复肾口服液对阿霉素肾病大鼠肾脏形态的影响.

1、复肾口服液对阿霉素肾病大鼠肾脏形态的影响作者：张淑萍 靳国印李旺张晓丽薄爱华【摘要】目的：观察复肾口服液对阿霉素肾病大鼠肾脏的形态学影响。方法：采用尾静脉一次性注射阿霉素（ADR复制肾病综合征模型。用光学显微 镜、电子显微镜观察肾小球毛细血管、上皮细胞、基底膜及肾小管的病理形态 学改变。结果：复肾口服液能使阿霉素肾病大鼠蛋白尿显著降低，肾小管管腔 内的蛋白管型明显减少，肾小球淤血及上皮细胞和基底膜的损伤程度明显减 轻，肾小球上皮细胞足突融合明显改善。结论：复肾口服液可促进肾病大鼠肾 小球上皮细胞的修复及滤过膜功能的恢复，但存在着量效依赖关系。【关键词】复肾口服液；肾病综合征；大鼠模型;形态学肾

2、病综合征（nephrotic syndrome,NS ）是由多种病理损害所致的一组临床 症候群，以大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症及明显的水肿为临床特征。复 肾口服液具有温肾健脾、益气养阴，兼以活血通络的作用，临床用于治疗肾病 综合征有一定的疗效。为探索其作用机制，本研究采用阿霉素（ adriamycin ， ADR诱导肾病综合征大鼠模型，观察复肾口服液对肾病大鼠肾组织的病理形态 学的影响，为研究复肾口服液的疗效机制提供实验依据，并进一步为临床有效 治疗肾病综合征提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物健康雄性 Wistar大鼠，体重220土 18g,共28只（由北京实验动

3、物繁殖中心提供）。1.1.2 药物复肾口服液：由黄芪、党参、破故纸、胡芦巴等12味中药组成，所用药物购自河北北方学院附属第一医院。将上述药物采用水煎醇沉 法制备为每1ml药液含原生药2g的口服液，用10ml安瓿分装，加热灭菌封口 备用。1.1.3 主要试剂盐酸阿霉素（ adriamycin,ADR ）：粉针剂，每安瓿10ml，中美合资山西普德药业有限公司，批号：000814。临用时用生理盐水配成2mg/ml的溶液。磺基水杨酸AR成都化学试剂厂生产。1.2 方法1.2.1 动物分组及给药 将大鼠随机分出 7 只作为正常对照组；将其余21 只大鼠参照文献方法 1 ， 2 ，给大鼠一次性尾静脉注射阿

4、霉素（ 7 5mg/kg 体重）建立大鼠肾病模型，正常对照组注射等量的生理盐水，7d后造模大鼠尿蛋白定量15g/L、定性在+或以上者确定为肾病大鼠，将肾病大鼠按体重再随机分为三组，即模型组、复肾口服液大剂量治疗组（ 10ml/kg ）和复肾口服 液小剂量治疗组（ 5ml/kg ）。正常对照组、模型组给 10ml/kg 生理盐水作为对 照。每日灌胃一次，连续 28d。1.2.2 标本采集及处理 用自制代谢笼收集大鼠造模前、造模后第 7 天，给药后第7、14、21、28天24h尿液，测24h尿蛋白定量（磺基水杨酸 法）；给药 28d 后断头处死动物，立即剖腹取肾脏称重，光镜标本迅速放入 10%甲醇

5、中充分固定，石蜡包埋后备检，透射电镜标本用生理盐水冲洗后迅速置 入 4%戊二醛液中放冰箱冷藏固定备检。1.2.3 HE染色大鼠肾组织标本经常规石蜡包埋后连续切片，制成4卩m石蜡切片。同时行HE染色，在光镜下观察分析。1.2.4 透射电镜标本处理 4%戊二醛固定，磷酸缓冲液清洗， 1%锇酸固 定，磷酸缓冲液清洗，丙酮脱水，浸泡包埋，超薄切片 ,日立 H 7500透射电 镜观察。1.2.5 统计学分析 全部数据用 SPSS11 0软件进行统计学处理，采 用t检验，结果用（x ± s）表示。2 结果2.1 各组实验大鼠 24h 尿蛋白定量情况 （见表 1）由表 1 可以看出，在造 模前各组

6、大鼠24h尿蛋白定量均低于1 5g/L，且各组间无显著性差异（P> 0 05）。模型组大鼠尿蛋白定量在造模后第 7天即明显增加 ,并呈进行性升高 , 最高者可达 8125g/L 。复肾口服液大、小剂量治疗组均可显著降低大鼠尿蛋白排出量，与模型组比较有显著性差异（Pv 001，Pv 005）。由此可见，该方有明显的减轻蛋白尿作用。表 1 各组大鼠不同时期尿蛋白定量变化（略）2.2 肾组织病理观察2.2.1 肉眼观察 正常组大鼠肾脏呈红褐色，表面光滑，切面可见皮髓 质界限清晰，未见皮质缺血。模型组大鼠肾脏由红褐色变为黄褐色，包膜紧张，水肿明显，肾脏系数明显高于正常对照组（PV0 01）（见表

7、2）。经给 药治疗后，上述情况均明显改善，二个治疗组肾脏系数均略低于模型对照组， 与正常对照组比较仍有差异（PV 005）（见表2）。2.2.2 光镜观察正常对照组大鼠肾小球、肾小管及间质均正常，结构清晰（图1）;模型组可见肾皮质灶性损伤（图 2）,如肾小球淤血，肾小管上 皮细胞肿胀变性、坏死，胞核脱落，管腔内可见大量蛋白管型；大剂量治疗组 肾小球均正常，未见肾小球淤血，肾小管上皮细胞无明显变性，腔内蛋白管型明显减少（图3）;小剂量治疗组与模型组近似，仍可见灶性肾小球淤血，肾 小管上皮细胞变性，腔内可见蛋白管型（图4）。表2 各组大鼠肾脏系数的变化（略）2.2.3 电镜观察正常对照组肾小球滤过

8、膜结构正常，内皮细胞为有孔形，足突及裂孔清晰可见，基底膜均匀一致，肾小管上皮细胞结构亦正常（图 5）;模型组肾小球内皮细胞及上皮细胞显著肿胀变性，形成空泡，上皮细胞足 突广泛融合、消失，基底膜灶性增厚（图 6）;复肾口服液大剂量组肾小球内 皮细胞及上皮细胞无明显变性，足突及裂孔较清晰，基底膜仍有厚薄不一的现 象（图7）。复肾口服液小剂量治疗组与模型组近似（图8）。3 讨论尿蛋白是肾小球疾病最常见表现，也可作为一个独立的致病因素参与肾病 变过程。蛋白尿不仅是NS的主要临床表现，还是肾脏疾病进一步恶化的重要因 素。目前大量体外研究表明，蛋白尿具有潜在的肾毒性 ，不仅能造成肾小球系膜 细胞和上皮细胞

9、的损害，也可引起肾小管和间质的病变 3。因此在肾小球疾病 的发展过程中，控制蛋白从尿中丢失，其意义不仅在于改善临床症状，还在于 减轻其对肾小球及肾小管的损伤，从而延缓肾脏疾病的进展 4。肾小球的滤过 膜由毛细血管内皮细胞、基底膜和脏层上皮细胞共同构成 ，生理状态下，对滤过 物质的分子大小具有选择性。白蛋白因为分子量很大（69000D，故几乎不能通过。当各种致病因素引起肾小球病变时，都会影响滤过膜的屏障作用，通透 性增加，使大分子物质得以通过，从而导致以白蛋白为主的蛋白尿大量漏出。 本实验模型组光镜下肾小球基本正常，透射电镜下可见肾小球内皮细胞及上皮 细胞肿胀，内质网扩张，形成大空泡，足细胞突起

10、增宽、融合，局部裂孔消 失，基底膜灶性增厚。复肾口服液大剂量组肾小球内皮细胞及上皮细胞无明显 变性，足突及裂孔清晰，基底膜仍有厚薄不一的现象。复肾口服液小剂量组与 模型组近似，但程度较轻，个别足细胞突起明显。结果显示：复肾口服液能使 阿霉素肾病大鼠蛋白尿显著降低，肾小管管腔内的蛋白管型明显减少，肾小球 淤血及上皮细胞和基底膜的损伤程度明显减轻，肾小球上皮细胞足突融合明显 改善。说明复肾口服液能够有效减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白，有助于肾小球 滤过膜功能的恢复，对肾小球滤过屏障的损伤具有保护作用，其机制可能是促 进了上皮细胞的再生与修复。复肾口服液对肾病大鼠肾小球滤过膜的修复作用 是治疗肾病综合征

11、、控制蛋白尿的机理之一，而且治疗作用存在量效关系。方 中以黄芪、党参为主补气固本，摄精止泄；破故纸、胡芦巴、菟丝子温补肾 阳；地黄、山萸、山药味厚质重滋补肾阴；山药、白术相配健脾利湿，消肿； 以蝉蜕、白僵蚕搜剔入络之邪，化瘀通络，以石苇利尿排毒。现代药理研究认 为，黄芪味甘，微温，归脾、肺经，有补气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水 消肿之功。黄芪中含有大量多糖、氨基酸等增强机体免疫能力，促进细胞生长 和再生，其水煎液提取成分黄芪 F7、黄芪F4对小鼠肾细胞培养有明显的保护 作用5 。白术味苦甘温，入脾胃经，补气健脾，燥湿利水 , 有持久的利尿作 用，且促进电解质特别是钠的排泄，其利尿作用可能是抑

12、制肾小管重吸收所致 6 ；另据报道白术对老年小鼠肾脏结构（肾小体数量、大小、滤过屏障、基底 膜厚度及足细胞裂孔等）均有明显改善作用。全方诸药相伍，共奏温肾健脾、 益气养阴，活血通络之功。【参考文献】1 Bertani T,Poggi A.Adriamycin induced nephrotic syndrome in rats sequence of pathologiceventsJ.Lab Invest,1982,46:162 赵军宁，温志坚，王晓东，等 . 阿霉素肾病模型的实验研究及药物观察 J. 中国药理通迅， 1992， 9（4）： 28 313 程叙扬，李晓枚，唐嘉薇，等 . 微小病变患者尿蛋白对肾小管上皮细胞损 伤作用及其机制研究 J. 中华肾脏病杂志， 2002， 18（6）：3984 张芬芳，王喜栋，陈志