注射用赖氨匹林细菌内毒素的检测

1、    注射用赖氨匹林细菌内毒素的检测        摘要目的:建立注射用赖氨匹林细菌内毒素检查法。方法:根据中国药典1995年版二部收载的细菌内毒素检查法的要求进行实验。结果:将注射用赖氨匹林配制成6 mg.ml-1的溶液，用标示灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂检测细菌内毒素是有效的。结论:注射用赖氨匹林可用细菌内毒素检查法来检测是否污染。关键词注射用赖氨匹林；干扰试验；细菌内毒素试验；热原试验中分类号：R927.11文献标识码：A文章编号：1001-5213(200

2、0)04-0252-02注射用赖氨匹林(LAP)是一种解热镇痛药，卫生部药品标准1以家兔法检查热原，但该药的解热作用易致检查结果产生偏差，本文以细菌内毒素检查法来检测污染，结果较为满意。现将实验过程报告如下。1材料鲎试剂(批号：980609、980621、980705，规格：均为b=0.5EUml-1，0.5ml/支)；超纯水(即细菌内毒素检查用水，批号980502，规格：10ml/支)；以上均为厦门鲎试剂厂产品。细菌内毒素标准品(批号：9801，效价：60EU/支，中国药品生物制品检定所供应)；LAP：扬州一洋制药有限公司生产。2方法与结果2.1内毒素限值的确定根据药品细菌内毒素限值计算公式

3、2，L=K/m，式中K为指定的给药途径时，病人无任何不良反应的内毒素阀剂量，国家卫生部规定：静脉用药K=5EUkg-12，M为供试品热原检查每公斤家兔体重最大剂量，LAP的M=1mlkg-1(60mgml-1)1。所以内毒素限值L=K/M=5EUml-1。2.2稀释倍数及供试品浓度范围的确定按公式D=L/计算本品的稀释倍数D，式中L=5EUml-1，=0.5EUml-1。因此，D=10，即当本品稀释至6mgml-1时，在此稀释倍数内供试品浓度为有效检测浓度，但需要进行干扰试验后确定。2.3鲎试剂灵敏度复核将细菌内毒素工作标准品用超纯水溶解并稀释成1，0.5，0.25，0.125EU*ml-1系

4、列2倍等比稀释液。取装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管20支排成5列，其中4列分别加入各浓度的内毒素的标准溶液各0.1ml；另一列加入超纯水0.1ml为阴性对照组，按细菌内毒素检查法操作3。根据灵敏度的计算公式e=lg-1x/4分别计算各批号鲎试剂灵敏度：式中x为待复核鲎试剂反应终点浓度的对数值，实验结果为所测3批鲎试剂c均为0.5EUml-1，该值在0.52.0b范围内，S=0，S<0.365，证实本实验所用的鲎试剂灵敏度是合格的。2.4细菌内毒素检查用水的质量考察实验中所使用的超纯水(内毒素含量<0.03EUml-1)经检查，在(37±1)恒温水浴

5、中放置4h，未与鲎试剂产生凝集反应，符合药典规定。2.5干扰试验预试验取LAP用超纯水稀释成60，24，12，6，3mgml-1(相当于1，2.5，5，10，20倍稀释)的溶液，将上述稀释液均配制成含细菌内毒素1.0EUml-1的溶液。按细菌内毒素检查法，与=0.5EUml-1的鲎试剂进行反应，每个稀释度试验2次。用相同浓度的不含内毒素的样品液作阴性对照，结果见表1。由表1可见，当LAP溶液的稀释倍数5时有干扰作用(抑制)，当稀释倍数10时可消除干扰。表1干扰试验预试验LAP稀释倍数12.551020反应 含内毒素稀释液-+结果不含内毒素稀释液-2.6供试品干扰试验分别用6mgml-1 LAP

6、的超纯水溶液和超纯水作溶媒，将细菌内毒素制成浓度为1，0.5，0.25，0.125EUml-1的2倍稀释液，然后照鲎试剂灵敏度复核的操作步骤进行实验，计算有供试品与无供试品测得的鲎试剂的灵敏度均为0.5 EUml-1，结果见表2。两种溶媒测出的灵敏度之比为1，且与鲎试剂标示灵敏度相一致，证明当本品稀释至6mgml-1时，能消除对细菌内毒素检查的干扰。表23批注射用赖氨匹林干扰实验结果样品批号含内毒素浓度EUml-1反应结果标准差s灵敏度测得值EUml-19809131.0+0.5+0.25-00.50.125-0(阴性对照)-9809152.0+0.5+0.25-00.50.125-0(阴性对照)-9809173.0+0.5+0.25-00.50.125-0(阴性对照)-2.7样品细菌内毒素检查与热原检查的比较试验取样品，以超纯水稀释成6mgml-1的溶液，用灵敏度为0.5EUml-1的鲎试剂依法检查其细菌内毒素，另取同批样品，用超纯水稀释成60mgml-1溶液，依法测定热原3。用两法检测共15批样品，结果均为阴性，所有批号的样品在临床使用均未发生热原反应。 3讨论干扰试验预试验的意义在于可以初步判断该样品是否存在干扰，可避免盲目试验。将LAP称释为6mgml-1，采用细菌内毒素检查法检测是否污染是可行的。冯建新（高邮市人民医院，江苏 高邮 225600）