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文档简介
1、微量蛋白沉淀浓缩试剂系列产品Protein Precipitation Kit Series货号:P060053产品及特点本系列产品用于微量沉淀浓缩蛋白质样品,其原理是通过酸或有机溶剂使蛋白质变性,溶解度降低,在离心条件下沉淀,而达到蛋白变性、蛋白浓缩、蛋白去盐的目的。他们还有一个重要的用途是去除污染的盐离子和其他小分子。本系列产品名单如下:产品编号产品名称最低浓度备注ATCA蛋白沉淀浓缩试剂5ug/mLBTCA-DOC蛋白沉淀浓缩试剂1ug/mL样品不得含SDSCTCA-丙酮蛋白沉淀浓缩试剂5ug/mL2D胶样品制备D酮蛋白沉淀浓缩试剂5ug/mL规格及成分名称及编号 成份 20次包装 TC
2、A蛋白沉淀浓缩试剂 81217A 溶液 A 0.4 mL 溶液 B 10 mL 使用手册1份TCA-DOC蛋白沉淀浓缩试剂 81217B 溶液 A 0.4 mL 溶液 B 2 mL 使用手册1份TCA-丙酮蛋白沉淀浓缩试剂 81217C 溶液 A 8 mL 溶液 B 0.4 mL 使用手册1份丙酮蛋白沉淀浓缩试剂 81217D 溶液 A 20 mL 使用手册1份运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。使用方法一:TCA 蛋白沉淀浓缩试剂使用手册1、将 200 L 需要沉淀浓缩的蛋白样品(浓度不低于5ug/mL)转移到一个自备的1.5 mL 塑料离心管中。2、加入 20 L 溶液A,涡旋激烈震荡
3、10-30 秒混匀。3、冰上放置 30 分钟或-20放置15 分钟(过夜放置也可)。4、室温 12000-15000×g 离心15 分钟。5、小心移弃上清液,得沉淀。6、在沉淀中加入 500 L 溶液B,轻轻混匀。7、室温 12000×g 离心15 分钟。8、小心移弃上清液,得沉淀。9、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有沉淀物的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10 分钟左右。10、样品放4保存或立即电泳检测。二:TCA-DOC 蛋白沉淀浓缩试剂使用手册1、将 200 L 需要沉淀浓缩的蛋白样品(浓度不低于1ug/mL,不得含SDS)转移到一个自备的1.5 mL 塑
4、料离心管中。2、加入 20 L 溶液A,涡旋激烈震荡10-30 秒混匀。3、室温放置 10 分钟。4、加入 10 L 溶液B,轻轻混匀。5、室温 12000×g 离心5 分钟。6、小心移弃上清液,得沉淀。7、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有沉淀物的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10 分钟左右。8、样品放 4保存或立即电泳检测。三:TCA-丙酮蛋白沉淀浓缩试剂使用手册1、将 200 L 需要沉淀浓缩的蛋白样品溶液转移到一个自备的1.5 mL 塑料离心管中。2、加入 400uL 溶液A,涡旋激烈震荡10-30 秒混匀。3、-20放置 2 小时分钟(过夜放置也可)。4、427
5、0000×g 离心10 分钟。5、小心移弃上清液,得沉淀。将有沉淀物的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10 分钟左右。6、在沉淀中加入 50 L 溶液B 溶解沉淀。7、样品放 4保存或立即电泳检测。四:丙酮蛋白沉淀浓缩试剂使用手册1、将 200 L 需要沉淀浓缩的蛋白样品溶液转移到一个自备的1.5 mL 塑料离心管中。2、加入 1mL 在-20预冷的溶液A,涡旋激烈震荡10-30 秒混匀。3、-20放置 10 分钟(对浓度低于5ug/mL 的样品可以过夜放置)。4、室温 12000×g 离心15 分钟(对浓度低于5ug/mL 的样品可以将离心改为27000×
6、;g 离心15 分钟)。5、小心移弃上清液,得沉淀。6、将有沉淀物的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要 10 分钟左右。7、样品放 4保存或立即电泳检测。技术资料TCA 与蛋白质TCA 与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀.随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显.电泳图谱显示,BSA,HSA 单体谱带有较明显的展宽现象,这可能是由于TCA 的结合,使SDS与蛋白质的结合量产生偏差,从而造成蛋白质所带电荷的不均一性,造成迁移率的不一致.我们认为在电泳时使用TCA 对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要
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