维生素C的提取及含量测定精

1、维生素C的提取及含量测定一、实验目的A学习维生素C的重要性质尸掌握2.6二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法二、实验原理”维生素C的结构与性质 牙维生素定量测定结构与性质维生素C/1, 抗坏血酸(ascorbic acid) 多疑基，内酯；酸性； 易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏0=C1HOY门HO-C iH CI HO-C-HICH2OHoIIc一IHOCII OHOCIHCI HOCHI H2COH-2H+ 2HOIIC一I o=cI o o=cIHCI HOCHIH2COHL抗坏血酸脱氢抗坏血酸若脱氢维生素C进一步氧化.则失去活性来源Citrus fruits, green pep

2、pers, strawberries, tomatoes, broccoU and sweet and white potatoes are all excellent food sources of vitamin C (ascorbic acid)tAlMM新鲜水果及 蔬菜:橙类、番 茄.辣椒富含维生素C量高的食物（毫克/100克食物）酸830-1170窃猴桃568 枣549辣椒185山楂9柿子椒一89 菜花一8 金花菜一85 苦瓜一4 雪里红83豌豆苗53 油菜51橙9柚1柠檬一0 柑橘34 水萝卜34 大白一19 西红柿12 芥菜一_ 0 青蒜772,6 二氯酚靛酚氧化还原指不剂HOH

3、OHOMOHOHJ + 匚=iOCMOM 坏顾枣伉坏血1RIft氧点抗体til IB圧球熨26二*u靛Wh无色） 三、实验内容样品处理： 2 礙猴桃 510ml 2%的草酸研磨成浆状 50ml的容量瓶定容过滤标准液滴定： 5ml 1%草酸 + 5ml O.OOlmol/L维生素C （176.13） 2,6-1）滴定到浅红色，30s； 3次（10x2,6-D）计算lml 2,6-D相当于维生素C的mg数T滴定数（丁）= 虫 C：抗坏血酸的浓度（mg/mD K VI：抗坏血酸的量（ml）V2：消耗染料溶液的（ml）样品滴定： 50ml锥形瓶:滤液5ml （移液管） 2,6D滴定到浅红色，30s；

4、3次空白滴定： 50ml锥形瓶:5ml 1%草酸 2,6D滴定到浅红色，30s； 3次计算结果100g 样品含维生素C 的mg数=Bx(A-E)xTx 100/CxD A滴定样品所消耗的2,6 二氯酚靛酚钠的平均 亳升数； E滴定空白所消耗的2.6 二氯酚靛酚钠的平均 亳升数； B一样品提取液的总体积(50ml)； C每次滴定所用的提取液的亳升数(5ml): I)提取所用的样品重量(2g)； Tlml 2,6-D相当于维生素C的mj?数。思考题为什么维生素C标准溶液要用新鲜配制的？为准确测得维生素C的含量，实验时要注意 那些操作步骤？多酚氧化酶的制备和性质研究一、实验目的 了解植物组织褐变和多

5、酚氧化酶的关系。学习多酚氧化酶的提取和活力测定方法 了解影响酶促反应速度的各种因素二、实验原理酶的分离纯化：A材料的选择（新鲜、目的蛋白含量高）”分离过程中避免一切可能引起变性的条件 占蛋白质的纯化一般在低温下进行（4。0细胞破碎：机械破碎分离目的蛋白：盐析法邻苯二酚邻苯醍三、实验内容多酚氧化酶的制备：5（也小块土豆+ 50ml氟化钠（60（）0班） 捣碎机中研磨30s35层纱布过滤（4045ml滤液/组） 等体积饱和硫酸钗，49, 30min 离心4*C, 4000r/min, 20niin 沉淀+15ml柠檬酸缓冲液离心4*C, 400（）r/min 15min上清T多酚氧化酶粗制品多酚氧

6、化酶的性质多酚氧化酶的作用:催化的反应多酚氧化酶的化学性质：稳定性底物专一性（邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚） 底物浓度酶浓度氢离子浓度（移液管）Ir四、操作要点公用试剂的使用、玻璃器皿清洁、定量、定时离心机及其使用离心机是利用离心力对混合液(含有固形物)进行 分离和沉淀的一种专用仪器。厂普通(非冷冻)离心机：转速小于4000rpm(RotatePer Minute ),台式高速离心机最大转速可ISOOOrpnio /低速冷冻离心机:转速一般不超过4000rpm 厂高速冷冻离心机：转速可达2(M)()0rpm,收集微生物、 细胞碎片.细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免 疫沉淀物等。厂超速离心机：转速可达SOOOOrpm,能使亚细胞器分 级分离，并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。50 Tl RotorAdH Rotor转头离心管开启离心机控制电闸平衡离心管关闭离心机盖离心结束后取出离心样品管取出转头，擦