天然药物分析方法

1、最新资料推荐天然药物分析方法二、水蒸汽蒸储法：挥发油、小分子化合物 三、升华法：樟脑、香豆素四、压榨法：龙舌兰中海柯皂甘元五、酶解法：甘元六、化学法：内酯 七、超声波萃取 八、超临界流体萃取SFE九、膜 别离技术大类成分样品制备一、生物碱强碱非极性有机溶剂 萃取极性有机溶剂萃取水提或酸水提弱碱有机溶剂直接提取水溶性生物碱或季镂碱：雷氏盐、磷鸨酸挥发性生物碱：水蒸气蒸储、 升华法 二、黄酮 醇提 铅盐沉淀法 三、皂 甘：醇提 精制方法 醇-醍沉淀法 铅盐沉淀法 胆苗醇沉淀法 氧化镁吸附法 四、强心昔：醇提五、挥发油水蒸汽蒸储浸取法：石油醍吸收法：豚脂、牛脂冷压法第三节供试品溶液的精制溶剂别离法：

2、多糖提取、去蛋白液液萃取：石油醍除脂溶性色素沉淀法：1 / 12醋酸铅除酸性物质和鞍质盐析法:丹皮酚-氯化钠色谱法: 柱色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等常见杂质的处理 1、鞍质：明胶沉淀、生物碱沉淀、醋酸铅、氨水沉淀2、叶绿素：苯、氯仿、铅盐 3、油脂、蜡和树脂:石油醍、苯 4、蛋白质：乙醇、甲醇、铅盐 5、无机盐:醇提、透析 6、糖和淀粉：有机溶剂提取水分检查法烘干法不含或少含挥发性成分甲苯法含挥发性成分减压枯燥法含挥发性成分贵重药GC法气相色谱法古蔡法检查碑的原理为金属锌与酸作用产生新生态的氢, 与药物中微量碎盐反响生成具挥发 性的碎化氢, 遇澳 化汞试纸, 产生黄色至棕色 的碑斑

3、,与一定量标准碑溶液所生成 的碑班比 较,判定药物中碎盐的含量.醋酸铅棉花、 澳化汞试纸、 标准碎溶液、 盐 酸、碘化钾 试液、酸性氯化亚锡试液、锌粒常用的理化鉴定方法 显微鉴 别 定性反响颜色或沉淀反响 色谱法 波谱法2颜 色或沉淀反响各类成分因结构或功能团的不同, 常与某些特定试剂发生反响, 产生不同的颜色或沉 淀.生物碱与碘化韧钾生成橙色沉淀;慈酿类与碱液反响生成最新资料推荐橙、红、蓝色； 黄酮类与盐酸镁粉的反响 内酯类的异羟肪酸 铁反响皂苴类的Liebermann Burchard反响酚类的三氯化铁反 应 鞍质的明胶沉淀反响 氨基酸的苗三酮反响 糖类的苯酚-硫 酸反响等.对照药材法阳性

4、对照：将要鉴别的药材按制剂工艺处理,再按鉴别方法提取的溶液阴性对照：把制剂中要鉴别的药材除去,用剩 下的各味药按制剂工艺处理,再按鉴别方法提 取的溶液分析实例万氏牛黄清心丸牛黄清热解毒药,主含胆酸类成分.黄连清热燥湿药,主要为小集碱.黄苓清热燥湿药,主要为黄酮类.桅子清热泻火药,主含桅子苴.朱砂安神药,主含硫化汞Hg0 .郁金活血去瘀药, 主含挥发油.化学鉴别1.朱砂的鉴别 取本品3g,加水适量, 研匀, 反复 洗去悬浮物, 可得少量朱红色沉淀,取 出,参加盐酸1ml及铜片少量, 加热煮 沸,铜片由黄色变为银白色.十211cli Cu CuC12- Hg 1112s在酸性条件下,朱砂与 铜片发

5、生置换反响析出金属汞,在铜片外表形成银白色汞齐色谱 鉴别2.人工牛黄的鉴别取本品,剪碎,加硅藻± 0. 6g, 研3 / 12 匀,加氯仿10ml、冰醋酸0. 5ml , 加热回流30min,放冷, 滤 过,滤液蒸 干,残渣加乙醇2ml使溶解,滤过, 滤液作为供试 品溶液.胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液, 作为 对照品溶液.TLC 法CMC-Na硅月& G展开剂 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 32: 6: 1: 1 显色剂10%磷铝酸乙醇液,1100C, 10min 黄苓 的鉴别供试品溶液的制备：取本品3g ,剪碎, 加硅藻土 0. 5g ,研匀, 加甲醇

6、20ml, 加热回流1hr,放冷, 滤过,滤液作为供试品溶液.对照品溶液的制备：黄苓昔对 照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品 溶液.TLC 法CMC-Na硅月G 4%昔酸钠使斑点更为集中 展开剂 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1:1 显色剂2%E氯化铁乙醇液-OH 与Fe+3络合5. 黄连的鉴别 供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的 盐酸-甲醇提取液4ml,水浴蒸干,残 渣加 甲醇溶解,使成1ml作为供试品溶液.对照药材溶液的制备：黄连对照药材50mg 加甲醇10ml,回流加热15min ,滤过, 滤液 蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药 材溶液.对照品溶液的制备：最新

7、资料推荐再取盐酸小聚碱对照 品,加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液, 作 为对照品溶液TLC法 硅月G CMC-N共开剂 苯-醋酸乙酯-甲醇- 异丙醇-浓 氨试液12： 6： 3： 3： 1 显色方式UV365nm 硅 胶：微酸性极性固定相,适用于 酸性、中性物质别离可以制备成酸度不 同或碱性硅胶扩大使用范围氧化铝：碱性极性固定相,适用于 碱性、中性物质别离可以制备成中性或 酸性氧化铝扩大使用范围聚酰胺：含有酰胺基极性固定相,适用于酚类、醇类化合物的别离纤维素：含有羟基的极性固定相,适用于别离亲水性物质.薄层扫描仪中国药典采用双波长薄层扫描仪实例 2用气相色谱法同时测定石 菖蒲挥发油中-细

8、辛醍和-细辛醍的含量 色谱条件HP-35 二苯 基-65%-二甲基硅氧烷共聚物毛细管气相色谱柱；程序升温：起始 温度为30 C ,升至220C ,保持5m进样口温度:250 C;检测器温 度:320 C;进样量:2. 0 l ;无分流进样；溶剂：甲醇；载气：氨气； 柱头压:5. 5 04Pa ;内标物:-蔡酚.样品溶液的制备用水蒸汽蒸储法提取石菖蒲中的挥发油,称 取适量,以-蔡酚,以甲醇溶解,进样.对照品溶液的制备称取-细辛醍、-细辛醍对照品适量,加 0.2mgml 1 -蔡酚的甲醇溶液制成含-细辛醍的对照品溶液1和5 / 12 含-细辛醍的对照品溶液.灵敏度 分析方法的灵敏度是指单位浓度或量

9、与响应值的比 值.检测限：以信噪比来确定检测限的 最低水平.回收率.加样回收率 即于被测成分含量的成药中再精 密参加一定量的被测成分纯品2.以成药空白所做的加样回收率 在 成药空白9即除去欲测成分的药材后 制成的成药中参加一定 量的被测纯品, 依 法测定.例如治伤软膏中苦参碱的含量测定色谱条件的选择2.1固定相的选择曾采用苯基柱、C8、ODS硅胶柱、DIOL和富基柱,苦参碱、槐定碱和槐果碱均不能到达良好的别离；考虑到用反相色谱柱时, 软膏基质影响色谱柱寿命最终参考苦参国家标准中苦参碱、 氧化苦参碱的含量测 定方法,选用氨基键合硅胶为固 定相,本试验采用L色谱柱.2.2流动相的选择采用氨基柱,

10、试验了如下几种流动相系统,见表1.最终采用 苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱含量测定用流动相：乙 睛-无水乙醇-3%磷酸,结合本药实际情况, 将比例调整为 表1流动相系统的选择 乙睛-无水乙醇-3海酸84:9:7苦参碱出 峰时间适宜, 无干扰,苦参碱出峰太慢 乙睛-无水乙醇-0.1%磷最新资料推荐酸(调节PH至2.5) , (80:10:10)乙睛-无水乙醇-3海酸(80:10:10)苦参碱出峰太早,有干扰 结果 流动相组成2.3检测波长的选择采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参 碱的含量测定用波长220 nm前处理方法的选择先后采用甲醇水浴提取法,乙醇水浴提取法,氯仿放置过夜 提取法,氯仿振摇

11、提取法,氯仿回流法,氯仿超声提取法.甲醇、乙醇水浴提取方法简单,但提取出的成分复杂,干扰苦参碱的测定.以氯仿作为提取溶剂提取率高且杂质干扰少,我们比拟了以下几种提取方法：氯仿放置过夜提取法、氯仿振摇提取法、氯仿回流法、 氯仿超声提取法.氯仿放置过夜提取和氯仿振摇提取法提取率均不高且操作不便,费时.通过比拟, 超声 提取和回流提取测得的含量接近,因超声提取操作步骤简 单,所以选择此方法处理供试品.3.1超声时间的考察 表2超声时间的考察0.056 0.060 0.0600.065 0.065苦参碱含量(%)超声时间(min) 3.2冰浴时间的考察为了预防软膏中脂溶性基质影响色谱柱寿命,采取冰浴的

12、方式使脂溶性基质尽可能析 出,再离心除去.表3冰浴时间的考察 测得含量()冰浴时间(min) 207 / 1240 50 60 70 试验结果说明:冰浴1小时以内不会造成样品含量降低 考虑时间长有利于基质 析出,最终确定为60 min.复溶溶剂的选择曾选用甲醇作测定法色谱条件及系统适用性以氨基键合硅胶为填充剂；以乙睛-无水乙醇-3%磷酸溶液84:9:7为流动相；检测波长220 nm.理论板数按苦参碱峰计算应不低于1500.对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量,加流动相溶解,制成每1ml含苦参碱80 g的溶液,即得.供试品溶液的制备取本品内容物约 2.5 g,精密称定,置 具塞锥形瓶中,尽可

13、能平铺于底部,加氨水1 ml,充分浸润膏体后,精密参加氯仿50 ml,密塞,称定重量,60 c超声处理 功率250W 频率40kHz 1小 时,放冷, 再称定重量, 用氯 仿补足减失的重量, 摇匀,转移至分液漏斗 中,分取氯仿层,滤 过,精密量取续滤液25 ml置100 ml烧杯中,80c水 浴蒸干,残 渣精密参加流动相10 ml,密闭,超声3分钟,并时时振摇,所得溶液转移至10ml具塞玻璃离心管中, 密塞,置冰浴中静置1小 时,离心20分钟4000转/分,取上清液作为供试品溶液.测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各201 ,注入液相色谱 仪,测定,即得.本品每支含苦参碱C15H24N2

14、O 不得少于10 mg.为复溶溶剂,图谱显示对苦参 碱峰有干扰, 采用流动相复溶最新资料推荐没有干扰,所 以选择流动相为溶剂.5 方法学验证5.1专属性试验空白溶剂的制备流动相作为空白溶剂：乙睛-无水乙醇-3%磷 酸84:9:7 ;苦参碱对照品溶液的制备取苦参碱对照品约10 mg,精密称定, 置50 ml容量瓶中,流动相溶解并 稀释至刻度, 摇匀,精密量取20 ml置50 ml 容量瓶中, 流动相稀释至刻 度,摇匀,作为对照品溶液,精密量取20 1 ,注入液相色谱仪, 测定, 即得；苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱混合对照溶液的制备 分别取上述对照品适量,流动相溶解, 摇匀,即得

15、； 不含苦参的阴性对照供试品溶液的制备取不含苦参的阴性对照软膏内容物约2.5 g,依测定法中供试品溶液的 制备方法操作,即 得；软膏供试品溶液的制备定量限苦参碱对照溶液稀释浓度为每1 ml含245 ng的溶 液时,色谱图中苦参碱的信噪比约为 10 见附图6,所以苦参碱的最低定量限为245 ng/ml线性试验精密称取苦参碱对照品12.25 mg ,置50 ml量瓶中, 加流动相 溶解并稀释制成每1 ml含245 g的溶液,作为贮备液；分别精密量取贮备液2、5、10、12.5和20 ml于25 ml量瓶中,用 流动相稀释至刻度,摇匀,得稀释液1、2、3、4和5.分别精密量取各稀释液20 l ,注入

16、液相色谱仪, 记录 色谱图,测定结果见表.9 / 12Y=9943.8X-8472.9回归方程 187387 481722 961907 12068291941545 2428906 平均峰面积 A C g/ml 19.6 49 98 122.5 196 2455.4精密度试验重复性 取2批供试品,照测定法项下方法操 作,一天内共分析6次,计算含量202271101批治伤 软膏重复性试验考察 RSD% 1.80平均值mg支 含量mg/ 18. 支分析次数1 2中间精密度 进样精密度试验 6回收率试验 取苦参碱对照品约21 mg,精密称定, 置50 ml量瓶中,用纯水溶 解并稀释到刻度, 制成4

17、22.9 g/ml的对照品储藏液.取20221101批供试品的内容物约1.25 g,精密称定,置具 塞 锥形瓶中,制备9份；分别精密参加苦参碱对照品储藏 液各1、2、 3 ml ,制成75%、100 %和125%三个浓度水平的供试品每个浓 度水平3份,按测定法项下测定,由重复性试验知道本批供试品苦参碱含量为0.06 % ,按下式计算回收率：回收率% =测得总量内容物含苦参碱量/对照品参加量m0 100 %回收率试验说明,三个浓度水平测定的回收率均在95.0%-105.0位间溶液稳定性试验耐用性试验三批供试品的含 量测定：每支软膏中含苦参碱约为18mg规定本品每支软膏含苦参碱C15H24N2O不

18、得少于黄杨宁片 中黄杨宁的含量测定 本品为黄杨宁经加工制成的片剂.每片含环维黄杨星 D 0. 5mg或1 mg.对照品溶液的制备精密称取经1 05c枯燥至恒重的环维黄杨星最新资料推荐D对照品25mg,置250ml量瓶中, 加甲醇70ml使溶解,用0. 05mol /L磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度,摇匀,精密量取1 0ml ,置1 00ml量瓶中,用0. 05mol /L 磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度, 摇匀,即得每1 ml含环维黄杨星D1 0 g .环维黄杨星D1 0mg供试品溶液的制备取本品20片每片含环维黄杨星D0.5mg , 精密称定2. 050g ,研细,精密称取0. 1 020g 约相当于黄 杨0.5m g, 置50ml量瓶中,力口 0. 05mol /L 磷酸二氢钠缓冲 液至近刻度,80c