试验十三包合物的制备及其验证

1、沈阳药科大学实验十六包合物的制备及其验证药剂学实验实验十六包合物的制备及其验证实验目的1 .掌握饱和水溶液法制备包合物的工艺。2. 掌握包合物形成的验证方法。实验指导包合技术系指一种分子被包嵌于另一种分子的空穴结构内，形成包合物(in clusio n compou nd)的技术。这种包合物是由主分子( host molecule)和客分 子(guest molecule)两种组分加合组成，主分子具有较大的空穴结构，足以将客 分子容纳在内，形成分子囊( molecule capsule)。目前，常用包合物的主分子以环糊精(CYD )为最多。环糊精系淀粉用嗜碱性芽孢杆菌经培养得到的环糊精葡聚糖转

2、位酶(Cyclodextrin glucanotransferase)作用后所形成的产物。 是由610个D-葡萄糖分子以1, 4-糖苷键连接面成的环状低聚 糖化合物。环糊精为水溶性、非还原性的白色结晶性粉末。常见的有a -、3 -、丫 -CYD 三种，分别由6, 7, 8个葡萄糖分子构成。药物作为客分子经包合后，溶解度增大，稳定性提高，液体药物可粉末化，可 防止挥发性成分挥发，掩盖药物的不良气味或味道，调节释药速率，提高药物的生 物利用度，降低药物的刺激性与毒副作用等。符合下列条件之一的有机药物，通常都可以与环糊精包合成包合物：药物结构 中的原子数大于 5个且药物的稠环小于 5个；药物分子量在

3、100400之间；药物在水中的溶解度小于 10mg/ml ;药物的熔点低于 250Co也有药物符合上述条件而不能 与环糊精包合的，如几何形状不合适；也有因环糊精用量不合适而不能包合的。无 机药物大多数不宜与环糊精包合。环糊精包合物的制备方法很多，有饱和水溶液法、研磨法、喷雾干燥法、冷冻干燥法以及中和法等，其中以饱和水溶液法(亦称重结 晶法或共沉淀法)为最常用。包合物根据主分子的构成可分为多分子包合物、单分子包合物和大分子包合 物；根据主分子形成空穴的几何形状又分为管形包合物(channel或tunnel inclusioncompound )、笼形包合物 (chathrate 或 cage i

4、nclusion compound )和层状包合物 (layer inclusion compound ）。本实验的客分子为莪术挥发油，具有较强的挥发性，临床证明具有抗肿瘤作用。莪术醇是莪术油中抗癌有效成分。现有莪术油静脉注射液及乳剂等剂型，但稳定性 较差，对光敏感，强光下易分解。将莪术油制成包合物后，可减少莪术油的挥发， 使液态油状态改变成固体粉末，便于配方，还可具有缓释作用。三、实验内容与操作（一）莪术挥发油-B环糊精包合物的制备1. 莪术挥发油的制备将莪术粉碎成中等粉末，取200g,加入10倍量的蒸馏水，经挥发油提取器提取3.0小时，得棕褐色油状液体，用无水硫酸钠脱水后，即得莪术挥发油，

5、备用。2 .莪术挥发油乙醇溶液的制备精密吸取莪术挥发油 1ml，加无水乙醇5ml，溶解，即得，备用。3. 3 -环糊精饱和水溶液的制备称取B -环糊精8g,置烧杯中，加蒸馏水 100ml，在60± 1C条件下制成饱和水 溶液，保温，备用。4 .莪术挥发油-3环糊精包合物的制备将3 -环糊精饱和水溶液 100ml置烧杯中，于磁力搅拌器上，60C恒温，另精密吸取莪术油乙醇液 5ml，缓慢滴入到60C的3 -环糊精饱和水溶液中，不断搅拌，并 用5ml无水乙醇洗涤移液管，同时将洗涤液滴入到3-环糊精饱和溶液中。待出现浑浊逐渐有白色沉淀析出，继续搅拌4小时（本实验中为掌握方法，可暂定搅拌1小时

6、），停止加热，继续搅拌至室温，最后置冰箱中放置12小时（实验中也可用冰浴冷却），待沉淀析出完全后，抽滤，用无水乙醇5ml洗涤三次，抽滤至干，50 C以下干燥，称重，计算收得率。（二）包合物形成的验证方法1 .薄层色谱法（TLC ）硅胶G板的制作将1份固定相（硅胶 G）和3份含有0.5%CMC-Na的水溶液在研钵中向一方向 研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动斜面器进行涂 布（厚度为0.20.3mm）,取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，然后在76沈阳药科大学实验十六包合物的制备及其验证药剂学实验110C活化30分钟，取出后立即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查

7、其均匀度 （可通过透射光和反射光检视）。样品液的制备 莪术挥发油样品液的制备（A）精密吸取莪术挥发油 0.5ml，加无水乙醇9.5ml，溶解，即得，备用。（0.05 油 / 乙醇）。 莪术挥发油-B环糊精包合物样品液的制备（ B）精密称取包合物适量（相当于含有0.5ml莪术挥发油的量），加无水乙醇9.5ml,振荡，取上清液，备用。TLC条件用微量进样器精密分别吸取样品液 A、B各101点于同一硅胶 G板上，以石 油醚：乙酸乙酯（9: 1）为展开剂，展开前将板置展开槽中饱和 10分钟，上行展开， 展距15cm, 1%香草醛浓硫酸液为显色剂，喷雾烘干显色。2 .差热分析（DTA ） 样品的制备：莪

8、术挥发油为样品 a,3 -环糊精为样品b,包合物为样品c,按 包合物中的比例量称取莪术挥发油与B -环糊精，制成莪术挥发油与B -环糊精的混合 物为样品doDTA条件：测定气 N2为40ml/min，量程为土 100uV，升温速度为10C /min , 走纸速度600mm/h，样品与参比物的称量大致相等。（三）莪术油-B环糊精包合物中含油量的测定1.精密量取莪术油 1ml，置圆底烧瓶中，加蒸馏水100ml，用挥发油测定法提取莪术油，并计量。2 称取相当于1ml莪术挥发油的包合物置圆底烧瓶中，加水100ml，按上述方法提取莪术挥发油并计量。根据所测数值，利用下述公式计算包合物的含油率、利用率及收

9、得率。含油率包合物中实际含油量包合物量_（g）(g) 100 %(1)利用率包合物中实际含油量（ml）投油量（ml）包合物收率包合物实际量（g ）环糊精（g）投油量（g ）100 %(3)100%(2)77沈阳药科大学实验十六包合物的制备及其验证药剂学实验（四）含量测定（紫外分光光度法）1. 对照品溶液的制备精密称取莪术醇 250mg,置25ml量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密吸取其1ml,置50ml容量瓶中，加10%聚山梨酯-80 1ml,用无水乙醇定容至刻 度（0.2mg/ml）。2. 样品溶液的制备莪术挥发油样品液的制备精密量取莪术挥发油 0.1ml，置25ml容量瓶中，加

10、10%聚山梨酯-80 0.5ml，加 无水乙醇稀释并定容至刻度，即得。莪术挥发油-B环糊精包合物样品溶液的制备精密称取相当于含有 0.1ml莪术挥发油量的包合物， 加20ml无水乙醇，振摇10 分钟，静置1小时，过滤，滤液置 25ml容量瓶中，加10%聚山梨酯-80 0.5ml，加无 水乙醇定容至刻度，即得。空白溶液的制备精密量取10%聚山梨酯-800.5ml置25ml容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，即得。3. 测定方法精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各0.5ml，置100ml容量瓶中，用0.2%香草醛硫酸液定容至刻度，摇匀，放置30分钟，于510nm处测定吸收度，按下式计算莪术醇含量。Cx= （Ax/Ar） Cr式中Cx-供试品溶液的浓度，Ax-供试品溶液的吸收度，Cr为对照品溶液的浓度，Ar-对照品溶液的吸收度。四、实验结果与讨论1 .包合物的含油率、利用率及吸收率见表1。表1.包合物的含油率、利用率及吸收率样品含油率利用率收得率包合物2 .包合物形成的验证（1）绘制TLC图，说明包合前后的特征斑点与Rf