断离 子（分子离子、分子离子的特征加和物、特征碎片离子和同位素离子 ）的相对丰度 超过校准标准品参照光谱丰度的 1 0 是必须的

21、。 选择离子监控（SIM）:当质谱检测是通过执行碎片谱时，分子离子可能是更 适宜的测量诊断离子之壹 （分子离子、分子离子的特征加和离子、特征碎片离子、 同位素离子 ）。选择的诊断离子不应该是起源于分子的相同部分。 每壹诊断离子的 信噪比 （S/N） 应大于 3。 全扫描和选择离子监控:检测离子的相对丰度，用最强的离子或透过率的百 分数表示。应该和校准物质、校准物质溶液或吸取的样品溶液于可比较的浓度下 和相同的条件下测定。离子强度应符合以下限度: 表 4 质谱技术中相对离于强度的最大允许限度范围 液相色谱多级质谱LC-MS , LC-MS n 20 % 25 % 10 %20 % 50 % 质谱

22、数据的解释：诊断离子和/或母离子/产物离子对必须通过比较光谱或单 壹质量跟踪信号的积分来鉴定。 任何使用背景校正时，应于整批的测定规程中（见 2.3.1，第四段）采用背景校正，且被清楚的指出。 全扫描：于单壹质谱图中全扫描光谱被记录时，至少存于 4个相对强度 10 %基线峰的离子，如果分子离子于参照光谱中相对强度10 %，则分子离子 峰必须包括于内。至少4个离子位于相对离子强度的最大允许范围内（见表5）。 计算机帮助的图库查询能够使用（如果有的情况下） 。于这种情况下，测试 样品的质谱数据和校准溶液的质谱数据的比较必须超过关键匹配因子。该因子将 于对每壹分析物光谱的确证过程和基本标准描述完成时

23、被测定。光谱中由样品基 质和检测器性能引起的变异性应该得到检查。 选择离子监控（SIM）:当质谱碎片被非全扫描技术所测量时，壹系列的识别点 将用于解释数据。96/23/EC指令附录I的A组的物质的确认需要最少4个识别 点，96/23/EC指令附录I的B组的物质的确认需要最少3个识别点。 表5为每 壹种最基本的质谱技术能够获得的识别点数量。然而，为了使需要确认的识别点 具有资格，识别点的总和能够按以下计算： （a）最小至少壹个离子对被测定:相对强度（基线峰的 ） 50 % 20 %50 % 30 % 3.1.2.4 所有相对测定的离子对满足上述描述的标准； 3.1.2.5 最多三个独立技术能联合

24、使用达到最小识别点数。 表 5 质谱碎片分类范围和所获得的识别点之间的关系 质谱技术 获得每壹离子的鉴别点数 低分辨率质谱(LR) 1.0 低分辨率质谱-多级质谱母离子 1.0 低分辨率质谱-多级质谱转换产物 1.5 高分辨率质谱(HRMS) 2.0 咼分辨多级质谱母离子 2.0 高分辨-多级质谱转换产物 2.5 注解：(1)每壹种离子只能计算壹次: (2)使用不同的化学物质产生的衍生物能够用于增加不同分析物的识别点数； 对 96/23/EC 指令下附录 I的 A 组的物质，如果于分析过程中以下技术之壹被使用, 且该技术的相对标准己完成，则能够贡献最多壹个识别点。HPLC 和全扫面二极管点阵(

25、DAD) 连用：HPLC 和荧光检测器连用；HPLC 和免疫血清学连用； (4)转换产物包括子离子和次级子离子产物。 表 6 质谱技术和连用技术获得识别点数的例子 (n =壹个整数) 技术 离子数 鉴别点数 LC-MS N N LC-MS-MS 1 个母离子十 2 个子离子 4 LC-MS-MS 2 个母离子，每个有 1 个子离子 5 LC-MS-MS-MS 1 个母离子， 1 个子离子， 5.5 2 个次级子离子 HRMS N 2N 2.3.4使用其他检测技术的液相测定分析物的性能标准和其他要求。 2.3.4.1色谱分离 如果能够获得用于这壹目的的壹种物质，内标物质应该尽可能的使用。如果 关

26、联物的保留时间和分析物的保留时间接近，则是更合适的。相同实验条件下， 分析物于相应校准标准品典型的保留时间下被洗脱。分析物最小可接受的保留时 间是 2 倍的色谱柱死体积相应的保留时间。分析物和内标物保留时间的比值，即 分析物的相对保留时间，应该和校准标准品的比值于合适的范围内相同，允许 2.5 误差。 3.1.3.2 全扫描 UV VIS 检测 液相方法的性能标准必须达到。 分析物光谱最大吸收波长应该和于检测系统分辨率测定误差范围内的校准 标准品的最大吸收波长相同。对二极管点阵检测器，允许误差值为 2nm 。对于 220nm 之上的分析物，具有相对吸收系数10 %的俩个光谱部分，其光谱应该 和

27、校准标准品光谱没有显而易见的区别。首先存于相同的最大吸收，其次俩个光 谱中于和校准标准品吸收系数10%部分没有观察到区别，即为符合标准。如果 使用计算机帮助的图库搜寻和匹配，测试样品的光谱数据和校准标准品光谱数据 比较必须超过标准匹配因子。该因子于分析物己完成之上描述标准为基础的光谱 确证过程期间被测定。样品基质和检测器性能引起的变异应该被检查。 3.1.3.3 荧光检测的性能标准 液相方法的性能标准必须达到。 该方法将应用于显示自身荧光的分子和于转化或衍生后显示荧光的分子。 结 合色谱条件的激发和吸收波长的选择应该以于空白样品中发生干扰组分减少到 最小的方式完成。色谱条件下最近的峰的极大处应

28、该和指定分析物的峰分离，至 少为完整的分析物峰的最大高度 10%的壹个全峰峰宽 2.344使用带UV/VIS检测(单波长)的LC测定分析物 带UV/VIS检测(单波长)的LC方法本身作为确证方法使用是不适当的。 色谱条件下最近的峰的极大处应该和指定的分析物的峰分离，至少为完整的 分析物的峰的最大高度10 %的壹个全峰宽度。 3 .确证 确证将证明分析方法应遵照标准中可适用的关联的性能特征。 不同的检查目的要求不同的方法种类。下表确定了方法类型检验的性能特征。 表 7 分析方法通过已确定了的性能特征的分类 检测容量 决定限度 真实度/ 梓宀、选择性/ 实用性/耐用性 方 精密度 亠t CC3 C

29、C a 回收率 特异性 /稳定性 定性 S + - - - + + 方法 C + + - - + + 定量 S + - - - + + 方法 C + + + + + + 注：5 =筛选法；C =确认方法；十=必需测定的 3.1确证程序 本章为分析方法的确证程序提供了例证和/或参考资料。其他证明分析方法 符合需要使用性能标准的性能标准的方法，只要他们达到同样的水平和同质的信 息。确证也能通过进行如食品法典，国际标准化组织(ISO)或国际理论和应用化学 联合会(IUPAC)确定的实验室内试验来完成，或根据替代方法如单个实验室试验 或内部确证。本部分集中关注使用模型方法的单个实验室试验 (内部确证)

30、。这个 方法由以下部分组成： 壹套独立于所用确证模型的共同性能特征； 于表8中所描述的更具体的模型决定程序。表 8 独立模式和关联模式的性能参数（确证） 独立模式性能参数 关联模式性能参数 共同性能参数（3.1.1 ） 传统确证方法（3.1.2 ） 内部确证方法（3.1.3 ） 特异性 回收率 回收率 真实性 重复性 重复性 耐用性：微小变化 室内重现性 室内重现性 稳定性 重现性 重现性 定量限（CC a 定量限（cc a 检测限（CC ）3 检测限（CC ）3 标准曲线 标准曲线 耐用性：主要变化 耐用性 3.1.1独立模型性能标准 无论选择那种确证方法，下面的性能特性必须确定。为减少工作

31、负荷量，能 够采用仔细设计且具有统计意义的方法将测定不同参数的试验合且进行。 3.1.1.1特异性 对于分析方法，分析物和接近的关联物质（同分异构体、代谢物、降解物、内 源性物质、基质组成成分等）之间的鉴别能力是重要的。必须有俩种方法检查干扰 情况。因此，应选出潜于的干扰物质，且且有关的空白样品应经分析，以检测可 能存于的干扰和估计干扰的影响： 选择壹系列化学关联的化合物（代谢物、衍生物等）或其他可能于样品中 存于影响的、可能遇到的物质； 分析适当数量的有代表性的空白样品 20）检查于期望目标分析物被 洗脱的影响区域内的任何干扰（信号、峰、离子踪迹）； 此外，有代表性的空白样品应添加关联浓度的

32、可能干扰分析物的鉴别和 /或定量的有关物质； 分析以后，检查是否： 存于的干扰可能导致错误的鉴定； 目标分析物的鉴定被壹个或多个干扰所阻碍：或 定量分析显著地受到影响。 真实性 于本节，定量的真实性 (准确度的壹个组分 )被描述。真实性只能通过用认证的 基准物质 (CRM) 来确认。基准物质只要可得到就应使用。 该程序于 ISO5725 4(5) 中被详细描述。举例如下： 按照方法测试指南分析六份基准物质的重复样品； 测定存于于每份重复样品中分析物的浓度； 计算这些浓度值的平均值、标准偏差和变异系数 ()； 通过将测定的浓度平均值除以核准值 (测定浓度 )再乘以 100 计算真实 性，结果用百

33、分数表示。 真实性( )=检测的平均回收校正浓度x 100 /核准值 如果得不到基准物质，用 4.1.2.1 项下的描述测定回收率代替准确性。 实用性/耐用性(较小的变化 ) 这样的研究通过实验室故意引入较小的合理的变化和观察它们的后果进行。 预调查研究必须通过选择可能影响测定结果的样品的预处理、净化和分析因素进 行。这样的因素可能包括分析员、试剂的来源和年限、溶剂、标准品和样品提取 物、加热速度、温度、 pH 值和许多其他可能于实验室出现的因素。这些因素应 用于不同实验室之间通常遇到的偏差比较得出的数量级进行校正； 鉴别能影响结果的可能因素； 轻微地改变每壹因素; 用Youden的方法实施耐

34、用性试验。（于这点上其他的方法也可使用。可 是Youden方法使要求的时间和努力最小。Youd方法是壹种部分因素的设计。 不同因素间的相互作用不能被检测出； 壹旦发现有因素对测定结果产生重大影响，要实施进壹步的实验以确定 这壹因素可接受的限度； - 对结果有重大影响的因素应于方法草案中清楚地表示出来。 基本的概念不是壹次研究壹个改变而是壹次引入俩三个变化。 例如，让A、B、 C、D、E、F、G表示七个不同的能影响结果因素的名义上的值，如果它们名义 上的值轻微变化，用相应的小写字母 a、b、c、d、e、f和g表示它们的替换值。 这样结果有27或128种不同的可能的组合。 于这些组合中，能够选择壹

35、个有八种组合的大小写字母平衡分配的子集 （表9）。 必须进行八次测定，每次采用选择的因素的壹种组合 （A G）。测定的结果于表9 中显示为S 乙 表 9 耐用性研究试验设计（较小的变化） 因素值 F 1 2 3 测定数字的组合 6 7 8 4 5 A/a A A A A a a a a B/b B B B b B B b b C/c C C C c C c C c D/d D D d d d d D D E/e E e E e e E e E F/f F f f F F f f F G/g G g g G g G G g 观察的结 果 R S T U V W X Y Z 3.1.1.4稳定性

36、已经观察到样品中分析物或基质组成成分于保存或分析过程中不十分稳定 可能引起分析结果中出现严重偏差。 此外，应检查校准标准品于溶液中的稳定性。 通常分析物于不同的贮存条件下的稳定性被很好地描述。保存条件的监测将构成 常规实验室认可系统的壹部分。 当这些不知道时，下面举例说明如何测定稳定性。 溶液中分析物的稳定性： 制备新鲜分析物储备液，且按试验指南稀释以获得足够份数（例如40）的 指定浓度的溶液（未建立允许限量的物质，为最小要求性能限度，其他物质围绕允 许的限度）。准备俩种分析物溶液，壹种作为添加的溶液，壹种作为最终的分析溶 液，以及其他感兴趣的溶液（例如衍生的标准品）。 依据试验指南测定分析物

37、于新鲜制备的溶液中的含量。 分装适宜的体积至合适的容器中，贴标签且根据计划保存： 表 10 分析物于溶液中稳定性测定计划 保存条件 20 C 十4 C 十20 C 暗处 10 等份试样 10 等份试样 10 等份试样 亮处 一 一 10 等份试样 保存时间能够选择为1、2、3、4星期或根据需要选择更长时间，必要 时直到于鉴别和或定量试验中观察到第壹次降解现象。要记录最长保存时间和最 佳保存条件。 每壹等份分试样中分析物浓度的计算应以新鲜制备的分析物溶液的浓 度为100 %进行。 剩余的分析物（戸Ci X 10/C新鲜 式中：Ci=某壹时间点的浓度； C新鲜二新鲜溶液的浓度。 基质中分析物的稳定

38、性： 只要可能，应选用实际的样品。得不到实际的样品时，应用添加分析物 的基质。 当能够得到实际的材料时，材料的浓度应于新鲜配制时测定。材料进壹 步等份分样品能够于1、2、4和20周后取且测定浓度。组织应至少储存于一 20 C 以下或根据要求采用更低的温度。 如果得不到实际的材料，取壹些空白材料且混合均匀。将材料分为 5 等 份样品，每份样品中添加分析物，分析物最好制备于少量水溶液中，立即分析壹 份样品。储存剩余的样品于至少于一 20 C以下或根据 要求采用更低的温度，且于 1、2、4和20周后分析。 3.1.1.5 校准曲线 当校准曲线用于定量时： 至少有五个水平 （包括零 ）用于绘制曲线；

39、要描述曲线的工作范围； 要描述曲线的数学公式和数据对曲线的吻合情况； 要描述曲线可接受的参数范围。 当必须进行基于壹个标准溶液的壹系列校准时，要指出校准曲线参数可接受的范 围，该范围能够于不同的系列变化。 对于筛选方法，线性回归方程的关联系数不应低于 0.98 ，对于确证方法，关 联系数不应低于 0.99 。测试溶液中被测组分浓度必须于校准曲线的线性范围内 传统的确证程序 依据传统的方法计算参数要求有几个单独的试验工作。每壹工作特性由每壹 主要变化决定 （见上述的实用性 / 耐用性项下 ）。对于多组分分析方法，只要先前可 能的有关干扰能被排除，几个分析物能够被同时分析。几个工作特性能够被壹个

40、相似的方法确定。所以，为减少工作量，建议可能的情况下组合试验 （例如，重现 性和实验室内的特异性检测的重现性，确定决定限的空白样品分析和特异性检测 的试验 ）。 3.1.2.1 回收率 如果没有认证过的基准物质， 回收率必须通过空白添加试验确定， 举例如下： 选择 18 等份空白样品，分别以 1 、1.5、2 倍最小要求性能限量或 0.5、1、 1.5 倍允许限量添加到 6 等份样品； 分析样品且且计算每份样品的浓度； 用下列方程式，计算每份样品的回收率； 计算平均回收率和每壹添加 水平 6 个结果的 CV ； 回收率（戸100 X测定含量/添加浓度水平。 这个测定回收率的常规方法是于 3.5

41、 中描述的标准附加方法的变种，用于： 样品被认为是用空白样品而非要分析的样品； 试验样品有相同的质量和试验部分提取物有相同的体积； - 加入到第二（添加）试验部分的校准标准品的数量记为 XADD（XADD =P A A）； XI是空白的测定值、X2是第二（添加）试验部分测定值； 然后，回收率（） = 100（X 2XI）/XADD 当没有得到任何上述条件 （或假定 ），那就意味着测定回收率的程序不得不完全执 行 3.5 中描述的标准附加方法。 重复性 制备壹系列同壹基质的样品，添加分析物使浓度为 1 、1.5 、2 倍最小要求性 能限量或 0.5、 1 、1.5 倍允许限量； 每壹水平的分析应

42、至少重复 6 次； 分析样品； 计算每份样品的测定浓度， 求出平均值、标准偏差和添加样品的变异系数 （ ）； 至少于俩个其他条件下重复这些步骤： 计算所有的平均浓度和添加样品的 CVs。 3.1.2.3. 实验室内的重现性 制备壹系列指定试验物质 （同壹的或不同的基质 ）的样品，添加分析物使浓度 为 1、1.5、2倍最小要求性能限量或 0.5、1、1.5 倍允许限量： 每壹水平的分析应至少重复 6 次； 由不同的操作者于不同的环境中至少俩次重复这些步骤，如不同批次的试 剂、溶剂等，不同的室温，不同的仪器等，如果可能的话； 分析样品： 计算每份样品的测定浓度： 求出平均值、标准偏差和添加样品的变

43、异系数 （ ）。 重现性 当重现性需要验证时，实验室应当依据 ISO5725 2（5） 参和合作研究。 3.125确定限 （CCa 确定限要依据“分析方法的工作标准和其他要求” 2 部分）中关（ 第于鉴别或 鉴别加定量定义的要求确定。 如果该物质的允许限度仍没有建立，则按照下列方法确定 CCa : 要么按照 ISO11843（17） 采用校准曲线方法 （这里指的是净状态变量的临 界值 ）。于这种情况下，应使用空白物质，按照等距离梯度添加物质，使之等于和 高于反应所需的最低量。分析样品。鉴定后，根据添加的物质浓度绘图。 Y 轴上 的相应浓度加实验室内部重现性的标准差的 2.33 倍，即等于决定限

44、度。这种方 法仅适用于定量检测 =1 %）：或 通过分析每种矩阵至少 20 个空白物质，以便能够计算预期存于分析物 的时间窗口中信号和噪音比。能够将信号嗓音比的 3 倍作为决定限度。这种方法 适用于定性和定量检测。 如果该物质的允许限度已经建立，则按照下列方法确定 CCa : 要么按照 ISO11843（17） 采用校准曲线方法 （这里指的是净状态变量的临 界值 ）。于这种情况下，应使用空白物质，按照等距离梯度添加物质，使之位于允 许限度周围。分析样品。鉴定后，根据添加的物质浓度绘图。处于允许限度时的 相应浓度加实验室内部重现性的标准差的 1.64倍，即等于决定限度 =5%）； 或 通过分析每

45、种矩阵至少 20 个添加了允许限度的分析物的空白物质。 处于 允许限度时的浓度加相应标准差的 1.64倍，即等于决定限度 =5a）。也可见 第 5 款和 3.2。 3.1.2.6检测容量 （CC）B 应根据所定义的 （见第 2 部分 ）筛选、鉴别或鉴别加定量的要求确定检测容量。 如果该物质的允许限度仍没有建立，则按照下列方法确定 cc B： 按照 ISO11843（17） 采用校准曲线方法 （这里指的是净状态变量的最低可 检测值 ）。 于这种情况下，应使用有代表性的空白物质，按照等距离梯度添加物质，使 等于和低于反应所需的最低量。分析样品。鉴定后，根据添加的物质浓度绘图。 决定限度时的相应浓度

46、加决定限度时的平均检测含量的实验室内部重现性标准 差的1.64倍，即等于检测容量 =5鳴）； 分析每种矩阵至少 20 个添加有决定限度水平的分析物的空白物质。分 析样品，对分析物进行鉴别。决定限度值加检测含量的实验室内部重现性标准差 的1.64倍，即等于检测容量 =5嵋）； 于不能获得定量结果时，能够通过对添加量大于或等于决定限度的空白 物质进行研究来确定检测容量。于这种情况下，仅仅保留w 5%错误的顺应的结 果，浓度水平等于该方法的检测容量。因此，为了保证该检测具有可靠的基础， 应至少对壹个浓度水平进行至少 20 个次检测。 如果该物质的允许限度已经建立，则按照下列方法确定 CCB : 要么按照 ISO11843（17） 采用校准曲线方法 （这里指的是净状态变量的最 低可检测值 ）。于这种情况下， 应使用有代表性的空白物质，按照等距离梯度添加 物质，使之位于允许限度周围。分析样品且鉴定分析物。计算决定限度时的平均 检测含量的标准差。决定限度时的相应浓度加实验室内部重现性标准差的 1.64 倍，即等于检测容量 =5嗚）；或 通过分析每种矩阵至少 20 个添加了决定限度的分析物的空白物质。 处于 决定限度时的值加相应标准差的1.64倍，即等于决定限度 =5齊)。 也可见 3.2。 3.1.2.7 耐用程度(大的变化) 应于不同实验条件下对分析方法进行检验，例如