试验五玻璃器皿的清洗凶扎及灭菌

1、实验五 玻璃器皿的清洗、凶扎及灭菌一、目的要求1、掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、实验材料根据实验需要确定三、基本原理为确保实验顺利地进行， 要求把实验所用玻璃器皿清洗干净， 为 保持灭菌后的无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和 三角瓶等加塞棉塞。 这些工作看起来很普通简单， 但如操作不当或不 按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的挫败。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物， 微生物实验室常用的灭 菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、 煮沸灭菌等方法。 这些方法的基本原理是通过加热使微生物

2、体内蛋白 质凝固变性，从而达到杀菌的目的。四、方法与步骤1、器皿洗涤的注意事项和方法 （1）不能有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的 物品来擦试玻璃器皿；新的玻璃器皿应用 2%的盐酸溶液浸泡数小时， 用水充分洗干净。（ 2）用过的器皿应立即洗涤。（3）强酸、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒 在洗涤槽内，必须倒在废物缺内。（ 4）含有琼脂培养基的器皿，可先将培养基刮去，或用水蒸煮， 待琼脂融化后趁热倒出，然后用清水洗涤。凡遇有传染性材的器皿， 应经高压蒸汽灭菌再进行清洗。（ 5）一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成 5%的热肥皂水来清 洗。油脂很重的器皿应先将油脂擦去。粘有煤

3、膏、焦油及树脂一类物 质，可用浓硫酸或 40%氢氧化钠或用洗涤液浸泡；沾有蜡或油漆物， 可加热使之融熔后揩去，或用有机溶剂（苯、二甲苯、汽油、丙酮、 松节油等）揩去。（ 6）载玻片或盖玻片， 先擦去油垢， 再放入 5%肥皂水中煮分钟， 立即用清水冲洗， 以后放在稀的洗液中浸泡 2 小时，再用清水冲洗干 净，最后用蒸馏水冲洗，干后浸于 95%酒精中保存备用。（ 7）洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水 珠。2、器皿包扎 要灭菌后的器皿仍能保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。（1）培养皿 洗净的培养皿烘干后每 10 套（或根据需要而定） 叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁筒中

4、，然后进行灭 菌。（ 2）吸管 洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头寒入少许脱脂 棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可 用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一条宽约 4-5cm 的纸条，以 30-45 ° 的角度螺旋形卷起来， 吸管的尖端在头部， 另一端用剩余的纸条打成 一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。使用 时，从吸管事间拧断纸条，抽出吸管。（ 3）试管和三角瓶 试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞 可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器，制作棉塞时，要求棉 花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易 塞入；过松易掉落和污染。棉

5、塞的长度不小于管口直径的 2 倍，约 2/3 塞进管口（图 5-1 ）。目前，国内已开始采用塑料试管塞， 可根据所用的试管的规格和 实验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。若干支试管用绳扎在一起，在棉花塞部分外包裹油纸或牛皮纸， 再用绳扎紧（图 5-2 ）。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。3、灭菌（ 1）电热干燥箱灭菌的操作过程： 把要灭菌的物品放在箱内， 堆积时要留人空隙， 勿使接触器壁、 铁壳，关闭箱门。 接通电源， 把位于箱顶的通气孔适当打开， 使箱内湿空气能逸 出，至箱内温度达到100C时关闭。 调节温度控制器旋扭， 直至箱内温度达到所需要温度为止， 观 察温度是否恒定。若不稳定，再进行调

6、节，稳定后不可再拨动调节旋 扭和通气孔，保持 140-160 马俊 ， 2-3h。 灭菌结束后切断电源，待箱内温度降至60C时，才能打开箱门取出灭菌物品。 同时，应将温度调节旋扭调到零点， 并打开通气孔。（ 2）高压蒸汽灭菌锅的操作过程： 使用前， 先在灭菌锅内加入适量的水， 然后把要灭菌的物品放入锅内，盖上锅盖，对称地拧紧螺栓，以防漏气。 在灭菌锅底部加热，同时打开排气阀，待自排气阀冒热气3-5min 后关闭。至压力表所示压力升至所需压力时开始计时。通过 调整热源，而维持一定的压力。达到灭菌时间后，停止加热。 待锅内蒸气全部排完后，方可打开排气阀，打开锅盖，取出灭 菌物。 使用完后，应及时将锅内的水放去，以防生锈。高压蒸汽灭菌锅种类规格很多， 以上操作步骤适且于手提式高压 蒸汽灭菌锅。 其它种类的灭菌锅， 它在使用时应严格按操作说明书操 作。五