酶工程第五章酶、细胞、原生质体固定化

1、n 工作原理工作原理: 利用试纸上的固定化酶利用试纸上的固定化酶 (葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶, Glucose oxidase , GOD) 与血液中的葡萄糖反应产生与血液中的葡萄糖反应产生的电流来测血糖值。的电流来测血糖值。n强生稳豪倍易血糖仪强生稳豪倍易血糖仪 葡萄糖氧化酶电极葡萄糖氧化酶电极 酶电极示意图酶电极示意图 -D-葡萄糖葡萄糖O2 D-葡萄糖酸葡萄糖酸-1, 5-内酯内酯H2O2半透膜半透膜酶胶层酶胶层感应电极感应电极第六章第六章 酶、细胞、原生质体固定化酶、细胞、原生质体固定化1. 酶（酶（Enzyme）nOrganic chemical substance (a catal

2、yst) formed in living cells, able to cause changes in other substance without being changed itself.n活细胞产生的，能在细胞内外起活细胞产生的，能在细胞内外起催化作用催化作用的生的生理活性物质理活性物质。知识点回顾知识点回顾酶酶单纯酶单纯酶结合酶结合酶（全酶）（全酶）= = 酶蛋白酶蛋白 + + 辅因子辅因子辅酶辅酶辅基辅基酶的催化专一性主要决定于酶的催化专一性主要决定于酶蛋白酶蛋白部分。部分。辅因子辅因子通常是作为电子、原子或某些化学基团的载体。通常是作为电子、原子或某些化学基团的载体。2. 酶

3、的组成酶的组成p 必需基团必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，这些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失。则酶的活性丧失。p 活性中心活性中心：酶分子中直接与底物结合，并和酶酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接相关的部位。催化作用直接相关的部位。必需基团必需基团活性中心活性中心活性中心外活性中心外结合基团结合基团催化基团催化基团专一性专一性催化性质催化性质3. 酶的活性中心（酶的活性中心（active center）u优点：优点： 催化效率高催化效率高 专一性强专一性强 反应条件温和反应条件温和 催化活性受到调节和控制催化活性受到调节和控制4. 酶的特性酶的特性u缺点：缺点： 溶液

4、酶很不稳定溶液酶很不稳定 增加分离的难度和费用增加分离的难度和费用 影响产品质量影响产品质量 回收困难，一次性使用回收困难，一次性使用固定化技术固定化技术固定化酶（固定化酶（immobilized enzyme）有效改善方法之一有效改善方法之一n思路思路：设计一种方法，将酶束缚于特殊的相中，：设计一种方法，将酶束缚于特殊的相中，使它与整体分开但仍能进行底物和效应物的分使它与整体分开但仍能进行底物和效应物的分子交换。子交换。n效果效果：固定化的酶可像一般化学反应中的：固定化的酶可像一般化学反应中的固体固体催化剂催化剂一样，既有酶催化特性，又有一般化学一样，既有酶催化特性，又有一般化学催化剂可回收

5、、反复使用等优点，并可使生产催化剂可回收、反复使用等优点，并可使生产工艺连续化、自动化。工艺连续化、自动化。 酶工程原理和基本过程酶工程原理和基本过程 菌种菌种扩大培养扩大培养发酵发酵发酵酶液发酵酶液酶的提取酶的提取 酶成品酶成品 原料原料 前处理前处理 杀菌杀菌 酶反应器酶反应器 反应液反应液 产品提取产品提取 产品产品酶的固定化酶的固定化固定化酶发展历史固定化酶发展历史n1916年，年，Nelson和和Griffin发现酶的固定化现象发现酶的固定化现象（蔗糖酶吸附到骨炭上仍具催化活性）。（蔗糖酶吸附到骨炭上仍具催化活性）。 n20世纪世纪50年代，年代，Grubhofer和和Schleit

6、h采用聚氨基采用聚氨基苯乙烯树脂为载体，分别制成固定化的胃蛋白酶、苯乙烯树脂为载体，分别制成固定化的胃蛋白酶、淀粉酶等。淀粉酶等。n1969年，千佃一郎首次在工业规模上用固定化氨年，千佃一郎首次在工业规模上用固定化氨基酰化酶从混合氨基酸中生产基酰化酶从混合氨基酸中生产L-氨基酸。氨基酸。 n1971年，第一届国际酶工程会议在美国召开，会年，第一届国际酶工程会议在美国召开，会议的主题是议的主题是固定化酶（固定化酶（immobilized enzyme） 。 n我国：我国：1970年（中科院微生物所、上海生化所）。年（中科院微生物所、上海生化所）。固定化酶发展历史固定化酶发展历史n1973年，日本

7、首次在工业上应用固定化大肠杆菌年，日本首次在工业上应用固定化大肠杆菌菌体中的天冬氨酸酶生产菌体中的天冬氨酸酶生产L-天冬氨酸。天冬氨酸。n20世纪世纪70年代后期：年代后期：固定化细胞技术固定化细胞技术n1982年，日本首次用年，日本首次用固定化原生质体固定化原生质体生产谷氨酸生产谷氨酸n近年来，随着近年来，随着纳米材料纳米材料和和磁性材料磁性材料等新材料的出等新材料的出现，使固定化酶又成为研究热点，目前酶的固定现，使固定化酶又成为研究热点，目前酶的固定化方法已超过化方法已超过200种。种。本章主要内容本章主要内容n第一节第一节 酶固定化酶固定化n第二节第二节 细胞固定化细胞固定化n第三节第三

8、节 原生质体固定化原生质体固定化第一节第一节 酶的固定化酶的固定化水溶性酶水溶性酶水不溶性载体水不溶性载体水不溶性酶（固定化酶）水不溶性酶（固定化酶）固定化技术固定化技术早期：早期： 水不溶酶（水不溶酶（water insoluble enzyme） 固相酶（固相酶（solid phase enzyme）优点优点（1）提高酶稳定性）提高酶稳定性（2）可反复或连续使用；易于和反应产）可反复或连续使用；易于和反应产物分开；酶的使用效率提高，成本降低物分开；酶的使用效率提高，成本降低（3）酶反应过程可严格控制）酶反应过程可严格控制（4）产物溶液无酶残留，简化提纯工艺；）产物溶液无酶残留，简化提纯工艺

9、；增加产物收率，提高产物质量增加产物收率，提高产物质量（5）较游离酶更适合多酶反应）较游离酶更适合多酶反应缺点缺点（1）固定化时酶活有损失）固定化时酶活有损失（2）增加了生产初始成本）增加了生产初始成本（3）只能用于可溶底物且较小分子）只能用于可溶底物且较小分子（4）与完整菌体相比不适宜于多酶反应）与完整菌体相比不适宜于多酶反应2.固定化酶的特点固定化酶的特点载体结合法载体结合法交联法交联法包埋法包埋法物理吸附物理吸附共价结合共价结合离子结合离子结合酶的固定化酶的固定化脂质体脂质体凝胶型凝胶型微囊型微囊型热处理法热处理法载体结合法载体结合法（1）物理吸附法）物理吸附法a. 无机吸附剂：无机吸附

10、剂：硅藻土、硅胶、氧化铝、磷酸钙胶、微孔玻璃、羟硅藻土、硅胶、氧化铝、磷酸钙胶、微孔玻璃、羟基磷灰石、活性炭等。无机吸附剂的吸附容量基磷灰石、活性炭等。无机吸附剂的吸附容量一般一般很低很低，多在，多在1mg蛋白蛋白/g吸附剂。吸附剂。b. 有机吸附剂：有机吸附剂：纤维素、胶原、火棉胶等。有机吸附剂的吸附容量纤维素、胶原、火棉胶等。有机吸附剂的吸附容量一般较高一般较高，如火棉胶膜吸附木瓜蛋白酶、碱性磷酸，如火棉胶膜吸附木瓜蛋白酶、碱性磷酸酯酶等，吸附容量为酯酶等，吸附容量为70mg蛋白蛋白/cm2膜。膜。物理吸附法固定化酶举例物理吸附法固定化酶举例载体载体固定化酶固定化酶活性炭活性炭-淀粉酶、淀

11、粉酶、-淀粉酶淀粉酶蔗糖转化酶、葡萄糖淀粉酶蔗糖转化酶、葡萄糖淀粉酶多孔玻璃多孔玻璃核糖核酸酶、木瓜蛋白酶核糖核酸酶、木瓜蛋白酶脂肪酶、葡萄糖氧化酶脂肪酶、葡萄糖氧化酶氧化铝氧化铝葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶碳酸钙凝胶碳酸钙凝胶亮氨酸氨肽酶亮氨酸氨肽酶纤维素纤维素胰蛋白酶、核糖核酸酶胰蛋白酶、核糖核酸酶麸素麸素-淀粉液化酶淀粉液化酶硅胶硅胶磷酸化酶磷酸化酶载体载体 (2) 离子结合法离子结合法酶酶如何解决解吸附问题如何解决解吸附问题 通过通过酶蛋白化学修饰酶蛋白化学修饰来增加酶分子上来增加酶分子上电荷电荷，能有效克，能有效克服解吸附问题服解吸附问题。 例：用水溶性例：用水溶性乙烯乙烯-顺丁烯二酸酐

12、顺丁烯二酸酐共聚物共价修饰的胰蛋白共聚物共价修饰的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶、可以用酶和胰凝乳蛋白酶、可以用DEAE-纤维素纤维素和和DEAE-Sephadex载载体有效的固定。这种固定几乎是不可逆的吸附。体有效的固定。这种固定几乎是不可逆的吸附。 酶的吸附与解吸还与介质中酶的吸附与解吸还与介质中离子强度、离子强度、pH、温度、温度、蛋白质浓度蛋白质浓度及及酶和载体的特性酶和载体的特性相关。相关。 例：例：pH的变化的变化影响到载体和酶的电荷，从而影响载体对酶影响到载体和酶的电荷，从而影响载体对酶的吸附。在等电点两侧的吸附。在等电点两侧(1-2pH单位单位)吸附将明显减少。吸附将明显减少。 载体的

13、表面积、多孔性及其预处理载体的表面积、多孔性及其预处理都影响对酶的吸附。都影响对酶的吸附。 (3) 共价结合法共价结合法 酶蛋白酶蛋白N-端的氨基或端的氨基或Lys残基的残基的-氨基。氨基。 酶蛋白酶蛋白C-端的羧基、端的羧基、Asp残基的残基的-羧基和羧基和Glu残残基基-羧基。羧基。 Cys残基的巯基。残基的巯基。 Ser、 Thr 、 Tyr残基的羟基。残基的羟基。 Phe和和Tyr残基的苯环。残基的苯环。 His残基的咪唑基。残基的咪唑基。 Trp残基的吲哚基。残基的吲哚基。 Arg残基的胍基。残基的胍基。n 被偶联的基团应是酶活性的被偶联的基团应是酶活性的非必需基团非必需基团，否则将

14、，否则将导致酶失去活性。导致酶失去活性。纤维素纤维素琼脂糖胶琼脂糖胶葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶甲壳质氨基酸共聚物甲壳质氨基酸共聚物甲基丙烯醇共聚物甲基丙烯醇共聚物常常用用载载体体芳香氨基芳香氨基羟基羟基羟甲基羟甲基氨基氨基载载体体上上的的功功能能基基团团酶酶分分子子上上的的非非必必需需侧侧链链基基团团氨基氨基胍基胍基羧基羧基巯基巯基咪唑基咪唑基羟基羟基二者如何反应？二者如何反应？载体活化方法载体活化方法1. 重氮法重氮法2. 叠氮法叠氮法3. 溴化氰法溴化氰法4. 烷基化法烷基化法 reaction ? ? ? ? ? 选择适宜的固定化方法与相应的载体。选择适宜的固定化方法与相应的载体。 严格控制反

15、应条件，提高反应的专一性。严格控制反应条件，提高反应的专一性。 应用应用可逆抑制剂可逆抑制剂或或底物底物，封闭或牵制酶的活性中，封闭或牵制酶的活性中心与必需基团，避免试剂影响酶的活性构型和相应心与必需基团，避免试剂影响酶的活性构型和相应基团。基团。如：在进行腺苷三磷酸酶如：在进行腺苷三磷酸酶(ATPase)固定化时，可先固定化时，可先用对羟基汞苯甲酸用对羟基汞苯甲酸(PHMB) 保护巯基，然后通过叠保护巯基，然后通过叠氮反应将酶偶联于羧甲基纤维素上，完成固定化后，氮反应将酶偶联于羧甲基纤维素上，完成固定化后，再用还原剂使再用还原剂使-SH活化，可得到高活性的固定化酶。活化，可得到高活性的固定化

16、酶。酶酶交联法交联法n 借助借助双功能试剂双功能试剂使酶分使酶分子之间发生交联作用，制子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶成网状结构的固定化酶n 特点：特点：共价键、不使用共价键、不使用载体。载体。n 双功能试剂：双功能试剂：戊二醛、戊二醛、己二胺等。己二胺等。双功能试剂双功能试剂n 第一篇报道第一篇报道：戊二醛交联羧肽酶，得到一种：戊二醛交联羧肽酶，得到一种分子间交联的固定化酶分子间交联的固定化酶酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交

17、联成水不溶性的固定化酶；（定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶共同点：均利用共同点：均利用共价键共价键结合结合不同之处：交联法不同之处：交联法不使用载体不使用载体酶酶优点优点: 结合牢固，可以长时间使用结合牢固，可以长时间使用缺点缺点 因交联反应激烈，酶分子多个基团被交联，因交联反应激烈，酶分子多个基团被交联，酶活损失大；酶活损失大； 颗粒较小，使用不便颗粒较小，使用不便如何解决？如何解决？u 向酶溶液中加入辅助蛋白的交联过程，向酶溶液中加入辅助蛋白的交联过程，酶活酶活回收率回收率和和机械强度机械强度较交联酶法较交

18、联酶法高高。u 用双功能试剂使惰性蛋白与酶共交联：用双功能试剂使惰性蛋白与酶共交联：酶在交联反应过程中因化学修饰而引起失活，酶在交联反应过程中因化学修饰而引起失活，或因得到的酶量有限时，以一些或因得到的酶量有限时，以一些辅助蛋白，如辅助蛋白，如牛血清白蛋白、明胶、胶原、抗体等牛血清白蛋白、明胶、胶原、抗体等与酶一起与酶一起进行交联。进行交联。解决方法解决方法2：降低交联剂浓度和缩短反应时间降低交联剂浓度和缩短反应时间解决方法解决方法1：酶与辅助蛋白交联酶与辅助蛋白交联先使用明胶（蛋白质）先使用明胶（蛋白质）包埋后包埋后，再用戊二醛，再用戊二醛交联交联；先用尼龙（聚酰胺类）膜或活性炭、先用尼龙（

19、聚酰胺类）膜或活性炭、Fe2O3等等吸附吸附后，再后，再交联交联。解决方法解决方法3：与吸附法或包埋法联合使用与吸附法或包埋法联合使用热处理法热处理法将含酶细胞在一定温度下将含酶细胞在一定温度下加热处理加热处理一段时间，一段时间，使酶固定在菌体内而制备得到固定化菌体使酶固定在菌体内而制备得到固定化菌体（死细胞）（死细胞）适用：适用：热稳定性好热稳定性好的酶的酶双重固定化：与交联法或其他固定化方法联双重固定化：与交联法或其他固定化方法联用用原理：原理：将聚合物单体与酶溶液混合，再借助将聚合物单体与酶溶液混合，再借助于于聚合促进剂聚合促进剂(包括交联剂包括交联剂)的作用进行聚合，的作用进行聚合，酶

20、被包埋在聚合物中以达到固定化。酶被包埋在聚合物中以达到固定化。类型：类型：主要有主要有凝胶包埋凝胶包埋、半透膜包埋半透膜包埋、脂质脂质体包埋体包埋。包埋法包埋法 1. 凝胶包埋凝胶包埋 (gel entrapment) 常用凝胶常用凝胶天然胶：天然胶：琼脂、海藻酸钙胶、角叉菜胶、明胶琼脂、海藻酸钙胶、角叉菜胶、明胶合成胶：合成胶：聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂 制备方法制备方法u 以天然胶为载体（强度差）：以天然胶为载体（强度差）：先将天然物溶于含水介质，然后再与酶液混和，先将天然物溶于含水介质，然后再与酶液混和，最后使之胶化，制成胶包埋的固定化酶。最后使之胶化，制成胶包

21、埋的固定化酶。 如：如：胶原可以添加丁醇；角叉菜胶可以添加胶原可以添加丁醇；角叉菜胶可以添加KCl，然后冷却；海藻酸可添加然后冷却；海藻酸可添加CaCl2，使之以胶的形，使之以胶的形式沉淀下来。式沉淀下来。 u 以合成胶为载体（易失活）：以合成胶为载体（易失活）：先将酶和丙烯酰胺单体分散于水介质中，然后先将酶和丙烯酰胺单体分散于水介质中，然后加入加入N,N-甲叉双丙烯酰胺聚合，酶即包埋于形甲叉双丙烯酰胺聚合，酶即包埋于形成的聚丙烯酰胺凝胶中。成的聚丙烯酰胺凝胶中。海藻酸钠包埋胰蛋白酶步骤海藻酸钠包埋胰蛋白酶步骤l 凝胶孔径应小于酶分子直径，因而不适用于凝胶孔径应小于酶分子直径，因而不适用于大大

22、分子底物或大分子产物分子底物或大分子产物的酶类的固定化的酶类的固定化u 将酶包埋于具有将酶包埋于具有半透性半透性聚合物膜聚合物膜的的微囊内微囊内。u它使酶存在于类似细胞内它使酶存在于类似细胞内的环境中，可以防止酶的的环境中，可以防止酶的脱落，防止微囊外环境直脱落，防止微囊外环境直接接触，从而增加了酶的接接触，从而增加了酶的稳定性。同时，稳定性。同时，小分子底小分子底物物能通过膜与酶作用，能通过膜与酶作用，小小分子产物分子产物经扩散而输出。经扩散而输出。 2. 半透膜包埋法半透膜包埋法 (microencapsulation)l 乳化分散：乳化分散：取含有酶和亲水性单体的水溶液，取含有酶和亲水性

23、单体的水溶液，在不溶于水的有机溶媒中充分乳化。在不溶于水的有机溶媒中充分乳化。l 表面聚合：表面聚合：将含有疏水性单体的有机溶媒加入将含有疏水性单体的有机溶媒加入到上述乳化液中，发生聚合反应，生成的薄膜把到上述乳化液中，发生聚合反应，生成的薄膜把酶包围起来形成微型胶囊球。酶包围起来形成微型胶囊球。1 1l 清洗：清洗：反应完成后，用有机溶剂洗去未反应的反应完成后，用有机溶剂洗去未反应的剩余单体。剩余单体。 微囊微囊酶液滴酶液滴例：尼龙膜界面聚合包埋例：尼龙膜界面聚合包埋酶酶+己二胺己二胺(水水) +庚二酰氯庚二酰氯 (氯仿氯仿) 混合混合 乳化，二种单体乳化，二种单体(己二胺和庚二酰氯己二胺和

24、庚二酰氯) 在水相、有机相交界处聚合在水相、有机相交界处聚合 形成包埋酶的尼龙膜珠粒形成包埋酶的尼龙膜珠粒 Tween 20破乳化，得到微囊包埋酶破乳化，得到微囊包埋酶u原理：原理：在酶的水溶液中添加在酶的水溶液中添加表面活性剂表面活性剂，使，使之乳化形成液膜达到包埋的目的。之乳化形成液膜达到包埋的目的。u表面活性剂表面活性剂(surfactant)：具有固定的亲水亲：具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列，并能使油基团，在溶液的表面能定向排列，并能使表面张力显著下降的物质。表面张力显著下降的物质。u该法不含化学反应，简便，而且固定化是该法不含化学反应，简便，而且固定化是可可逆逆的，但

25、有渗漏的可能性。的，但有渗漏的可能性。表面活性剂乳化液膜法表面活性剂乳化液膜法：缺点：缺点：反应条件要求高，制备成本也较高。反应条件要求高，制备成本也较高。 微囊直径几微米几百微米，比表面积大，微囊直径几微米几百微米，比表面积大，物质交换迅速物质交换迅速低分子底物低分子底物可以自由通过可以自由通过并进入微囊并进入微囊内，与内，与酶反应后的酶反应后的生成物被排除在微囊外生成物被排除在微囊外酶酶本身是高分子物质不能通过微囊而本身是高分子物质不能通过微囊而被留在被留在微囊中微囊中外部的蛋白分解酶、抗体等高分子物质也外部的蛋白分解酶、抗体等高分子物质也无无法进入微囊内法进入微囊内优点优点:u 将酶包埋

26、于将酶包埋于脂质体脂质体(Liposome)中中u 脂质体：具有脂质体：具有脂双层结构脂双层结构和和一定包囊空间一定包囊空间的的微球体微球体。u 特点：特点： 具有一定的机械性能，能定向将酶等被包具有一定的机械性能，能定向将酶等被包裹物携带到体内特定部位，然后将被包裹物质裹物携带到体内特定部位，然后将被包裹物质释放。因此，其在释放。因此，其在药物应用方面药物应用方面受到重视。受到重视。3. 脂质体（脂质体（Liposome）包埋法）包埋法 包埋法包埋法是目前是目前应用最多应用最多的一种较理想的方法，的一种较理想的方法，与其它固定化方法相比：与其它固定化方法相比：优点优点：不与酶蛋白氨基酸残基反

27、应，很少改：不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，变酶的高级结构，酶活回收率高酶活回收率高。缺点缺点：只适合作用于：只适合作用于小分子底物和产物小分子底物和产物的酶。的酶。用用微胶囊微胶囊各种固定化方法的优缺点比较各种固定化方法的优缺点比较二、固定化酶的性质二、固定化酶的性质 l 影响酶催化活性的因素：影响酶催化活性的因素： 1. 构象改变和立体屏蔽构象改变和立体屏蔽 2. 分配效应和扩散限制效应分配效应和扩散限制效应（1）酶的活力）酶的活力n一般一般下降下降n解决办法：考虑相应的固定化过程可能对酶的影解决办法：考虑相应的固定化过程可能对酶的影响，避免损害酶的活性中心，有时在固定化反

28、应响，避免损害酶的活性中心，有时在固定化反应体系中会加入体系中会加入抑制剂、底物或产物抑制剂、底物或产物以保护酶的活以保护酶的活性中心。性中心。n例：乳糖酶的固定化就采用在其例：乳糖酶的固定化就采用在其抑制剂抑制剂葡萄糖葡萄糖- -内酯存在下进行聚丙烯酰胺凝胶的包埋，如此可内酯存在下进行聚丙烯酰胺凝胶的包埋，如此可获得高活力的固定化乳糖酶。获得高活力的固定化乳糖酶。（2）酶的稳定性）酶的稳定性n一般一般提高提高n原因：原因：固定化增加了酶固定化增加了酶活性构象活性构象的牢固程度，的牢固程度， 可防可防止酶分子伸展变形。止酶分子伸展变形。抑制酶的抑制酶的自身降解自身降解。固定化部分阻挡了固定化部

29、分阻挡了外界不利因素外界不利因素对酶的侵袭。对酶的侵袭。p对热的稳定性提高，可以耐受较高的温度对热的稳定性提高，可以耐受较高的温度A固定化酶固定化酶B游离酶游离酶如：氨基酰化酶，如：氨基酰化酶，70，15分钟，酶失去活性。分钟，酶失去活性。而固定化后，而固定化后， 70，15分钟，有分钟，有80%活性。活性。p对蛋白酶水解作用稳定性增强对蛋白酶水解作用稳定性增强p对变性剂作用的稳定性提高对变性剂作用的稳定性提高p保藏稳定性和操作稳定性提高保藏稳定性和操作稳定性提高u 天然胰凝乳蛋白酶在天然胰凝乳蛋白酶在pH 4.1，4保存保存4个月，个月，残留活力仅为原活力的残留活力仅为原活力的2%。偶联于琼

30、脂糖后，在。偶联于琼脂糖后，在同样条件下，却可保存同样条件下，却可保存82%的活力，有利于运输、的活力，有利于运输、贮存和重复使用。贮存和重复使用。（3）酶的最适温度）酶的最适温度u 最适温度与酶稳定性有关：多数酶固定化后热最适温度与酶稳定性有关：多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也稳定性上升，最适温度也上升上升（有例外）。（有例外）。u 例：用重氮法制备的固定化胰蛋白酶和胰凝乳例：用重氮法制备的固定化胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，其作用的最适温度比游离酶高蛋白酶，其作用的最适温度比游离酶高510；以共价结合法固定化的色氨酸酶，其最适温度比以共价结合法固定化的色氨酸酶，其最适温度比游离酶高游离酶高

31、515。u 同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，其其最适温度可能不同最适温度可能不同。u 如：如：氨基酰化酶氨基酰化酶用用DEAE葡聚糖凝胶经离子键结合法固定化后，葡聚糖凝胶经离子键结合法固定化后，其最适温度其最适温度(72)比游离酶的最适温度比游离酶的最适温度(60)提高提高12；用用DEAE纤维素固定化，其最适温度纤维素固定化，其最适温度(67)比游比游离酶提高离酶提高7；用烷基化法固定化的氨基酰化酶，其最适温度却用烷基化法固定化的氨基酰化酶，其最适温度却比游离酶则有所降低。比游离酶则有所降低。（4）酶的最适）酶的最适pH值值u 酶固定化后，对底物酶固定化后，对底物 作用的最适作用的最适pH和酶和酶 pH曲线常发生偏移曲线常发生偏移u原因：原