生化与分子生物学实验指导

1、生化与分子生物学实验指导-()作者: 日期:实验氨基酸纸层析法、实验目的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。、实验原理纸层析法（pa per ch ro ma t o gr a phy）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技，是用滤纸为支持物，术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上（此点称为原点）,进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶

2、剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示:原点到层析斑点中心的距离原点到溶齐愉沿的距离在一定条件下某的大小与物质的结构、性质、种物质的R f值是常数。R f值溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，Rf值是常数，故可根据R f值作定性判断。样品中如有多种氨 基酸，其中某些氨基酸的 Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。为此,当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目

3、的，这种方法称为双向纸 层析法。氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离a -氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生 （亮）黄色物质。三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。2试剂(1)氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0. 5 % )。(2)展层剂:V正丁醇（A . R.）: : V （80% 甲酸）:V （水）=15:3:2(3)显色剂: 0. 5g茚三酮溶于1 00mL无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。四、实验方法1.滤纸准

4、备：选用新华1号滤纸，裁成5cm X 2 0 cm的长方形，在距纸一端2 cm处用铅笔轻轻划一基线,在线上每隔1 cm作一记号，标出4个原点。2.点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点(用量1020uL)，用吹风机稍加吹干后再点下一次,重复23次，点子直径不能超过3mm。展层剂液面不能淹没原点基3. 展层:将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸内盖展层缸进行展层,线,当溶剂上升至1 520cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿线，把滤纸烘干。4. 显色:用喷雾器在滤纸上均匀喷上显色剂，用热风吹干，层析斑点即可显现。5. 结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的

5、距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf值，与标准氨基酸的R f值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。五、实验结果及分析六、思考题影响氨基酸R f值的因素有哪些？实验甲醛滴定法测定氨基氮、实验目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。二、实验原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡:N H 3是弱酸，完全解离时PH为11 -12或更高，若用碱滴定NH3所释放的H +来测定氨基 准确称取3 75mg甘氨酸，溶解后定容至100m I。酸，一般指示剂变色点。R-CH-GXI= K-CH-C00 十域小于10,很难准确指示滴定终常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物

6、，使上述平衡右移，促使N H 3释放H+,使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9. 0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。WHjR-CH-OOO + MH 、中和IiH2HCHORYH-COCr血敗曲HCHOR I5mL、 lmL、0.1mL; 7 22分光光度计四、操作方法1.标准曲线的制备取6支试管,按下表加入各试剂：管号？012345标准蛋白溶液（m 1）00. 20.40. 60 .81 . 00. 9%Ni C1溶液(ml)1. 00. 80.60 .40. 20待测样品（ml）/考马斯亮 蓝试剂（ml）5. 05. 05.05 .05.05. 0

7、摇匀，放置5min,测吸光度值A595n m以各管相应标准蛋白质含量（ mg）为横坐标、A 5 9 5为纵坐标，绘制标准曲线。2.待测样品测定试管中加蛋白质样品 1. 0 mL ,再加入5.0mL考马斯亮蓝 G- 2 50试剂，摇匀，放置 5m i n后，在5 95nm波长下吸光度值，记录 A 5 95。根据所测A5 9 5从标准曲线上查得蛋白质含量。并 计算蛋白样品的浓度（mg/ml）。五、实验结果及分析六、思考题蛋白质含量的测定还有哪些方法？其优缺点是什么？影响酶促反应速度的因素、实验目的通过本实验了解温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。二、实验原理；糊精根据分子大唾液淀粉酶催

8、化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。淀粉溶液与碘反应呈蓝色 小,与碘反应分别呈蓝、紫、红、无色等不同的颜色；麦芽糖不与碘呈色。唾液淀粉酶的活性受温度、酸碱度、抑制剂与激活剂等的影响。温度：温度降低，酶促反应减弱或停止；温度升高，反应速度加快。当上升至某一温度时，酶促反应速度达最大值，此温度称为酶的最适温度。由于酶的化学本质是蛋白质，温度过高会导致蛋 白质构象的改变，因此如果温度继续升高，反应速度反而会迅速下降甚至完全丧失。酸碱度：唾液淀粉酶最适pH为PH6. 9,高于或低于酶的最适 pH值,都将引起酶活性的降低,过酸或过碱的反应条件可使酶活性丧失。抑制剂与激活剂：酶的活性常受某些物质的影响，能增加

9、酶的活性称为酶的激活剂：降低酶活性且不使酶蛋白变性的称为酶的抑制剂。如Cl-为唾液淀粉酶的激活剂，Cu2+%唾液淀粉酶的抑制剂。根据上述性质，可以用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断唾液淀粉酶是否存在及其活性大小。三、试剂及器材1.试剂: 1漩粉溶液,1 %氯化钠溶液，1%硫酸铜溶液,1%硫酸钠溶液，碘液，磷酸氢二钠(0 . 2 m mo l/L ),柠 檬酸溶液(0. 1 mmol/L)。2 .器材:试管，试管夹，恒温水浴锅(37 C ),吸管，滴管，试管架。四、实验操作:1 .收集唾液：实验者先将痰咳尽，用自来水漱口， 清除口腔内食物残渣，再含蒸馏水约15 mL作咀嚼咕漱运动，3 m

10、 in后吐入小烧杯中备用。2.观察温度对酶促反应速度的影响取试管3支，编号1 ,2,3，按下表操作：试剂(m l)123错误!唾液111错曰误! 1%淀粉222 o ac(0,1 ) 错曰误!水浴5mi n1 0 0C（冷却）37 C0 C碘液1滴（冷却）1滴1滴现象3.观察pH对酶促反应速度的影响 配制一系列pH不等的缓冲液。试剂（ml）1230 .2mm 0 l/ L磷酸氢二 钠5. 1 57.7 29.72O.lmmol /L柠檬酸4.852. 280.2 8P H5.006.808.00取试管3支，编号1 , 2 ,3 ,按下表操作：试剂(m 1 )123唾液222缓冲液3 ( P H

11、5.0 0)3 ( P H6 .80)3(p H & 00)1%淀粉2223 7C水浴 10m i n碘液1滴1滴1滴现象4观察激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响取试管4支，编号1,2,3 , 4,按下表操作：试剂滴12341%淀粉2 0202020唾液101 0101 0蒸馏水6一一一1 %氯化钠一6一一1僦酸铜一一6一1僦酸钠一一一637C水浴 51 0 min碘液1滴1滴1滴1滴现象五、实验结果及分析六、思考题影响酶促反应速度的因素有哪些？它们如何影响酶的活性实验七酶的活性及专一性测定、实验目的 通过本实验，了解酶的活性测定方法及其对底物催化的专一性。二、实验原理唾液淀粉酶能专一的催化淀

12、粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色，以此证明酶催化底物的专一性。三、器材及试剂1.器材:试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱 ，冰箱等。2.试剂: (1)0. 5 %淀粉溶液(含0.3%NaCl):称取可溶性淀粉0. 5g ,加5 m 1蒸馏水调成糊状, 徐徐倒入8 0m 1煮沸的蒸馏水中，不断搅拌,待其溶解后，加0.3gNaCl，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。(2)2 %蔗糖溶液：

13、称2g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。(3)班氏试剂：溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中,冷却后加水至1 50ml为A 液。取柠檬酸钠17 3g和无水碳酸钠100g,加蒸馏水600ml，加热溶解,冷却后加水至8 50ml为B液。将A液缓慢倒入B液中,混合即可。(4)稀释唾液：用清水漱口，清除食物残渣。再含蒸馏水15ml作咀嚼运动,2分钟后将稀释唾液收集于样品杯中备用。(5 )碘-碘化钾溶液:四、实验方法1 .唾液淀粉酶的活性测定唾液的稀释:取 1 0支试管，分别编上号1 6,取1 m 1唾液加入1号试管,加水稀 释10倍后从中取出1 m 1加入2号试管，依次梯度稀释。试剂管号12

14、3456唾液(ml)11A11r?11 Zr蒸馏水(ml)9 毘*2 各取上述稀释的唾液各1 ml,分别加入相应编号的试管里，然后向6支试管内同时加入1 ml的0.5%的淀粉溶液，振荡混匀后放入 37 C恒温水浴中,10分钟后取出 滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，计算酶的活 性用于后续实验。2.淀粉酶的专一性取3个试管，分别编号，按下表操作，记录实验现象。试管编号1 #2 #3#稀释的唾液淀粉酶/mL1110. 5%淀粉溶液/mL32%蔗糖溶液/mL3蒸馏水/m L3摇匀，37C保温15m inB en edict 试剂/mL222摇匀,沸水煮2分钟观察

15、记录结果五、实验结果及分析六思考题每组中蒸馏水分别起什么作用？将酶煮沸10min，重复以上实验可能会有什么结果？实验八维生素C的定量测定、目的要求1. 学习并掌握定量测定维生素 C的原理和方法。2. 了解蔬菜、水果中维生素 C含量情况。、实验原理维生素C是具有 L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等 ）中的含量更为丰富。2,6-二氯酚靛酚（D CP IP ）,本身则氧化维生素C具有很强的还原性。还原型抗坏血酸能还原染料 为脱氢型。在酸性溶液中，2, 6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，

16、当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的，当溶液从无色变成微红色维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。三.材料、器材及试剂1 .材料：新鲜青菜2 .器材：电子天平,酸式滴定管，移液管，容量瓶，量筒，锥形瓶，研钵。3. 试剂(1)2%草酸溶液：草酸1 g溶于10 0 m l蒸馏水中。2 , 6-二氯酚靛酚溶液：2 50mg 2 ,6 -二氯酚靛酚溶于 15 0 m I

17、含有5 2 mg NaH CO3的热水 中，冷却后加水稀释至 2 5 0ml，贮于棕色瓶中冷藏(4C)约可保存一 周。每次临用时，以标准抗 坏血酸溶液标定。(3)标准抗坏血酸溶液(0.2mg /ml ):准确称取20mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)溶于2%草酸溶液中，并稀释至 100ml,贮于棕色瓶中，冷藏,最好临用前配制。四. 操作步骤1.样品的处理和提取(1) 取材：称取4 .0g样品洗净、切碎。(2) 研磨：样品置研钵中，加少量2%草酸溶液研磨成汁液，用2%草酸溶液冲洗转移至 50 m l离心管,3 0 00r/m i n离心1 5 min,上清转移到5 0 m 1容量瓶

18、中,2%草酸溶液定容至5 0ml。2. 空白测定取2%草酸10m I,放入5 0 ml三角瓶中，用2, 6 -二氯酚靛酚钠溶液滴定至三角瓶内溶液呈粉红色，15秒内不褪色为终点，记录所用滴定液体积，重复三次取平均值。3.标定2,6-二氯酚靛酚钠溶液取2 m 1标准抗坏血酸溶液加 8ml 2%草酸溶液,置于5 0m 1三角瓶内，用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至终点，记录所消耗2,6 -二氯酚靛酚钠溶液的量，重复三次取平均值。4. 样品的测定取样品液1 0ml，放入5 0 m l三角瓶中，立即用2, 6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的V0 标定染料时滴定标准维生素C所消耗的染料毫升数重复三次取平均

19、值。K =0. 2*2/(V 0- V2 )粉红色并保持15秒内不褪色，记录所消耗滴定液的体积,五. 实验结果及分析X = (V1-V 2 )*K * V* 10 0/ (W*V3 )其中X 1 0 0克样品所含维生素C毫克数(m g/1 0 0 g)W称取样品重(g)V1 滴定样品所用染料毫升数V 2滴定空白所用样品液毫升数V3 样品测定时所用样品液毫升数V样品提取液稀释之总体积K1毫升染料液所能氧化维生素C之毫克数六、思考题本实验方法的优缺点有哪些实验九 质粒DNA的提取与检测、实验目的1、学习质粒 D NA的提取原理与琼脂糖凝胶电泳原理;2、掌握质粒 D N A的提取方法；3、掌握电泳检

20、测 DNA的方法。二、实验原理质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1 -2 0 Ok b 不等，为双链、闭环的DNA分子，以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。在细菌细胞内共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋D NA外,还会产生其它形式的质粒D NA。如果质粒DNA 两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，形成松驰型的环状分子，称开环DN A( Op e n c i r c ul ar DNA , 简称o c DN

21、 A);如果质粒DNA的两条链在同一处断裂，则形成线状DNA ( L i near DN A)。当提取的质粒 DNA 电泳 时，同一质粒DN A 其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。H值下带负电荷的DN琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DN A片段的标准方法。琼脂糖主要在DNA 制备电泳中 作为一种固体支持基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中，在中性PA向阳极迁移，其迁移速率由下列多种因素决定：D NA 的分子大小，琼脂糖浓度，DNA分子的 构象，电源电压，嵌入染料的存在及离子强度等。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA 片段。当用低浓

22、度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Et hi di u m b romide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1 10ng的DNA条带，从而可以确定D N A片段在凝胶中的位置。三、材料、设备及试剂1.材料：含PET3 2 a的E. coli DH 5 a菌株,1.5ml塑料离心管(又称e ppendor f 管)，离心管架。2.设备：台式高速离心机，恒温振荡摇床，高压蒸汽消毒器(灭菌锅),涡旋振荡器，移液枪(20卩l,2001 ,1 0 0 0卩1 )及枪头，琼脂糖平板电泳装置，微波炉或电炉，紫外透射仪。3.试剂(1 )L B液体培养基：酵母膏5g ，蛋白胨10g ,NaC l 10g,加蒸馏水

23、至1000ml，用NaOH和HCI调节P H 7 .07.2,分装灭菌。(2) LB固体培养基：加1 .5%琼脂粉的LB液体培养基，灭菌倒平板。(3) 氨苄青霉素(A mp ic i l 1 i n,A mp)母液：配成50mg/ml水溶液,-20 C保存备用。(4)溶菌酶溶液：用10m mol/L Tri sHC l( pH 8.0 )溶液配制成10mg / m1，并分装成小份(如1.5 ml)保存于20 C。(5) 3mo 1 / 1 N aAc (p H5.2):50m 1 水中溶解 40.81g Na A c?3H2O,用冰醋酸调 pH 至 5.2 ,加水定容至100m 1,分装后高压

24、灭菌，储存于4C冰箱。(6) 溶液1:5 0 mmol/L 葡萄糖，25 m m o 1 / L Tr i s. Cl (p H 8.0) , 10mm ol/ L ED TA (pH8. 0)。溶液I可成批配制，每瓶100m 1，高压灭菌1 5分钟，储存于4C冰箱。(7) 溶液 n : 0 .2 mo 1 /L N aOH (临用前用 1 0 mol/ L NaOH 母液稀释),1 % SDS。(8 )溶液川：5 mo l/L KAc 60m 1,冰醋酸1 1 .5 m 1 , H2 O 2 8. 5m l,定容至 1 0 0 m 1 ,并高压灭菌。溶液终浓度为：K+ 3 mol / L,

25、Ac - 5mol/L。(9) RNA 酶 A 母液:将 RNA 酶 A 溶于 10mm o l/ L TrisHCl(pH7.5), 1 5m mol/L Na C l 中，配 成10mg/ml的溶液 汙10 0C加热15分钟，使混有的D NA 酶失活。冷却后用 1.5m1 epp en d o r f管分装成小份保存于-2 0C。(10)酚:氯仿:异戊醇=2 5:2 4: 1 (V/V/ V)。(11 )T E 缓冲液：10 mm o/L T r is HC l (p H8.0) ,1 mm o 1/L EDTA (p H 8. 0 )。高压灭菌后储存于4C冰箱中。(12)电泳所用试剂：.

26、TBE 缓冲液(5 X )：称取Tris 5 4g,硼酸 27.5g，并加入 0.5M ED TA(pH 8 .0) 20m 1,定溶至 1000ml。上样缓冲液(6X ):0. 2 5%溴酚蓝，4 0 % (W /V)蔗糖水溶液。.溴化乙锭(:将EB配制成1 0 mg/ml,用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。四、操作步骤1.细菌的培养和收集将含有质粒P ET 32a 的DH5 a菌种接种在L B固体培养基(含50卩g/ml Amp)中， 37C培养12 24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5m1 LB液体培养基 洽5 0 yg /m lAmp)中,37 C振荡培养约12小时至对数生长后期。

27、2.质粒D NA快速提取(1)取1 .5ml 培养液倒入1. 5m 1 ep pendorf 管中,4C下1 2000g 离心3 0秒。弃上清，将管倒置于卫生纸上数分钟，使液体流尽。菌体沉淀重悬浮于1 0 0卩I溶液I中(需剧烈振荡),室温下放置5-10分钟。加入新配制的溶液n2 0 0卩l,盖紧管口，快速温和颠倒eppe nd o rf管数次，以混匀内容物(千万不要振荡)，冰浴5分钟。(5)加入15 0卩l预冷的溶液川,盖紧管口，并倒置离心管，温和振荡10秒，使沉淀混匀 冰浴中5-10分钟，4C下12000g离心5 10分钟。(6)上清液移入干净e ppendorf管中，加入等体积的酚/氯仿

28、(1:1),振荡混匀,4C下12 0 0 0 g离心5分钟。(7 )将水相移入干净e ppen dor f管中，加入2倍体积的无水乙醇，振荡混匀后置于20C冰箱中2 0分钟，然后4C下1 200 0 g离心1 0分钟。(8)弃上清，将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出，加入1m I 70 %乙醇洗沉淀一次,4 C下12 000 g 离心5-10分钟。(9)吸除上清液，将管倒置于卫生纸上使液体流尽，真空干燥10分钟或室温干燥。(10)将沉淀溶于 20卩l TE缓冲液(pH& 0，含2 0卩g /m l RNa s eA)中，储于-2 0C冰箱中。3.质粒DNA的检测1、取5X TBE缓冲液2

29、Om l加水至2 00m I,配制成0. 5X TBE 稀释缓冲液，待用。2、胶液的制备：称取0.4g琼脂糖置于2 0 0ml锥形瓶中，加入5 0ml 0.5XTB E稀释缓冲液，放入微波炉里（或电炉上）加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。3、胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏 （宽约1 cm ）紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧，待琼脂糖溶液凝后将剩余的琼脂

30、糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层。倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀，速度也不可太快，否则容易出现气 泡。待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入0.5X TB E稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。因边缘效应样品槽附近会有一些隆起，阻碍缓冲液进入样品槽中，所以要注意保证样品槽中应注满缓冲液。4、加样：取1 0卩I DNA与2卩I 6 X载样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。每加完一个样品要更换tip头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。5、电泳：加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-8 0V,电

31、流在40 mA以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2 cm时，停止电泳。6、染色:未加EB 的胶板在电泳完毕后移入 0. 5卩g/m I的E B溶液中，室温下染色20 -25分钟。7、观察：在波长为 2 5 4nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。DNA存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。五、实验结果及分析六、思考题琼脂糖凝胶电泳过程中影响DNA迁移率的因素有哪些?实验PCR扩增目的基因、实验目的通过本实验学习 PC R反应的基本原理与实验技术。、实验原理多聚酶链式反应(pol y merase c hain reaction, PCR)基本原理类似于D NA的天然复制过程,其特异