维胃方对试验性大鼠胃溃疡治疗机理的研究精

1、维胃方对实验性大鼠胃溃疡治疗机理的研究作者：苏尚贤 刘晓 伟 张晓洁 刘剑文 杨真晖【摘要】 目的：通过乙酸致大鼠胃溃疡模型，研 究维胃方防治慢性胃溃疡机理。方法：制备乙酸致大鼠胃溃疡模型，观察维胃 方对该模型治疗后胃大体标本和胃溃疡周围胃液 pH 值、溃疡面积、病理组织 切片；采用放射免疫法测定大鼠血清中的胃泌素。结果：服用雷尼替丁和维胃 方后，从胃黏膜大体观察及切片观察，实验性溃疡大鼠胃黏膜愈合情况良好， 用药组溃疡面积明显小于自愈组（ P 0.05 ），说明药物能够有效促进溃疡面 的愈合；其中维胃方中剂量组溃疡面积小于雷尼替丁（ P 0.05 ）。维胃方各 剂量组的 pH 值呈剂量依赖的

2、正相关趋势。与自愈组及模型组比较，维胃方各 组血清 GAS 含量呈升高的趋势，其机制可能是通过血清 GAS 刺激胃肠黏膜和 胰腺组织的蛋白质、RNA和DNA的合成增加的营养作用，减少黏膜攻击因子和 增强胃黏膜保护治疗胃溃疡。 【关键词】 维胃方；胃溃疡；治疗机 理 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动 物雄性 SPF 级 Wistar 大鼠 56 只，体质量 180220 g ，大鼠及饲料购自南方医科大学实验动物中心（动物合格证号：粤检证字第 2005A048 号），室温2226C安静环境下饲养，喂以固定的平衡饲 料。1.1.2药品维胃方：由三七、白芨、茯苓、蒲公英组成，购于南方医

3、科大学附属南方医院中药房，经药用植物与鉴定教研室专 家验证合格，制成低、中、高 3 种剂量水剂，分别含生药 0.375 g/mL 、 0.75 g/mL、 1.5 g/mL （以临床用药剂量按体表面积转换成动物等效剂量，低、中、 高3种剂量分别为临床剂量的1/2倍、1倍、2倍），高压灭菌，4C冰箱 保存备用。雷尼替丁水悬液：每粒 150 mg,山西太原药业有限公司（批号： 060501），用蒸馏水将雷尼替丁配制成水悬液，含生药 3 mg/mL1.1.3试剂与仪器促胃液素（GAS放射免疫试剂盒：北京北方生物技术研究所，批号： 061020 BECKMAN控温高速离心机， Leica RM 213

4、5 切片机， Olympus 光学显微镜，上海日环厂 SN695B 型放射免 疫丫计数器。1.2方法1.2.1模型制作乙酸胃溃疡模型：参照 Takagi 等1 乙酸致大鼠胃溃疡造模方法，并加以改造。大鼠造模前 24 h ，禁食不禁水。大鼠经腹腔注射 10% 水合氯醛 1 mL 深度麻醉。腹部剃毛、消毒，于剑突下腹中线打开腹腔，手术切口长约 2 cm,暴露出胃，在胃前壁浆膜面窦体交界处同一部分（避开血管）用浸有 100% 乙酸，直径为 5 mm 的圆形滤纸接触 2 次，每次 30 s 。然后还纳胃体，逐层 缝合切口，保护切口。1.2.2动物分组及血清、血浆制备根据完全随机法分为 7 组，每组 8

5、 只： A 正常组，自由饮水，进食；B模型组，乙酸致大鼠胃溃疡，自由饮水，进食； C自愈组，乙酸致大鼠 胃溃疡，自由饮水，进食； D 雷尼替丁组，乙酸致大鼠胃溃疡，第 4 天开始灌 胃雷尼替丁水悬液 2 mL ，共 7 d ，每日 1 次； E 维胃方各剂量组（ E1 维胃方 低剂量组、 E2 维胃方中剂量组、 E3 维胃方高剂量组），乙酸致大鼠胃溃疡， 第 4 天分别灌胃低、中、高剂量维胃方 2 mL ，共 7 d ，每日 1 次。除模型组 在第 4 天，其余各组均在第 11 天麻醉后取材。大鼠经腹腔注射 10%水合氯醛 0.035 mg/kg ，深度麻醉，仰卧位四肢固定，皮肤常规消毒，在剑

6、突 下偏左剪开腹腔，暴露胃部。分离腹主动脉，用头皮针采血，用普通负压管接取血液34 mL , 3 000 r/min 离心20 min，分离血清-20C 冻存备用。 1.2.3观察指标胃的大体观察、胃液 pH 值、溃疡面积、病理切片观察、血清胃泌素。由鼠胃贲门滴取少量胃液于 pH 试纸，测 定pH值。向胃内注入10%中性福尔马林溶液10 mL,固定30 min后沿胃大 弯剪开，展平，观察胃黏膜大体标本。溃疡面积检测：测量溃疡的长径（DL）和短径（DS，计算溃疡的面积，按公式 S=1/4X DLX DSX n , n取3.14。病 理切片观察：取部分胃溃疡周围腺组织常规脱水、石蜡包埋、切片、苏木

7、精 -伊 红染色作病理组织学检查。测定血清胃泌素：放射免疫。1.3统计学分析采用 SPSS 10.0 软件分析处理，数据以 xs 表示，采用 F检验。百事通2结果2.1胃的大体标本观察正常对照组：胃黏膜光整完好。手术模型组：溃疡病灶溃疡表现明显，部分溃疡穿孔。手术对照组：愈合不良，仍可见明显溃疡面。雷尼 替丁组：溃疡愈合较好，部分可见溃疡面，少量可见炎性渗出物，部分溃疡已 完全愈合，但该组织较粗糙，颜色较周围正常组织白。维胃方：低剂量和高 剂量组：低剂量组大部分可以找到溃疡面，但面积较小，部分可见充血点及炎 性渗出物，个别已愈合。高剂量组愈合效果较雷尼替丁好。大部分胃黏膜愈合 接近，有个别愈合

8、不良。中剂量组：绝大部分愈合良好，仅见个别小溃 疡。2.2光学显微镜下观察（40倍）正常动物组：胃溃疡周围组织各层光整完好。手术模型组：部分黏膜中断，溃疡可深及肌 层，溃疡表面覆盖炎症细胞，肌层变薄，甚至断裂，纤维蛋白坏死，浆膜层部 分断裂。手术对照组：部分黏膜中断，达及黏膜肌层，黏膜下层炎症细胞浸 润，部分小动脉血管内皮肿胀、增生，可见血栓，肌层变薄部分断裂，部分浆 膜断裂。雷尼替丁组：少量黏膜中断，达及腺体区，面积较小，黏膜下层炎 症浸润，部分小动脉血管内皮肿胀、增生，可见血栓，肌层变薄，小部分浆膜 断裂。维胃方组：低剂量组与高剂量组：2组与雷尼替丁组差别不大；中剂 量组：黏膜基本完整，黏

9、膜下层仅见少量炎症细胞浸润。肌层变薄。肉芽组织 增生，排列较整齐，小部分浆膜断裂。2.3维胃方对实验性胃溃疡大鼠溃疡面积的影响结果见表 1 。2.4维胃方对实验性胃溃疡大鼠不同组胃液 pH 值，血清 GAS 含量的影响结果见表2。3讨论胃溃疡属中医“胃脘痛”、“痞证”、“吐酸”范畴。中医辨证多属寒热虚实夹杂，气血失和。气机阻滞、升 降失调是其共同特征 2 。本方由白芨、三七、茯苓、蒲公英组成，其中白芨收 敛止血、消肿生肌，促进溃疡愈合又不致阻滞气机；蒲公英味苦性寒具有清热 解毒消痈作用；三七性温，能活血化瘀，消肿定痛，现代药理研究发现三七具 有抗炎、镇静的作用，两药合用寒热同施，辛开苦降，通降

10、气机，散结消肿； 合茯苓补脾和胃，降逆渗湿安神，同作护本之用；本方组方严谨，寒热并用， 活血行气，畅通气机，疗效独特，临床经验证明该方对胃溃疡有很好的疗 效。实验性大鼠胃溃疡自愈率较高，往往影响药物疗效的观察，本实验采用的冰醋酸法是胃溃疡造模方法可靠、具有自愈率差、周期短、可重复性强 和成功率高等特点 3 。大鼠造模手术后第 4 天，解剖模型组大鼠胃组织，发 现溃疡病灶与溃疡边缘有明显分界，溃疡面覆盖黄苔，边缘充血水肿，表现为 典型的胃溃疡特征。经 7 d 药物治疗后的结果，用药各组与自愈组比较差别有 统计学意义（ P 0.01 或 P 0.05 ）。制酸剂在临床上是治疗胃溃疡的常用药物，本实

11、验以雷尼替丁作为药物对照组，探讨维胃方治疗实验性胃溃疡作用机理具有可比性。从胃黏膜大体观察及切片观察结果维胃方中剂量组溃 疡面积明显小于雷尼替丁组( P 0.05 )。说明了在本实验中维胃方中剂量治 疗慢性胃溃疡的疗效尤佳。用药组和正常组胃液 pH 值明显比模型组低( P 0.05 )。这可能与机体自身的代偿机制有关。模型组第4 天麻醉后取材，而其余各组均在第 11 天麻醉后取材。模型组取材期间可能正处于机体自身的代偿 期，机体主要发挥自身的保护机制，此时检测胃液 pH 值可能代偿性的短暂性 升高，故有此实验结果。再者，实验结果亦表明，维胃方各剂量组 pH 值呈剂 量依赖的正相关趋势，说明提高

12、胃液 pH 值，降低胃黏膜攻击因素，可能亦是 维胃方抗应激性胃溃疡作用机制之一。 胃泌素早在 1905 年被 Edkins 所发现。胃泌素能促进胃酸和胃蛋白酶原分泌，故与消化性溃疡的形成有密切 联系。GAS的主要作用为：直接刺激壁细胞产生胃酸和刺激嗜铬样细胞产生 组胺，然后通过与组胺及乙酰胆碱的协同作用产生胃酸；营养作用，能刺激 胃肠黏膜和胰腺组织的蛋白质、RNA和DNA的合成增加。因此，检测胃溃疡大 鼠血清中 GAS 含量变化能反映胃黏膜的功能 4 。胃泌素这一指标在本实验的 结果，可能与导致胃溃疡的作用机制具有多样性有关。消化性溃疡是一多病因 疾病，归纳病因不外是胃酸、胃蛋白酶和幽门螺杆菌

13、等攻击因子增加、黏膜屏 障、黏膜血流、前列腺素等防御因子减弱 5 ，所以维胃方治疗胃溃疡的作用机 制可能还与其他因素有关，而不仅取决于胃泌素这一环节。但实验数据显示： 与自愈组及模型组比较，维胃方各组血清 GAS 含量呈升高的趋势，所以维胃方 对胃溃疡治疗机理可能通过血清 GAS 刺激胃肠黏膜和胰腺组织的蛋白质、 RNA 和 DNA 的合成增加的营养作用，减少黏膜攻击因子和增强胃黏膜保护的保护机 理而发挥抗溃疡作用，相关机制还有待进一步研究证实。【参考文 献】1Takagi K, Okabe S, Saziki R. A new method for theproduction of chronic gastric ulcer in rats and the effect of several drugs on its healing J. Jpn J Pharmacol, 1969, 19:4182彭国林 ,李兆申. 制酸剂在应激性溃疡预防中的应用 J. 中华医学杂志 , 2002, 82(14):1002-1004 3王奕珊, 陈奕昭, 何成龙, 等. 胃灵颗粒对大鼠乙酸胃 溃疡愈合质量的影响 J.