高效液相色谱法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量 - 李理宇-

1、CBZ 与P B 所得值呈正态分布,其中CBZ 经单测检验的Pearso n r =0.881,P =0.000,直线回归方程为:HP LC =1.852+0.725 F PIA ;PB 经单测检验的P earson r =0.984,P =0.000,直线回归方程为:H P LC =-2.460+1.083 FPI A 。CBZ 与P B 2组测定值的散点图分别见图1,图2 。图1 CBZ 经HPLC 、FPIA 法测定后的散点图Fig 1 Scatterplot of CBZ by H PLC 、FPIA m ethod图2 PB 经HPLC 、FPIA 法测定后的散点图Fig 2 Sca

2、tterplot of PB by H PL C 、FPIA meth od作者简介李理宇,女,硕士,电话:010-*,E -mail:w ox ihuandah ai 4 讨论本实验中CBZ 与P B 采用同一种H PL C 测定方法1-3,为文献中最常采用的方法,适用性强,重复性好。本实验所选数据均是患者服药后的稳态谷浓度,并且所有浓度均能够覆盖临床监测的所有低、中、高浓度范围,这种选择方法避免数据只集中在某一较窄的浓度范围之内,使得统计结果能够很好地解释数据的变化趋势。直线回归分析结果显示,无论是CBZ 还是P B,F PIA 法测定结果并不是单纯地大于或小于HP LC 法测定结果。根据

3、统计计算公式,CBZ 浓度值从理论上计算,在小于6.73mg L -1之前,H PL C 法测定结果高于F PIA 法,在大于6.73mg L-1之后,则低于F PIA 法,与本实验实际测定结果总体吻合。同样,PB 浓度值从理论计算,在小于9.64mg L -1之前,HP LC 法测定结果低于F PIA 法,在大于29.64mg L-1之后,则高于F PIA 法,而在9.6429.64mg L -1之间时,2种测定方法所得的结果基本接近,与本实验实际测定结果也总体吻合。有国外文献报道测定卡马西平和苯巴比妥F PIA 与HP LC 比较结果,FP IA 法均比H PL C 法测定结果高4。国内文

4、献所得结果与国外文献一致5。但这些文献所收集的临床样本其浓度范围较窄,均集中在中、低浓度范围,而在高浓度区采集的样本量少,使得统计结果与本实验有差别。本实验对卡马西平2种方法测定结果进行统计计算,2组浓度之间差异无显著性(P =0.840,这主要与卡马西平整体血药浓度范围窄有关。而苯巴比妥的2组结果进行统计计算时,差异具显著性(P =0.044,是否有临床意义,应该针对不同方法进行临床疗效的评价。参考文献:1 陈秋虹,何林,曾明辉,等.H PLC 法同时测定血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度J.西北药学杂志,2001,16(1:3-4.2 陈希贤,吕建新,李东.高效液相色谱法同时测定人血清

5、中茶碱与苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的含量J.中国医院药学杂志,1994,14(9:389-391.3 赵慧,邱雯,焦海胜,等.反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的血药浓度J.卫生职业教育,2006,24(3:118-119.4 W ilimow sk a J ,Gom llka E,Pasich A,et al .Comparis on of flu -orescence polarization imm unoassay an d high performance liq -uid chr om atography for determin ation of carbama

6、z epine con -centration in blood of poisoned patientsJ Przegl Lek ,2005,62(6:595-598.5 焦正,赵志刚,施孝金,等.比较H PLC 法和FPIA 法测定人血清中卡马西平的血药浓度J.中国临床药理学杂志,2004,20(4:291-294.收稿日期2009-11-05高效液相色谱法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量李理宇1,张波1,2,张东娜1,丁建新1,王洪权1 (1.军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071;2.北京军区联勤部药品仪器检验所,北京100071摘要

7、 目的:建立以H PL C 法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量的测定方法。方法:色谱柱为迪马-ODS,流动相为乙腈-0.05mo l L -1磷酸氢二钠溶液(40 60,检测波长230nm,流速为1.0mL min -1,进样量为20 L 。结果:马来酸桂哌齐特在200800mg L -1(r =0.9999范围内线性关系良好,有关物质与主峰分离良好,3批样品中有关物质含量均小于1%。结论:本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于该制剂的有关物质的含量测定。关键词 高效液相色谱法;马来酸桂哌齐特注射液;有关物质中图分类号R 927.2 文献标识码A 文章编号1001-5213(20101

8、4-1244-03马来酸桂哌齐特为新一代的哌嗪类钙拮抗剂,对心脑血管类疾病、颅脑损伤及其他外周血管性疾病等均有良好疗效1。本实验室已自行合成其原料,并制成注射剂。目前,尚未见马来酸桂哌齐特注射液有关物质分析的文献报道。本实验采用高效液相色谱法测定有关物质含量,方法操作简单、专属性强。1 材料Water s -2695高效液相色谱仪、2487紫外检测器(均为美国沃特斯公司。马来酸桂哌齐特注射液(规格:10mL 320mg ,本实验室提供,批号090401,090415,090429;马来酸桂哌齐特对照品(纯度:99.6%,本实验室,批号081101;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。2 方法与结

9、果2.1 色谱条件 色谱柱:迪马-O DS(250mm 4.60mm,5 m;检测波长:230nm;流速:1mL min -1;流动相:乙腈-0.05mo l L -1磷酸氢二钠溶液(40 60;进样量:20 L 。在此条件下,取 2.2 项下的溶液进样测定,理论塔板数按马来酸桂哌齐特峰计算不低于5000,主成分峰与杂质峰的分离度符合要求,空白辅料对测定没有干扰,专属性良好。见图1。2.2 溶液的制备 溶液配制均严格避光操作。2.2.1 对照品溶液 精密称取对照品适量,加流动相溶解并稀释制成0.5g L -1的溶液,摇匀,作为对照品溶液。2.2.2 供试品溶液 取样品溶液适量,加流动相溶解并稀

10、释制成与对照品相同浓度的溶液,摇匀,作为供试品溶液。2.2.3 空白样品溶液 取按处方比例及制备工艺中不含主药的空白辅料适量,置100mL 棕色量瓶中,加流动相适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,制成空白样品溶液。2.3 线性关系考察 避光操作。精密称取马来酸桂哌齐特对照品50mg,置50mL 棕色量瓶中,用流动相配制成1000mg L -1的贮备液。精密量取贮备液加流动相制成200,300,400,500,600,700,800mg L -1的溶液,分别依次注入液相色谱仪,记录色谱图。以溶液浓度(C 为横坐标,峰面积(A 为纵坐标,作标准曲线,进行回归处理,得回归方程:A =23353C +868

11、59,r =0.9999。结果表明马来酸桂哌齐特在200800mg L -1范围内线性关系良好。2.4 专属性试验2.4.1 高温破坏 取马来酸桂哌齐特注射液(批号0904293支,于105 烘箱中放置6h ,冷却,加入流动相溶解并稀释制成质量浓度约为0.32g L -1的溶液,按 2.1 项下色谱条件进样测定,记录色谱图。见图1。2.4.2 酸破坏 取马来酸桂哌齐特注射液(批号0904293支,置100mL 烧瓶中,加1mol L -1的盐酸20mL ,加热回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1氢氧化钠中和后,加流动相稀释至刻度,按 2.1 项下色谱条件进样测定

12、,记录色谱图。见图1。2.4.3 碱破坏 取马来酸桂哌齐特注射液(批号0904293支,置100mL 烧瓶中,加1mol L -1的氢氧化钠20mL ,加热回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1盐酸中和后,加流动相稀释至刻度,按 2.1 项下色谱条件进样测定,记录色谱图。见图1。 图1 高效液相色谱图A.空白辅料;B.对照品;C.酸破坏后样品;D.碱破坏后样品;E.氧化破坏后样品;F.高温破坏后样品;G.中间体图;H.异构体图;1-马来酸桂哌齐特峰;2-异构体峰Fig 1 H PLC ch romatogramsA.b lan k excipients;B.tes

13、 t sam ple;C.sample undergoing acid destruction;D.sam ple under goin g alkali des tru ction;E.sample und ergoing ox -ygen destru ction ;F.sample un dergoing high tem perature destruction;G.intermediates;H.isomer;1-cinepazide m aleate;2-is omer2.4.4 氧化破坏 取马来酸桂哌齐特注射液(批号0904293支,置100mL 烧瓶中,加30%过氧化氢溶液20

14、mL ,加热回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1盐酸中和后,加流动相稀释至刻度,按 2.1 项下色谱条件进样测定,记录色谱图。见图1。由图1可知,各项专属性试验中,马来酸桂哌齐特主峰与异构体及其他杂质峰均分离很好。2.5 精密度试验 精密称取 2.2 项下对照品5份,用流动相溶解并稀释成质量浓度为0.5g L -1的溶液。按 2.1 项下色谱条件重复进样测定6次,记录色谱图。结果,RSD 为0.24%。2.6 最低检测限考察 取马来酸桂哌齐特对照品加流动相逐级稀释、测定,按信噪比为3(S/N =3作为最低检测限,测得马来酸桂哌齐特(以桂哌齐特计的检出限为1.6

15、gL -1。2.7 稳定性试验 在室温下,取样品溶液(批号090429适量分别置无色和棕色量瓶中,在0,1,2,3,4,6h 分别进样测定,记录色谱图。结果,棕色量瓶中的供试品溶液峰面积的RSD 为0.19%,无色量瓶中的供试品溶液峰面积的RSD 为3.98%。表明对照品溶液在避光条件下6h 内稳定。2.8 马来酸桂哌齐特注射液中有关物质的含量测定 避光操作。取3批样品,每份吸取约1mL ,置于100mL 棕色量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;精密量取供试品1mL ,置于100mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为1%的自身对照溶液。精密吸取对照溶液20 L ,进样测

16、定,调节仪器检测灵敏度,使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的20%;再精密量取样品溶液和对照溶液各20 L ,进样测定,记录色谱至主成分峰保留时间的2.5倍,以自身对照法2检测样品的有关物质,以对照溶液中的桂哌齐特峰计算有关物质的量。测定结果详见表1。表1 有关物质含量测定结果T ab 1 Content s o f the related substances批号异构体含量/%其他杂质含量/%0904010.0570.730904150.0570.810904290.0550.75由表1可知,3批马来酸桂哌齐特注射液中有关物质:异构体平均含量为0.056%,其他杂质含量含量为0.76%。3 讨

17、论马来酸桂哌齐特注射液对光不稳定,取本品3批,横放置于光橱内离日光灯5cm 处照射,光照度4500L x 。于5,10d 后取样,进行外观及有关物质检查,光照5,10d 与0d 比较,外观颜色基本无变化,有关物质增加。结果表明,马来酸桂哌齐特对光不稳定,杂质的量有所增加,主药含量下降,并结合稳定性实验结果,应避光操作和避光保存。参考文献:1 赵平鸽.心脑血管病新药 马来酸桂哌齐特J.浙江实用医学,2003,8(5:320-321.2 中国药典.二部S.2005:附录28,172.收稿日期2009-12-16作者简介周丽,女,硕士,药师,电话:0551-*,E -mail:cheriling 1

18、6正交试验法优选红旱莲提取工艺周丽1,周亚球2,王效山2 (1.安徽中医学院第一附属医院药学部,安徽合肥230031;2.安徽中医学院药学院,安徽合肥230031摘要 目的:探讨红旱莲主要有效成分黄酮类化合物的提取工艺。方法:采用正交试验法,以总黄酮、金丝桃苷的含量为评价指标,以乙醇浓度、溶媒用量、提取时间、提取次数为考察因素,对红旱莲乙醇回流提取工艺进行优化。结果:最佳提取工艺为:10倍量80%乙醇,回流提取2次,每次3h 。结论:本实验设计合理,测定方法可行,实验结果可靠。关键词 红旱莲;总黄酮;芦丁;金丝桃苷;提取工艺;正交试验中图分类号R 943 文献标识码A 文章编号1001-521

19、3(201014-1246-03红旱莲,别名湖南连翘、黄花刘寄奴、旱莲草等1-2,为藤黄科金丝桃属植物黄海棠H y p er icum ascy r on L .的全草,其味微苦,性寒,归肝经,具有解毒消肿,凉血止血之功效。以芦丁、金丝桃苷为代表的黄酮类成分为红旱莲的主要有效成分3。本实验采用正交试验法以乙醇浓度、溶媒用量、提取时间、提取次数为考察因素,优选红旱莲乙醇回流的最佳提取工艺,为确定红旱莲的提取方法提供实验依据。1 材料6010型紫外可见分光光度计(安捷伦科技上海分析仪器有限公司;Water s 600型高效液相色谱仪及Water s 2487型检测器(美国Water s 公司;依利

20、特C 18色谱柱(5 m,4.6mm 250mm,大连依利特分析仪器有限公司。红旱莲,购自合肥市和义堂中药材饮片公司,产地为巢湖,由安徽中医学院药学院鉴定教研室潘鲁敏副教授鉴定;芦丁对照品、金丝桃苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为10080-200306、111521-200308;甲醇、乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯;水为自制注射用水。2 方法与结果2.1 红旱莲总黄酮含量测定2.1.1 三氯化铝比色法测定条件4 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1mL 分别置25mL 量瓶中,加水至5mL ,准确加入pH 4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液5mL 和0.1mo l L -1三氯化铝3mL

21、,加水稀释至刻度,摇匀,放置40min,410nm 测其吸光度,采用外标一点法计算样品含量。2.1.2 对照品溶液制备 精密称定芦丁对照品15.86mg ,加30mL 乙醇使溶解,加水定容至50mL ,即得每1mL 含芦丁0.3172mg 的对照品溶液。2.1.3 供试品溶液制备 称取红旱莲粉末(40目约1.0g ,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,超声提取1h,放冷,再称定,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,即得供试品溶液。2.1.4 样品含量测定 取红旱莲药材3份,按供试品溶液制备方法制备样品液,依法操作并显色,测定吸光度,计算红旱莲药材中总黄酮的含量,结果3份样品的总黄酮含量分别为26.96,27.54,27.95mg g