山西膳食干预人群试验方案20090525v4

1、以肠道菌群为靶点的膳食干预在慢性病早期预防中的作用研究人群试验方案一、课题简介本课题旨在通过对中心性肥胖志愿者给予以中国传统膳食 （高纤维和低动物 性食物）为主的膳食干预，检测膳食改变前后体重及炎性因子等生理指标、 机体 代谢指标和肠道菌群结构的变化，研究饮食通过改变肠道菌群影响人体健康的 机理，同时通过研究肠道菌群与遗传基因和膳食之间的相互作用对体内代谢的影 响，了解菌群结构参与肥胖等代谢性疾病的有关分子机制。 项目的实施可系统评 估中国传统饮食对社区居民慢性病早期预防和干预的效果。本课题是“中法肠道元基因组合作研究项目” 的组成部分， 也是国际人类微 生物组联盟（ IHMC ）的入盟项目。

2、本课题将严格按照国际人类微生物组联盟的有关伦理和技术规范进行实施。 课题进行过程中， 法国、英国等国际合作单位的科学家和博士生也将在现场 参加部分工作。二、研究背景随着经济的快速发展和生活方式的不断西化，我国的肥胖、 2 型糖尿病和心 脑血管疾病等慢性代谢性疾病发病率急剧上升，已成为影响健康的主要威胁。 根据 2002年全国营养调查数据，我国现有 2亿 1千 5百万人超重或肥胖 （世界卫 生组织 WHO 标准 ），约占世界总肥胖人口的五分之一。如果不采取有效措施， 预计在未来 10 年中仅心脏病、中风和糖尿病就将给中国带来至少 5500亿美元的 经济损失。因此，发现导致我国肥胖症流行的主要病因

3、，并建立强有力和易推 广的干预措施，遏制人群肥胖及代谢性疾病发病率的上升趋势，已成为我国营 养和预防医学领域中亟待解决的科学问题。人肠道内的微生物有上千种之多，这些微生物的组成、活动与人类的营养 和健康息息相关，成为机体不可缺少的组成部分。近年来的研究表明：肥胖与 肠道菌群密切相关。 肠道菌群可以发酵宿主自身无法消化的食物多糖， 帮助宿主 从食物中提取更多的热量。 无菌小鼠食用高脂、高热量的饲料后并不发胖，说明 肠道菌群在饮食诱发肥胖的过程中是一种必不可少的因素， 研究者发现肠道菌群 通过抑制禁食诱导脂肪因子（Fiaf）的水平和降低磷酸化AMP活化蛋白（AMPK） 的活性这两种机制，促进甘油三

4、酯在脂肪细胞中的积聚，在饮食诱导肥胖的发生中起作用。 肥胖 患者 肠道 菌 群的 结 构不同于 正常体 重个体，拟 杆菌门(BacteroideS /厚壁菌门(Firmicutes)的比例显著降低；但通过食用低热量食谱 减肥后，肥胖患者体重下降，拟杆菌门的比例也回升，肠道菌群结构向正常人 接近。分别将肥胖和瘦型的小鼠的肠道菌群接种到无菌小鼠中， 定植“肥胖菌群” 的受体小鼠的身体脂肪总存储量要显著高于接受 “瘦菌群” 的小鼠，说明肠道菌 群可以在很大程度上控制肥胖的表型。 另外，肥胖者具有全身性的长期低度炎症， 身体中的炎症因子(如 TNF- a、IL-6、IL-1等)通过激活一些磷酸激酶，使

5、胰 岛素受体底物( IRS)-1 丝氨酸磷酸化，阻断胰岛素信号传导，使动物和人产生 胰岛素抵抗。最新的研究表明用高脂饮食饲喂小鼠，小鼠肠道中产生脂多糖(LPS)的细菌比例增高，肠屏障功能下降、肠壁通透性增加，LPS通过肠壁进入血液就成为内毒素，导致代谢性内毒素血症，引起体内发生低水平的炎症反 应和胰岛素抵抗，所以饮食不当导致的肠道菌群失调是肥胖者体内炎症反应的 起因。扶持保护肠屏障的有益肠道菌，压制和清除肠道内的“条件致病菌”， 清除体内慢性炎症，是控制体重、预防和治疗肥胖的关键。肥胖者多习惯食用高脂肪、高蛋白的“西化”膳食。其中植物多糖含量少， 使大量保护肠屏障的细菌因缺乏营养不能生长，而动

6、物性的脂肪和蛋白质又太 多，大量来不及消化的动物脂肪和蛋白质进入结肠， 导致嗜动物性营养的产毒素 的细菌和机会性病原菌在肠道中占优势，这些细菌释放的抗原和毒素进入血液， 就会诱发慢性炎症，导致肥胖的加重。而中国传统饮食粗粮所含的淀粉结构特殊，不容易被人消化，进入肠道后 需被肠道菌中嗜植物多糖的细菌发酵成短链脂肪酸才能被吸收。 因此长期食用粗 粮，可以使这些有益细菌逐渐占优势地位，肠屏障功能加强， 肠道菌群与人体就 可以和谐共生。苦瓜等含苦味的蔬菜具有微弱的杀菌作用，尤其对嗜动物性营 养的条件致病菌具有抑制作用。生吃苦瓜，可以迅速减低条件致病菌的数量， 消除体内的慢性炎症。综上所述， 对肥胖人群

7、的饮食结构加以调整，进行以植物性食物为主的中国 传统膳食的减肥干预，多吃富含膳食纤维和维生素及优质蛋白但热量低的粗 粮，通过动态监测这种饮食结构由 “西化”向中国传统饮食回归的过程中，个体 的菌群结构和生理、代谢指标的变化，解析饮食如何通过调节肠道菌群而影响 机体的代谢和生理，将有助于我们在肥胖的病因、机理和预防的研究方面取得 突破性的进展，为有针对性地建立有效的预防措施奠定基础。三、研究目的具体研究目标包括：1. 提取膳食干预过程中，肠道菌群、宿主代谢和生理指标的特征性变化规律，发现相应的分子标记物;2 通过分子流行病学分析以及生理代谢指标分析，找到与肥胖密切关联的 菌群结构特征，明确营养/

8、生活方式、与菌群结构特征与肥胖和代谢性疾病的交 互关系；3综合分析肠道菌群与基因和膳食之间的相互作用对内分泌激素及其与血 糖、脂代谢、胰岛素敏感性、脂肪细胞因子、机体免疫和炎性因子水平的关 系，探讨菌群参与肥胖和代谢性疾病有关的分子机制。4.系统评估高纤维、低动物性食物为主的膳食应用于肥胖干预的效果和可行 性，并为建立一套以肠道菌群为靶点的、 通过干预肥胖预防各种慢性病的措施提 供依据。四、研究方法（一）研究对象本次研究的对象为中心性II度肥胖患者。具体指标为：2BMI > 30 kg/m纳入标准汉族，在太原市居住至少 5年，有太原市户口和固定住所;目前没有参加其他研究项目；具有良好的记

9、忆和活动能力；生活能够自理； 排除标准过去3个月内使用过抗生素，并持续 3天或以上;腰围 > 80 cm （女性）/ 90 cm （男性）；腰臀比（WHR ）> 0.85 （女性）/0.90 （男性）；CT扫描腹腔内脏脂肪面积120 cm2。要求为25-55岁（年龄按照筛选调查日期与出生日期的差值计算）的太原市 常住居民。随机分为两组：干预组:进行以高纤维、高碳水化合物和低动物性食物为主的膳食干预6个月，期间定期进行体检和血液、大小便样品的采集；对照组:不进行任何干预，6个月内定期进行问卷、体检和血液、大小便样 品的采集。妊娠期以及哺乳期妇女;酗酒（1周饮酒5次以上，平均每次 2两

10、白酒或半斤黄酒或 5瓶啤酒以上）；过去6个月内患有严重的精神疾患；过去6个月内因各种慢性疾病持续服用药物1月以上者；过去3个月内因下列疾病接受药物治疗的：胆囊炎、消化道溃疡、尿路感染、急性肾盂肾炎、膀胱炎、甲亢、甲减等甲状腺功能异常；过去1年内进行过胃肠道手术，除阑尾炎、疝气手术外；慢性、迁延性肝炎患者及肝硬化等严重肝脏疾病患者，和乙肝病毒表面抗原（HBsAg ）阳性及肝功能有异常者（血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶是正常值的2.5 倍）；已经被诊断患有糖尿病；患有急、慢性肾功能不全；患有垂体功能异常；患有严重器质性疾病如肿瘤 /癌症、冠心病、心肌梗塞以及中风等；患有肺结核和艾滋病等传染病；肢体残疾

11、，或其他原因引起的生活不能自理、不能清楚地回忆、回答问题者；贫血：血红蛋白 <10g/dl ；过去3月内以任何药物方法（包括氟苯丙氨等食欲抑制剂类药物和甲状腺片、孕酮、泻剂等和各种中药成分减肥药）或手术方式进行减肥者。3. 选点原则志愿者相对集中；有良好的社区卫生服务体系；地方政府大力支持；具有便利的交通、通讯条件。4. 样本量计算由于本课题的主要目的是通过以中国传统膳食（高纤维和低动物性食物）为主的膳食干预，观察膳食改变对中心性肥胖志愿者的体重、炎性因子等生理指标、机体代谢指标和肠道菌群结构的潜在影响。由于目前仅有部分先期筛查人群的体重指标，因此样本量的估计主要依据体重指标的期望改变值

12、而进行。所需样本量的计算结果由Matlab?7.7.0的sampsizepwr.m程序获得。由前期筛查人群小样本，BMI>30的男性9人，平均体重94.5kg,方差为7.6; 女性20人，平均体重78.0kg，方差为8.5。如果当实验后期，考虑每组人群的体重平均下降期望值，当alpha=0.05,power=0.9时，各组所需的样本数如下：性别体重减轻期望值（kg）所需样本数（人）男性527440370女性533450387根据前期的经验，平均体重减轻4kg是可以期待的，考虑到实际操作中不可 预见的因素，因此，样本量估计需要招募 100人。（二）抽样及招募方案志愿者招募通过太原市的社区卫

13、生服务中心及下属的社区卫生服务站具体 执行。干预组和对照组志愿者的招募需分社区进行，对对照组志愿者不进行任何膳 食干预的宣传教育。应尽量隔离两组人群，避免互相干扰。招募流程：（1）筛查社区健康档案，从中筛选符合试验基本条件的人员，即年龄25-552岁，汉族，太原市常住居民，BMI >30 kg/m或腰围> 80 cm （女性） / 90 cm （男性）;（2）对符合基本条件的人员，逐一通过电话进行筛选问卷调查，对照纳入 排除标准确定候选人员；（3） 对候选者入户进行身高、体重测量，排除不符合中心性II度肥胖症的 人员，符合条件的进行一般问卷、膳食频度问卷和24小时膳食回顾 问卷调查

14、；（4） 合格的候选者在山西省人民医院进行全套体格检查，根据体检结果最终确定合格的志愿者。合格的干预组和对照组志愿者需分别签署知情同意书后再参加本项目的试 验内容。（三）膳食干预项目预期完成100位（其中男性或女性比例不低于 40%）中心性II度肥胖 症患者为期6个月的膳食干预，期间志愿者需严格按照项目制定的干预方案控制 饮食，定期进行体检，并按照要求采集血样、大小便样品。对照组人群100人。1.准备工作对干预组志愿者进行教育，使其明确本研究制定的减肥措施的科学性和安 全性，从而能自觉、自愿、高度配合地参加本研究。培训志愿者，使他们掌握自行收集大、小便样品的操作方法以及如何准确记 录饮食日记。

15、2膳食干预时间和方法膳食干预的主要措施为：前2个月：志愿者严格按照膳食干预方案，食用统一提供的营养主餐、冲调 剂和饼干，并在营养师的指导下每日添加适量蔬菜、豆制品和水果；后4个月：可根据体检指标和营养师的指导，减少干预食品的供应量，由志愿者在营养师的 指导下，按照新的营养平衡原则管理自己的膳食。膳食干预的主要原则：（1）在膳食干预的前两个月，禁止进食任何动物性食品（包括各种肉类、蛋类、奶制品），之后可以进食每日不超过 50克的肉类、鱼类和虾。（2）可由营养师根据每位志愿者的身高、体重及从事体力劳动的强度制订 分餐食谱表。（3）干预组志愿者和工作人员成立 健康俱乐部，每周进行讲座或咨询活动 一次

16、，并发放一周的干预食品。同时开通网上咨询交流平台。建议：本研究需有一批固定的现场工作人员 （30人左右），其中25人负责干 预组人群，由每位工作人员负责 5名志愿者的招募、 问卷调查、 动员培训以及干 预实施过程中干预食品的发放、 样品的收集以及辅导和随访等活动； 另外 5 人负 责对照组人群，每位工作人员负责 20 名志愿者的招募、问卷调查以及体检的组 织、样品的收集等活动。3. 体检、采样和问卷调查1）体检 干预组志愿者的体检包括两种类型，一种为基本体检，另一种为全套体检， 均在山西省人民医院由固定人员进行。基本体检 项目为：身高、体重、腰围、臀围、血压和脉搏；全套体检 项目为：身高、体重

17、、腰围、臀围、血压和脉搏；血常规检测（包括：白细胞、红细胞、血红蛋白、细胞比积、RBC平均容量、RBC平均血红量、RBC血红浓度、血小板、淋巴细胞百分比、嗜 碱性细胞百分比、嗜酸性细胞百分比、单核细胞百分比、中性细胞百 分比、淋巴细胞绝对值、嗜碱性细胞绝对值、嗜酸性细胞绝对值、单 核细胞绝对值、中性细胞绝对值、平均血小板体积、血小板平均宽 度、红细胞分布宽度、血小板压积等项目） ； 乙肝表面抗原和肝功化验 （包括乙肝表面抗原、谷丙转氨酶、谷草转氨 酶、Y -谷氨酰酶的测定）； 空腹血糖、糖耐量、糖化血红蛋白、胰岛素测定； 总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯。C-反应蛋白检测；CT

18、扫描腹腔内脏脂肪； 超声检测脂肪肝； 肠屏障功能检测。体检时间安排：干预组：在膳食干预开始前 30天（ -30天），医院组织所有候选志愿者进行第 1次全 套体检。根据体检的结果选择符合本项目排除纳入标准的志愿者作为正式志愿 者。第1次体检后，每位志愿者按照常规膳食习惯自由进食1个月。膳食干预前1天（0天），由各社区卫生服务站组织志愿者进行第 2次体检， 此次为基本体检。膳食干预期间，+60天和+180天需进行一次全套体检。试验+30天、+90天、 +120天、+150天，各进行一次基本体检。综上所述：整个项目实施中，干预组志愿者需在山西省人民医院进行全套体检3次和基本体检5次。对照组：对照组志

19、愿者进行 三次全套体检（招募时进行第一次体检，第 3、7个月后 分别进行一次体检）。2）采样干预组志愿者需在试验的-30天、+60天、+180天各收集一次血液样品（随 全套体检进行），在试验的-30天、0天、+30天、+60天、+90天、+120天、+150 天、+180天各采集一次大、小便样品。即：共采集 3次血样，8次大、小便样 品。其中-30天、+60天和+180天（即3次全套体检的前1天晚上）需要志愿者 入住指定的宾馆采集大、小便样品，以保证收集到新鲜的样品并立即冻存（采样 方法见附录2）。其它时间（0天、+30天、+90天、+120天、+150天）由志愿者自行在家中 采集大、小便样品

20、（采样方法见附录1）。每次基本体检日前由工作人员给志愿者发放采样用的粪尿样采集袋。志愿者于体检前一日开始采集大便样品，并于体检日清晨采集空腹晨尿。大小便样品在体检时带至医院。粪便和尿液样品采集的 间隔时间应不超过24小时。对照组志愿者需在三次全套体检日前入住指定的宾馆采集大、小便样品。i）血浆样品收集（在医院进行）体检当日清晨8点左右，在空腹8-10小时后，受试个体应该空腹前往医院。在体检时，采集10ml新鲜血液，医院用其中一部分样品进行血糖、血脂及其他 相关指标的分析，其余用于分离血浆、白细胞和红细胞。每一份合格血样必须包 含至少6管血浆（每管体积不得少于400AI），1管白细胞（每管体积大

21、约500-7001 ）和2管红细胞，于-80C冻存，用于后续分析。ii）尿液样品收集收集方法见附录1、2。iii）大便样品收集收集方法见附录1、2。3）问卷调查对干预组志愿者，需在-30日前依次收集筛选问卷和一般问卷、膳食频度问 卷和24小时膳食回顾问卷 等信息。从膳食干预日（+1天）起至干预结束（+180 天），志愿者须每天在统一配发的 每日饮食记录表 日记本上详细记录每日食 用八宝粥、高复合纤维饼干和高复合纤维冲调剂的情况，以及其它加餐和服药等 特殊情况，并在每周健康俱乐部活动日递交给社区工作人员。志愿者需向工作人员汇报所有的不良事件、药物、治疗以及生活方式的改变情况。 如果受试者有任 何

22、不适，需及时与工作人员联系。工作人员需检查1周来受试者每日的饮食情况， 总结后再将日记本返回志愿者。对照组志愿者，需在试验开始依次收集筛选问卷和一般问卷、膳食频度问卷 和24小时膳食回顾问卷 等信息,第3月和第7月分别收集24小时膳食回顾问卷 信息。五、数据收集本项目中收集到的数据汇总如下表。数据收集内容内容简要描述一般问卷人口学资料出生日期、性别、婚姻状态、职业、居住年限社会经济状态受教育年限，家庭总收入等病史、家族史包括高血压、糖尿病和心血管疾病在内的所有健康问题，以及药物治疗情况吸烟和饮酒目前和过去吸烟和饮酒的状况：包括数量、类型、开始和停止年龄等体力活动水平过去一周包括工作和休闲时间在

23、内的体力活动和体育锻炼 情况膳食调查冋卷膳食调查24小时膳食回顾和过去一年食物摄入频率及摄入量每日饮食记录 表减肥期间每日饮 食记录饮食干预期间，每日服用试验用八宝粥、高复合纤维苦瓜粉冲调剂、高复合纤维饼干及加餐食物情况，以及各种特殊情况信息体检基本体检体格检查身高、体重、腰围、臀围、血压、脉搏全套体检体格检查身高、体重、腰围、臀围、血压、脉搏肠屏障功能测定肠屏障通透性监测血液血常规；乙肝表面抗原和肝功化验；空腹血糖、糖耐量、 糖化血红蛋白、胰岛素测定；总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯；C-反应蛋白其它超声检测脂肪肝生物样本采集血样血清、红细胞、白细胞、血浆尿样代谢物组成；肠通透

24、性检测粪便肠道菌群组成、粪便中免疫毒素、遗传毒素和细胞毒素的活 性测定六、时间安排2009.03与合作各方签署相关合作协议；准备现场试验所需场地和物资；培训现场工作人员；举行项目启动仪式（3月31日）；2009.04-05确定候选志愿者，进行现场调查的前期准备；第一次全套体检，排除不符合条件的研究对象;培训正式志愿者；成立健康俱乐部，建立网上咨询交流平台；2009.05-12完成6个月的膳食干预;完成血、大小便样品的采集;七、研究者介绍赵立平：男，微生物学教授，博士生导师。主要研究方向是微生物分子生态 学与微生物元基因组学、人体系统生物学。1989年在南京农业大学获得博士学位，1989年至19

25、93年在山西农科院生 物工程研究室任副主任，1993年至1995年美国康乃尔大学植病系访问学者，1995 年至2000年山西大学生物工程实验室主任，2000年12月至今在上海交通大学 生命科学技术学院工作。现任上海系统生物医学研究中心副主任，上海交通大学 生命科学技术学院副院长。国家自然科学基金第九届遗传学科评审委员、第十届 微生物学科评审委员。国际微生物生态学会（ISME）常务理事。Systematic and Applied Microbiology、 FEMS Microbial Ecology 等国际刊物的编委。在国内最早系统开展微生物分子生态学研究，在复杂微生物群落结构分析技术和统计

26、计算方法等方面做了很多创新性工作。对广泛使用的PCR-DGGE技术做了重要改进，成为国际上使用该技术研究微生物生态学的先进实验室之一； 创新建立了基于随机扩增指纹图技术和分子杂交技术，分析对比群落结构，发现重要功能细菌基因组片段作为分子标记的技术方法。对人和动物的肠道、处理 工业废水的生化池、土壤、油藏等环境中的微生物群落结构与功能的关系做了大 量的研究工作，取得了有意义的结果。在 PNAS （proceeding of National academy of Science USA）、AEM （Applied and Environmental Microbiology）、ISME Jour

27、nal、 BMC Bioinformatic、 Journal of Proteome Research、Journal of Clinical Microbiology、Microbial Ecology、FEMS Microbiology Ecology、Journal of Microbiological Methods、FEMS Microbiology Letters 等刊物发表相关论文二十余 篇,在国内外同行中具有广泛的影响。 在2006年8月的第11届国际微生物生态 大会上被选为国际微生物生态学会常务理事。多次在国际学术会议做大会报告和分会场报告。如应邀在第八届细菌遗传学 与生态

28、学国际研讨会（法国里昂）上做 key note报告，在第十届国际微生物生态 大会环境生物技术分会（墨西哥坎昆）做报告。 2008年8月作为主席主持了第 11届国际微生物生态大会（澳大利亚）的人体微生物组会议，并做特邀报告。2009年 4 月在国际胃肠道功能会议（美国芝加哥）做大会报告。 近年来，积极推动系统生物学理念在微生物生态学领域特别是人体肠道菌群 研究中的应用，注重发展用代谢组学和元基因组学相结合的方法研究肠道菌群在 肥胖、糖尿病等复杂疾病中的作用， 开始形成一个新的人体元基因组学研究方向， 取得了一些重要的研究结果。 其中发表在 PNAS 的论文连续 2 个月是被阅读最多 的论文，并作

29、为 Research Highlight 得到 NATURE Review Microbiology 的点评， 同时得到 Nature China 网站的点评。主持承担过多项 863 计划、国家自然科学基金、 地方和国家级科技项目。 目 前主持的项目有国家自然科学基金重点项目、 科技部国际合作重点项目、 科技部 支撑计划项目、上海市国际合作项目、卫生部国家科技重大专项（子课题）和多 项横向课题等。此外，其领导的团队目前还参与国家 973 计划和多个 863 计划、 国家自然基金面上项目等。联 系 方 式 ： 单 位 电 话 34204877 ， 电 子 邮 件 ： lpzhao，Blog: 附

30、录 1：基本体检大小便样品的采集方法工作人员需在每次体检日前两天给每位志愿者发放采样用的贴有志愿者姓 名和编号的大小便样品采集盒一套 （内含贴有编号的储尿管 1 个、一次性塑料手 套 2 双、一次性塑料杯 1 个、大便采集管 1 个、采样方法说明一份） 。志愿者在 家中自行采集大小便样品。大便和小便样品采集的间隔时间应不超过 24 小时。 一、小便样品采集方法（一）采样方法受试者需在体检当日采集 清晨起床后第一次排尿的中段尿 。 在排小便前打开大小便样品采集盒， 取出一次性塑料杯和储尿管。 先将前段 小便排出后， 将中段尿液排入一次性塑料杯中， 再将尿液倒入储尿管内， 即刻旋 紧管盖，将储尿管

31、放在样品收集盒内。尿液装满储尿管的 2/3 即可，不要全满。 接尿操作可带一次性塑料手套进行。一次性塑料杯中多余的尿液倒入马桶中冲 掉，一次性杯子丢入垃圾桶。（二）接收储尿管志愿者采集到晨尿后， 带到交给体检处的工作人员进行集中和保存。 工作人 员接收储尿管，检查尿量是否足够、储尿管管盖是否旋紧。 接收符合条件的尿样， 同时检查编号，在小便样品采集表和名单相应地方进行标注。（三）小便样品分装 工作人员接收储尿管后即刻返回实验室，找到对应编号的小便样品保存管， 排列在试管架上。混匀储尿管中小便样品后，取 1.5 ml 样品至每个相同编号的 样品保存管中。将分装后的4支/人小管放入有相应编号的小袋

32、中，-80 °C保存。二、大便样品采集方法（一）采样方法大便和小便样品采集的间隔时间应不超过 24小时。每位志愿者都配备有一个采样小盆， 套好塑料袋， 内铺干净草纸。 受试者排 便前先在马桶内排净小便， 并用水冲掉， 然后将准备好的塑料盆放入马桶的出水 口之上，将大便排入小盆内。尽量勿将尿液排入小盆内，污染大便样品。打开大便样品采集管， 用采样勺挑取一满勺中段大便， 放入大便样品采集管 的液体中，即刻旋紧管盖，用手剧烈震摇，混匀样品和液体，放于室温阴湿干燥 处。尽快通知工作人员递交样品。（二）大便样品的分装 工作人员拿到大便样品后，先在漩涡震荡器上剧烈悬浮大便采集管内样品，再将管中悬

33、液分装至6个2 ml细胞冻存管中，每管约1.5 ml , -80 °C保存。附录 2：全套体检大小便样品的采集方法小便样品收集标准操作流程一、准备工作（一）发放小便样品采集袋及说明 志愿者到达指定宾馆后，先集中于会议室。工作人员向所有志愿者简要说明采 样和体检的要求和注意事项，并观看大小便样品采集流程录像。工作人员需在志愿者入住房间前给每位志愿者发放贴有志愿者姓名和编号的大 小便样品采集袋一套（内含 50 ml 贴有志愿者编码的储尿管 1 个、一次性塑料手套 1 双、一次性塑料杯 1 个、草纸若干、采样说明一份） ，并在志愿者住宿房间的卫生 间内放置 1 个储尿管架。（二）器材与准备大小便样品采集袋、乳胶手套、 50 ml 离心管架、冻存管架、 1 ml 移液枪、贴 有编号的6支/人的2 ml细胞冻存管、冰盒、-20 ° C冰箱、-70 ° C冰箱。