投稿类型麻醉学基础研究

1、投稿类型：麻醉学基础研究题 目：转IB大鼠神经前体细胞移植治疗局灶性脑缺血的实验研究作者单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室邮 编： 430030作者姓名： 钱巍，姚文龙，张传汉，祝畅，柳璐，桂伶俐摘要内容：目的 探讨转IB突变型基因的大鼠永生化神经前体细胞（immortalized neural progenitor cell strain，INPCs）移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响、移植细胞在模型大鼠脑内的致瘤性以及分化情况。方法 雄性SD大鼠36只，随机分为3组（n=12）：PBS对照组，INPCs移植组，转IB INPCs移植组，均采用线栓法建立缺血1h的大脑中动

2、脉缺血（Middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，缺血再灌注后24 h 进行神经功能缺失评分（Zea longa 5分法），排除评分<=1或>=4的大鼠并予随机补足。缺血后3d通过立体定位注射方法分别将PBS、BrdU标记的INPCs及BrdU标记的转IB INPCs移植到3组大鼠纹状体缺血半暗带区（AP-0.5mm、R2.5mm、V4.5mm）。模型制作成功后3d（定位注射前）以及定位注射后1w、2w、3w、4w对大鼠进行神经损害严重程度评分（Neurological Severity Score，NSS)。细胞移植后1w和4w分别随机处死

3、各组大鼠6只，取注射针道附近脑组织制作冠状冰冻切片，常规HE染色检测植入细胞的致瘤性；通过免疫荧光双标技术检测BrdU、GFAP双阳性的星型胶质细胞，以及BrdU、NSE双阳性的神经元，观察INPCs在脑缺血大鼠脑内的存活及分化情况。结果采用SPSS13.0进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果如表1所示，3组间定位注射前、后各时点NSS评分比较差异均无统计学意义（P>0.05）。细胞移植后1w及4W，3组切片HE染色均未发现明显组织及细胞异形性。移植后1w及4W，INPCs移植组及转

4、IB INPCs移植组切片免疫荧光双标染色可见大大鼠全脑散布类圆形核BrdU阳性细胞，部分细胞呈BrdU、GFAP双阳性或BrdU、NSE双阳性；1w时针道附近BrdU阳性细胞聚集趋势更为明显，4W时在两种细胞植入组可观察到更多呈BrdU、GFAP双阳性或BrdU、NSE双阳性的细胞。结论 INPCs及转IB突变型基因的INPCs均可在模型大鼠脑内存活,并部分分化为神经元和星形胶质细胞，植入细胞可向对侧脑区迁移，且无致瘤性，但短期观察表明细胞移植对模型大鼠的神经功能无显著影响。该项研究为转IB基因INPCs移植治疗各种脑损伤的可行性提供了实验理论依据。表1 MCAO大鼠神经损害严重程度评分组别缺血后3d移植后1w移植后2w移植后3w移植后4w对照组3.36±1.63n=122.55±1.57n=122.67±1.51n=62.33±1.75n=62.33±1.75n=6INPCs移植组3.83±2.04n=123.00±1.41n=122.87±1.36n=62.38±1.30n=61.67±1.51n=6转IB INPCs移植组4.14±0.86n=122.43±1.16n=122.70±1.1