抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测及临床意义

1、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义间接荧光免疫(IIF)方法(欧盟)一、ANCA既念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶 抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断 具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA勺靶抗原，蛋白酶3(PR3),髓过氧化物酶(MPO1人白细胞弹性蛋白酶(HEL),乳铁蛋白 (LF),组织蛋白酶G(Cath G),杀菌/通透性增强蛋白(BPI),人溶酶体相关 膜蛋白2 (H-LAMP2),溶菌素(LYS),天青杀素，防御素，烯醇化

2、酶，葡萄糖 醛酸酶。根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型(c-ANCA,是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型 荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，具荧光模型表 现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶 3(PR3)。另一种是核周型(p-ANCA,是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状 荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO),人白细胞弹性蛋白酶(HEL),乳铁蛋白(LF),组织蛋白酶G(Cath G),杀菌/通透性增强蛋 白(BPI),人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2),溶菌素(LYS)等。不同抗体在 乙醇和甲醛固定的中性粒细

3、胞片中，具荧光模型表现有所不同。抗MPOt体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的 c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA而其他非MPOS体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定 ANCA勺靶抗原PR3 MP。非MPCE类。二、ANCA勺检测间接荧光免疫方法是检测 ANCA勺参考方法或者标准方法，至今也是最 常用的经典方法。IIF是区分c-ANC府口 p-ANCA勺基础，有较高敏感性，可区分ANA勺干扰：Hep-2Hep-2甲醛固1:判断甲醛抗性p-ANCA抗MPO半定

4、量，但IIF测定的是总ANCA不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方 法作为补充。由于多种免疫性疾病患者存在 ANA用IIF法检测ANCA寸，会产生干扰实验 结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒 细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2 （人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片 各细胞分布及意义如表一所述。ANC展光模型及表现如表二所述。表一：四联基质片分布及意义细胞有典型荧光表现，细胞定粒细胞c-ANCA2:区分p-ANCA寸甲醛敏感还是耐受抗体耐甲醛，具荧光与在 乙醇固定的中性粒细胞 中的c-ANCA类似甲醛敏感p-ANCA其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无

5、欠儿表现区分ANA与ANCA借助 猴肝细胞和其中的肝血 窦粒细胞。ANCA阳性，只有肝血窦 粒细胞出现荧光，。如果 两者同时阳性，所有肝细 胞核都启荧光。猴肝细胞乙醇固定粒细胞是标准实验基质。区分两种荧光模型：c-ANCA p-ANCA表二：ANC双光模型及表现荧光模型荧 光 表 现乙醇固定粒细胞甲醛固定粒细胞Hep-2 细胞猴肝细胞ANA阴c-ANCN日性胞质呈现弥散 的细颗粒荧光， 胞质荧光清晰 勾勒出核的轮胞质呈现弥散 的细颗粒荧光， 胞质荧光清晰 勾勒出核的轮阴性肝细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞 出现荧光。性廓，分页核之间荧光增强。廓，分页核之间荧光增强。p-ANCA阳性甲醛耐受P-A

6、NCA呈现核周胞质 平滑丝状带荧 光。荧光阳性的 胞质主要集中 在分页核周围， 形成环状或不 规则的块状。胞质呈现弥散 的细颗粒荧光， 胞质荧光清晰 勾勒出核的轮 廓，分页核之间 荧光增强。阴性肝脏细胞本身无火儿。仅肝血窦粒细胞 出现荧光。甲醛敏感P-ANCA呈现核周胞质 平滑丝状带荧 光。荧光阳性的 胞质主要集中 在分页核周围， 形成环状或不 规则的块状。阴性阴性肝脏细胞本身无火儿。仅肝血窦粒细胞 出现荧光。ANA阳性ANC础生细胞核阳性，荧光强度增强阴性细胞核呈现荧光表现，如ANA所述肝细胞核阳性。肝血窦粒细胞未见荧光。甲醛耐受p-ANC郊日性细胞核阳性，荧光强度增强安儿表现如c-ANC知

7、日性,乙细胞核呈现荧光表肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧醇，甲醛固定粒细胞所述现，如ANA所述。光。甲醛敏感p-ANC郊日性细胞核阳性，荧光强度增强阴性细胞核呈现荧光表现，如ANA所述。肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧光。三、注意事项为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题1、检测ANCA 一般建议同时做IIF初筛和确认实验，以提高ANCA勺临床应 用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。2、不能仅检测抗PR骄口 MP陋种特异性抗体，而不检测，这样容易限制ANCA 对疾病诊断的特异性。3、用IIF检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除ANA的干扰，容易出现假阳性。

8、四、临床意义（一）ancAt原发性小血管炎韦格纳肉芽肿（WG）,显微多动脉炎（MPA）,坏死性新月体性肾小球肾炎 （NCGN和变应性肉芽肿性血管炎（CSS）等等原发性系统性小血管炎的发病与 ANC阂切相关，临床上已将上述疾病统称为ANCAS关小血管炎。ANCA特异 性PR筑体和抗MPO：体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学 检测项目。1、抗PR3抗体特异性PR3抗体为WG勺标志性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为 主。但以c-ANCA诊断WGf异1i为90%,而以抗PR3抗体的特异性可超过 95%。抗PR3抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来， 但阳性率较低。抗PR3抗体

9、敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明 显时，就可出现阳性。因而抗 PR3抗体常作为 WG勺早期诊断、疗效判断、 复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。2、抗MPO；体抗MPO；体荧光模型以p-ANCA主，主要与 MPA NCGNCSSfi关。还 可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG SLE, RA药物诱导的狼疮，Felty综合症等。抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早 期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。抗MPO；体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性 NCGN寸诊断原发性小 血管炎的特异性达到99%。因而每一个不明原因的血管炎或

10、肾小球肾炎的患 者，都应该检测ANCA表三：ANCA原发性小血管炎相关疾病荧光模型靶抗原（）韦格纳肉芽肿（WG）C , P （少见）PR3 (85), MPCX 10)显微多动脉炎（MPA）C , PPR3 (45), MPCX 45)坏死性新月体性肾小球肾炎（NCGN）C , P （少见）PR3 (25), MPCX 65)变应性肉芽肿性血管炎（CSS）C , P （少见）PR3 (10), MPO( 60)结节性多动脉炎（pan少见PR3 (5), MPO( 15)抗肾小球基底膜病（抗 GBNPMPO（二）ancAi药物诱导性血管炎近年来不断有药物治疗引起的 ANCAH性的病例报道，如丙基

11、硫氧喀咤， 月井苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴噪 /甲航咪噪等。其中 报道比较多的是长期使用丙基硫氧喀咤引起的 ANCA其特点是滴度高，抗体 谱广（抗原主要是MPQ也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如 PR3 LF, Cath G, BPI, LYS等）。药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧喀 咤用药后，临床症状好转，ANC/W转阴。因此，长期使用丙基硫氧喀咤治疗 过程中，应定期检测ANCA及早发现药物诱导性血管炎。（三）ANCAf其他疾病除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现ANCA主要为P-ANCA其靶抗原并非 PR MPQ而是LF, Cath G,

12、 BPI, LYS等1 、慢性炎症性肠病（CIBD）CIBD是一种消化系统的自身免疫性疾病， 包括溃疡性结肠炎（UC,克 罗恩病（CD两种。以往的CIBD诊断依赖X线检查，内窥镜及组织学诊断， 缺乏有效的试验室指标。近年来研究发现UC病人血清中ANCA阳性率为60-80%,而CD患者的阳性率为10-20%,多为p-ANCA相关靶抗原有BPI 等。滴度与疾病的活动度和病程无关。因为p-ANC砥UC阳性率高，CD阳性 率低，故可作为两者的鉴别诊断及 UC早期诊断指标。2、结缔组织病在结缔组织病中，ANCAG性主要见于SLE和RA其他结缔组织病中少见。但文献报道在SLE和RA阳性率差异特别大(16-69%),这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。SLE中ANC郊