酵母细胞固定化

1、酵母酵母细细胞的固定化胞的固定化常用方法常用方法操作缺陷操作缺陷酶酶包埋法包埋法酶分子一般相对较小，容易从大分子有机物酶分子一般相对较小，容易从大分子有机物网格中逸出；如果反应物分子较大，则不易网格中逸出；如果反应物分子较大，则不易进入网格中与酶接触进入网格中与酶接触吸附法吸附法将酶吸附在不溶于水的载体上比较困难，同将酶吸附在不溶于水的载体上比较困难，同时酶也容易从载体上脱落时酶也容易从载体上脱落交联法交联法需要改变酶的某些结构（基团），酶的催化需要改变酶的某些结构（基团），酶的催化作用受到一定程度的影响作用受到一定程度的影响细胞细胞包埋法包埋法处于中心的细胞容易缺氧而受到损害，同时处于中心的

2、细胞容易缺氧而受到损害，同时，反应原料不易进入到这些细胞之中，反应原料不易进入到这些细胞之中常用的固定化技术 基础知识：1固定化酶的应用实例生产高果糖浆（1）高果糖浆的生产原理：葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶果糖果糖葡萄糖葡萄糖（2）葡萄糖异构酶固定：将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。（3）高果糖浆的生产操作（识图-反应柱）：从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。 固定化酶的反应柱示意图【比较比较】酶和细胞的固定方法和特点酶和细胞的固定方法和特点2固定化技术的方法：将酶和细胞固定化方法有包埋法、化学结合法和物理吸附法。固定对象固定对象酶酶细胞细胞适宜

3、固定法适宜固定法化学结合法、物理吸附法化学结合法、物理吸附法包埋法包埋法特特点点体积小，固定一种酶。体积小，固定一种酶。包埋法容易丢失包埋法容易丢失体积大，固定一系列酶。体积大，固定一系列酶。难以化学结合和吸附难以化学结合和吸附 思考1对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？ 思考2将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。吸附法。吸附法。3固定细胞的材料：固定细胞时应当选用不溶于水的多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等 2实验设计 1制备固定化酵母细胞 （1）酵母细胞的活化：1g干酵母

4、10mL蒸馏水50mL烧杯搅拌均匀放置1h，使之活化。 思考3活化是指什么？ （2）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2150mL蒸馏水200mL烧杯溶解备用。活化是指让处于休眠状态的微生物重新活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。恢复正常生活状态的过程。 （3）配制海藻酸钠溶液： 0.7g海藻酸10mL水50mL烧杯酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化蒸馏水定容到10mL。思考4微火加热并不断搅拌的目的是什么？ （4）海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。防止海藻酸钠焦糊。防止海藻酸钠焦糊

5、。 思考5为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？ （5）固定化酵母细胞： 以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。防止高温杀死酵母细胞。防止高温杀死酵母细胞。 2固定化酵母细胞的发酵 （6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗23次。 （7）发酵：150mL10葡萄糖固定化酵母细胞200mL锤形瓶密封25发酵24h。 思考6发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 思考7锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？ 思考8在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌进行无氧呼吸产生的。酵母

6、菌进行无氧呼吸产生的。需要。需要。例例1下列有关固定化技术的叙述，正确的下列有关固定化技术的叙述，正确的是（是（）A固定化酶只是在细胞内才能发挥作用固定化酶只是在细胞内才能发挥作用B固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C酶的固定是酶分离纯化的常用方法酶的固定是酶分离纯化的常用方法D固定化酶的固定化方式就是吸附在固体固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。表面上。B例例2关于固定化细胞的叙述，正确的是关于固定化细胞的叙述，正确的是A催化效率高，低耗能、低污染催化效率高，低耗能、低污染B对环境的条件非常敏感，容易失活对环境的条件非常敏感，容易失活C既能与反应物充分接触，又能与产物分离

7、既能与反应物充分接触，又能与产物分离D成本低、操作简单，但反应效果可能很低成本低、操作简单，但反应效果可能很低(D)例例3溶解海藻酸钠，最好采用溶解海藻酸钠，最好采用加热的加热的方法方法A小火间断小火间断B小火持续小火持续C大火间断大火间断D大火持续大火持续A例例4关于酵母菌的叙述，正确的是关于酵母菌的叙述，正确的是A酵母菌在营养物质充足时、环境适宜时，酵母菌在营养物质充足时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖依靠有性生殖进行繁殖B酵母菌的代谢类型时异养厌氧型酵母菌的代谢类型时异养厌氧型C酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜各种的细胞器膜等膜

8、D用酵母菌酿酒时，应先密封后通气用酵母菌酿酒时，应先密封后通气C例例5将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态，下面加快的一项是氧状态，下面加快的一项是ACO2的释放的释放B丙酮酸的氧化丙酮酸的氧化C葡萄糖的利用葡萄糖的利用DATP的形成的形成C例例6固定化酶的优点是固定化酶的优点是A有利于增加酶的活性有利于增加酶的活性B有利于产物的纯化有利于产物的纯化C有利于提高反应速度有利于提高反应速度D有利于酶发挥作用有利于酶发挥作用B例例7下列不是用于包埋法固定化细胞的载下列不是用于包埋法固定化细胞的载体是体是A琼脂糖琼脂糖B醋酸纤维素醋酸纤维素C聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺D聚

9、乙烯树脂聚乙烯树脂D例例8固定化细胞技术不包括固定化细胞技术不包括A包埋法包埋法B化学结合化化学结合化C物理法物理法D生物法生物法D 思考1对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？ 思考2将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。吸附法。吸附法。3固定细胞的材料：固定细胞时应当选用不溶于水的多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等例例1下列有关固定化技术的叙述，正确的下列有关固定化技术的叙述，正确的是（是（）A固定化酶只是在细胞内才能发挥作用固定化酶只是在细胞内才能发挥作用B固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C酶的固定是酶分离纯化的常用方法酶的固定是酶分离纯化的常用方法D固定化酶的固定化方式就是吸附在固体固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。表面上。B例例2关于固定化细胞的叙述，正确的是关于固