2019年沙门氏菌检验

1、沙门氏菌检验中血清学试验常见问题、发布日期：2012-09-24 来源：北京陆桥技术有限责任公司浏览次数：135核心提示：沙门氏菌检验中血清学试验常见问题團血清学鉴定是沙门氏菌检验中的重要鉴定方法，包括菌体抗原（O鉴定、鞭毛抗原（H）鉴定和Vi抗原鉴定。由于血清学试验涉及的内容很多，所以我们在此给大家列出几个常见问题，以供大家在日常工作中参考。1、沙门氏菌判定时以生化试验结果为主还是血清学试验结果为主？我们在判定时应该以生化试验结果为主，在生化试验的基础上进行血清学判定。有的试验人员会直接用多价血清进行试验， 不进行生化试验，这是绝对不可取的。因为血清学的原理是 抗原抗体结合，非沙门氏菌的微生

2、物也有可能带有沙门的类似抗原的。所以我们做鉴定的时候，必须先进行生化试验，在生化试验的基础上进行血清学鉴定。2、血清学试验要做到什么程度？如果我们只需要鉴定某个菌株是否属于沙门氏菌，那只需要做O多价和H多价血清就可以了。如果需要鉴定某个菌株具体是什么沙门氏菌，比如是否为鼠伤寒沙门氏菌或是否为肠炎沙门氏菌，那就需要进行血清学分型试验，从多价血清一直做到 O抗原和H抗原的单因子，然后参照GB 4789.4-2010沙门氏菌检验标准中附录 B的表格查找对应的沙门菌名。3、 O多价血清不凝集，就一定是O抗原阴性么？我们在做O多价血清时，如果没有凝集并不能直接判定为阴性，因为我们还要考虑Vi抗原的影响。

3、Vi抗原属于K抗原群，是会阻隔O抗原和相应抗体的结合，所以有Vi抗原存在时， O多价血清是不会凝集的。GB 4789.4-2010沙门氏菌检验标准中提到已知具有Vi抗原的菌型有：伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌和都柏林沙门氏菌。因此，我们必须去除Vi抗原的影响。具体方法是将待检菌做成浓菌液，放入100C沸水中煮沸15-60分钟，目的是破坏Vi抗原，然后再挑取菌液做 O多价血清。如果还是不凝集，才能判定为阴性。血浆凝固酶实验的操作说明堅I 程k|发布日期：2012-09-24 来源：北京陆桥技术有限责任公司浏览次数：99核心提示：CM304冻干血浆用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验的操作说明團北京

4、陆桥CM304冻干血浆，用于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验，操作说明如下： 在Baird-Parker平板上挑取可疑待测单菌落，或将可疑菌接种营养琼脂平板上纯化，转接至含5mlBHI液体培养基的试管中，36± 1C培养 18-24h ;BHI 吸取0.5ml无菌水到CM304冻干血浆西林瓶中，摇匀使之溶解均匀，再加入上述新鲜培养物0.2-0.3ml，混合均匀后放置 36± 1C培养。 间隔每0.5h观察一次结果，直至 6h结束，若出现凝固（凝固体积大于原体积一半）即待测菌血浆凝固酶为阳性，否则为阴性。注意：测试时须同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的新鲜肉汤培养物作为

5、对照（建议阳性菌株可选择金黄色葡萄球菌标准菌ATCC6538阴性菌株可选择表皮葡萄球菌或白色葡萄球菌标准菌）。无菌取样技术、*发布日期：2010-09-01浏览次数：4888核心提示:本单元讲述了无菌取样操作， 在讨论无菌取样的原因和采集方法之前,须要理解“无菌的”的这一术语，&d遵1本单元讲述了无菌取样操作，在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须 要理解“无菌的”的这一术语，“无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中， 避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集 过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。无菌样品的采集基本是为了支持、针对工厂的卫生条件状

6、况的检查结果。一、检验前的准备工作：1. 包装无菌取样的工具：拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的的。 除非 使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。为了避 免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识， 象样品号、取样 日期、取样人等。这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。 附 加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来，因此不用预先标明。人员的工具设施，象工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助 于证明采集者没有污染到食物产品或样品。2. 生产线

7、样品 In-Line Samples :生产线样品一般是指原材料，原料生产用水、包装材料或其他任何使用在生 产线的材料。生产线样品的采集一般用来确定细菌污染源是否来自于原材料或加工序中 的某些地方。3. 环境样品：环境样品用细菌拭子，（注：细菌拭子样品不能给出/测出微生物的定时结 果，因为样品非常小，显著微生物会经常丢失），棉拭子的取样部位一般来自于 食品接触面，地板喷溅物。墙壁、顶部管道和检验中考察的其他潜在污染源程序，并且记录可能的联系，在环境样品来源和食物产品的污染方面， 可以使样品具有 意义，并且是提倡这样做的，例如：地面喷溅水：工人从有地面污水的地方走过后又回到加工区域吗？墙壁：墙壁

8、上面和在制品上面有昆害虫吗？天花板：冷凝物或喷漆有无掉落到产品上或被发现与产品相接触？4. 某些准备干冰：（有的称为 gel backs ）如果使样品在贮运过程中保持冷却，一些种类的制冷剂是必需的。检查观看 干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用湿冰，湿冰可以由工 厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干冰应在检验前获 得。盒子或制冷皿：检验员需要贮藏、运输他们的样品，如果样品不需冷冻，那么用一个盒子即 可，但如果样品需要冷却，一个标准的制冷皿或保温箱是必须使用的， 一般来讲 制冷皿随带着一个塑料袋，样品可以放还袋子里，制冷剂象干冰，等可以放置在 袋外，这样样品被

9、冰污染的可能性就被避免了。灭菌容器：从塑料袋到灭菌的加仑漆桶，可以用于有锐利边面的产品如蟹、虾等。取样工具：取样工具包括：茶匙、角匙、尖嘴钳、fovceps tongs量筒和烧杯，工具的 类型一般由取样产品来决定所有取样设施和容器的灭菌日期应当被检查、 灭菌时间应当在仪器设施的标 签和包装上标明，一些仪器设施可以在当地实验室灭菌处理或购买灭菌仪器，在当地实验室灭菌的仪器设施一般可以保持至少两个月，过期后设施必须重新灭 菌。灭菌手套：灭菌手套在采样中并非必须启用，如果一个产品在样品收集过程中必须被接 触，那么最好让工厂生产线的工人来做（加工处理产品的工人），将样品放入收 集容器中，既然工人在生产

10、过程中处理接触产品， 那么我们就不能认为他们对产 品又有附加的污染。当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上，手套的大小必须适合工作的需 要。无菌棉拭子：一般用于拭取仪器设施和工厂环境区域，使用棉拭子一般有一个正确的程 序，打开棉拭子剥掉表皮，然后必须小心的放在试管头上，注意不要沾染棉拭子 的外端；下一步擦拭要取样的部位，象案板头或顶部管道，然后从试管头上小心 翼翼地将拭子放入一一将其全部堆入直到试管中部。灭菌全包装袋：袋子必须购买灭菌的，使用时只需撕掉封头，用提供的地方张开袋子，将样 品放入，然后将袋子顶端卷起，用线绳扎实牢；底部应当折叠两次，以便线绳不 会穿透塑料袋，导致样品泄露。当样品收集

11、时，样品采集时的条件例如产品的温度、 地点等，连同扦样样品 号唛头，一并记录入检验员的注释说明中，取样的样品可以从样品号、采集日期、 附加样品号，最初调查人和其他鉴别信息事区分。当采集无菌样品时，一条最重要的规则是：千万别污染样品。这需要样品采集人非常小心地采集所有附加样品，确保不违反这条规则。二、取样方案微生物检验的特点是一个以小份样品的检测结果来说明一大批食品卫生质 量，因此，用于分析的样品的代表性至关重要，也即样品的数量、大小和性质对 结果判定产生重大影响。要保证样品的代表性首先要有一套科学的抽样方案，其次使用正确的抽样技术，并在样品的保存和运输过程中保持样品的原有状态。一般说来，进出口

12、贸易合同对食品抽样量有明确规定的，按合同规定抽样； 进出口贸易合同没有具体抽样规定的， 可根据检验的目的，产品及被抽样品批的 性质和分析方法的性质确定抽样方案。目前最为流行的抽样方案为icmsF推荐的 抽样方案和随机抽样方案，有时也可参照同一产品的品质检验抽样数量抽样，或按单位包装件数N的开平方值抽样。无论采取何种方法抽样，每批货物的抽样数 量不得少于5件。对于需要检验沙门氏菌的食品，抽样数量应适当增加，最低不 少于8件。ICMSFjt荐的抽样方案ICMSF的采样设想及其基本方法用于分析所抽样品的数量、大小和性质对结果会产生很大影响。在某些情况 下用于分析的样品可能代表所抽“一批” （lot

13、）样品的真实情况，这适合于可 充分混合的液体，如牛奶和水。在“多批” （Lots或“batchers ”）食品的情况下就不能如此抽样，因为“一批”容易包含在微生物的质量上差异很大的多个单元。因此在选择抽样方案 之前，必须考虑诸多因素（ICMSF 1986）,包括：检验目的产品及被抽样品的性质分析方法ICMSF提出的采样基本原则，是根据（1）各种微生物本身对人的危害程度 各有不同。（2）食品经不同条件处理后，其危害度变化情况：降低危害度； 危害度未变；增加危害度，来设定抽样方案并规定其不同采样数。目前，加 拿大、以色列等很多国家已采用此法作为国家标准。在进行详细叙述之前，先解释四个代号：n系指一

14、批产品采样个数。c:系指该批产品的检样菌数中，超过限量的检样数，即结果超过合格菌数 限量的最大允许数。m系指合格菌数限量，将可接受与不可接受的数量区别开。M系指附加条件，判定为合格的菌数限量，表示边缘的可接受数与边缘的 不可接受数之间的界限。1. ICMSF的采样方法有些实验室在每批产品中，仅采一个检样进行检验，该批产品是否合格，全 凭这个检样来决定。ICMSF方法与此不同，它是从统计学原理来考虑，对一批产 品，检查多少检样，才能够有代表性，才能客观地反映出该产品的质量而设定的。 ICMSF方法中包括二级法及三级法两种。二级法只设有n c及m值，三级法则有n、c、m及M值。M即附加条件后判定合

15、格的菌数限量。（1）二级抽样方案。自然界中材料的分布曲线一般是正态分布，以其一点 作为食品微生物的限量值，只设合格判定标准m值，超过m值的，则为不合格品。 检查在检样是否有超过m值的，来判定该批是否合格。以生食海产品鱼为例n=5,c=0, m=10, n=5即抽样5个，c=0即意味着在该批检样中，未见到有超过 m值 的检样，此批货物为合格品。(2) 三级抽样方案。设有微生物标准 m及M值两个限量如同二级法，超过 m值的检样，即算为不合格品。其中以m值到M值的范围内的检样数，作为c值, 如果在此范围内，即为附加条件合格，超过 M值者，则为不合格。例如：冷冻生 虾的细菌数标准n=5，c=3，m=l

16、0，M=l0,其意义是从一批产品中，取5个检样, 经检样结果，允许w 3个检样的菌数是在 m�M值之间，如果有3个以上检样 的菌数是在m�M值之间或一个检样菌数超过 M值者，则判定该批产品为不合 格品。(3) . ICMSF寸食品中微生物的危害度分类与抽样方案说明为了强调抽样与检样之间的关系，ICMSF已经阐述了把严格的抽样计划与食 品危害程度相联系的概念(ICMSF 1986)。在中等或严重危害的情况下使用二 级抽样方案，对健康危害低的则建议使用三级抽样方案。ICMSF是将微生物的危害度、食品的特性及处理条件三者综合在一起进行食 品中微生物危害度分类的。这个设想是

17、很科学的，符合实际情况的，对生产厂及 消费者来说都是比较合理的。下面结合表 1加以说明。表1、ICMSF按微生物的危害度及食品处理进行情况分类危害程度对象微生物级别食品经不同处理后的危害度减少(加热)无变化(冷 冻品立刻进 食)增加危害度(未 加热吃到吃前还 有一段时间)1.食品的保藏细困数例1例2例3n=5 c=3n=5 c=2n=5 c=1二2.轻度间接指大肠困群例4例5例6级标菌方大肠杆菌n=5 c=3n=5 c=2n=5 c=1案金黄色葡萄球菌（指标菌）3.中度程度局 部传播金黄色葡萄球菌例7例8例9蜡样芽抱杆菌n=7 c=2n=5 c=1n=10 c=1产气夹膜梭困1.中度程度广沙门

18、氏菌副溶血例10例11例12-泛传播性弧困致病性大 肠杆菌n=5 c=0n=10 c=0n=20 c=3级方案2.严重程度肉毒梭菌例13例14例15霍乱弧菌n=15 c=0n=30 c=10n=60 c=0伤寒沙门氏菌副伤寒沙门氏菌注：表中“减少”系指食品经加热杀死污染的细菌。“无变化”系指微生物数不增减例如冷冻食品或干燥食品。“增加”系指将食品保存在不良环境中使微生物易于繁殖和产毒。根据上表15种情况的举例，1-3可用三级法，4-5可用二级法来判定是否合考虑到以上15种情况，分别设定不同的取检样数及检样污染数，在 1-9例 种检样需采5个（n=5），而污染检样数设定为c=3, 2, 1。在1

19、0-15例用二级 法则不得检出该致病菌c=0。例如冷冻食品，细菌数按例2，大肠菌按例5，金 黄色葡萄球菌按例8,沙门氏菌按例11的二级法判定。对食品处理应酌情考虑，例如生肉火腿中的金黄色葡萄球菌， 被腐败菌所抑 制，不易发生食物中毒，适用例7和例&烹调加工后的熟肉，对腐败菌没有抵 抗力，则易发生食物中毒，适用例 9。加热盐腌的火腿，水分活性为0.86以下, 金黄色葡萄球菌有增殖的可能性，因此适用例 9。沙门氏菌水活性在0、94以下 不能繁殖，适用例11,如上所述，应根据各种食品的危害度进行设定。ICMSF方法是以二级法、三级法和抽样的概念为基础，再将微生物的知识加 进来，则可以提出各种

20、食品的微生物标准。如表 2。为了安全，冷冻生虾加热吃，减少危害度适用例 1、4、10。冷冻加工虾， 为了不加热就食，在解冻中有增强危害度的可能性，适用例3、6、9、12,对象微生物特别指定金黄色葡萄球菌肠毒素， 两者虽菌数限量是相同的，但情况有所 不同，分别适用c=3, c=1，因此不依靠菌数限量，而用合格率来控制。表2、ICMSF下的微生物标准食品名称检杳项目例级别nc困数限量/gmM冷冻生虾细困数1353106107大肠困群43534400金黄色葡萄球菌435310332X 10副溶血性弧菌10250102I I冷冻烹调细困数3351106107虾大肠菌群63514400金黄色葡萄球菌93

21、511032X 103副溶血性弧菌12250102（4）.随机抽样方案在现场抽样时，可利用随机抽样表进行随机抽样。随机抽样表系用计算机随 机编制而成，包括一万个数字。其使用方法如下：a. 先将一批产品的各单位产品（如箱、包、盒等）按顺序编号。如将一批600包的产品编为1、2600。b. 随意在表上点出一个数。查看该数字所在的行和列。如点在第48行、第10列的数字上。c. 根据单位产品编号的最大位数（如 A1，最大为三位数），查出所在行的 连续列数字（如A2所点数为第48行、第10、11和12列，其数字为245）,则 编号与该数相同的那一份单位产品，即为一件应抽取的样品。d. 继续查下一行的相同

22、连续列数字（如按 A3即第49行的第10、11和12 列的数字，为608）。该数字所代表的单位产品为另一件应抽取的样品e.依次按A4所述方法查下去。当遇到所查数超过最大编号数量(如第 50 行的第10、11和12列的数字为931、大于600)则舍去此数，继续查下一行相 同列数，直到完成应抽样品件数为止。三、抽样方法确定了抽样方案以后，抽样方法对抽样方案的有效执行和保证样品的有效性 代表性至关重要。抽样必须遵循无菌操作程序，抽样工具如整套不锈钢勺子、镊 子、剪刀等应当高压灭菌，防止一切可能的外来污染。容器必需清洁、干燥、防 漏、广口、灭菌，大小适合盛放检样。抽样全过程中，应采取必要的措施防止食

23、品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。 确定检验批，应注意产品的均质性 和来源，确保检样的代表性。常见的抽样方法有：1 直接食用的小包装食品：尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。2.统装或大容器包装的液体食品：(1) .抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；(2) .抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样 品，装人灭菌盛样容器的量，不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品 摇匀；(3) .取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作 记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；(4) .如为非冷藏易腐食品，应迅速将所抽样品冷却至0-4 Co3 统装或大容器包装的固体和固体食品:(1) .每份样品应用灭菌抽样器由几个不同部位采取，一起放入一个灭菌 容器