水中大肠杆菌的检测方法清晰整齐

1、京文似供参若，融固盘脚可制除附件水中大肠杆菌群检测方法-多管发酵法NIEA E201.54B一、方法概要本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生抱子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 1 C48 士 34时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（ Coliform group）;在不同体积或不同稀释度之水样所 产生之结果，以 100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）表示100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。二、适用范围本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。三、干扰（一）水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。（二）检测使用的玻璃器皿及设备含

2、有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。四、设备（一）量筒：100至1000 mL之量筒。（二）吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。（三）试管：大小约150 x 15 mm试管或有盖螺旋试管。（四）发酵管（fermentation tube）:大小约 22 x 9 mm之玻璃管。（五）稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。（六）锥形井瓦:200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。（七）采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。（八）冰箱：温度能保持在 4 士 2者。（九）天平：待测

3、物重量大于2 g时，须能精秤至 0.01 g；待测物重量不大于 2 g时，须能精秤至 0.001 g。质量内容#京文像供参考，取青盘脚可制除（十）培养箱：温度能保持在 35 1者。（H一 ）高压灭菌釜：温度能维持在 121c （压力约15 lb/in2或1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。（十二）高温干热烘箱：如用于玻璃器皿等用具之灭菌，温度须能保持在 160c达2小时或170c达1小时以上者（十三）接种环：为白金或银铭合金制，适用于细菌接种或移植，亦可使用无菌塑料制品。（十四）pH计：精确度达0.1 pH单位。五、试剂（一）试剂水：蒸储水或去离子水，导电度在 25 C时小于2心mho

4、/ cm （心S / cm）（二）培养基，应使用市售商品化培养基。1、硫酸月桂酸胰化蛋白豚培养基（ Lauryl sulfate tryptose broth,简称LST）1倍浓度LST培养基含有下列成份:胰化蛋白豚(Tryptose)20.0g孚L糖(Lactose)5.0g氯化钠(NaCl)5.0g磷酸氢二钾(K2HPO4)2.75g磷酸二氢钾(KH2PR)2.75g硫酸月桂酸钠(Sodium lauryl sulfate)0.1g试剂水1L配成2倍浓度（取71.2 g LST培养基粉末溶于 1 L试剂水），完全溶解后，分取 10 mL注入装有 倒置发酵管之试管内，经121c灭菌15分钟，

5、冷却后备用，灭菌后培养基之pH值应在6.8 士 0.2灭菌后培养基若未当日使用，应保存在4 士 2 c保存期限为14天。可根据检验需求量，依配方配制培美苴 Q质量内容#京文似供参若，融固盘脚可制除2、煌绿乳糖胆汁培养基( Brilliant green lactose bile broth ,简称 BGLB)1公升的BGLB培养基中含有下列成份：蛋白豚(Pepton。10.0g孚L糖(Lactose)10.0g牛胆粉(Oxgall Powder)20.0g煌绿色试剂(Brilliant Green)0.0133g试剂水1L取40 g BGLB培养基粉末溶于1 L试剂水，完全溶解后，分取 5至1

6、0 mL注入装有倒置发酵管之 试管内，经121c灭菌15分钟，冷却后备用，其 pH值应在7.2 士 0.2灭菌后培养基若未当日使用， 应保存在4 士 2 c保存期限为14天。可根据检验需求量，依配方配制培养基。(三)无菌稀释液1、磷酸二氢钾储备溶液取3.4 g磷酸二氢钾(KH2PR)溶于50 mL的试剂水中，俟完全溶解后，以 1.0 N NaOH溶液调节 其pH值为7.2 0,1然后加试剂水至 100 mL,灭菌(过滤灭菌或 121c高温高压灭菌 15分钟)后储 存于冰箱中备用。4 2 C下保存期限为 3个月。2、氯化镁储备溶液取8.1 g氯化镁(MgCl 2? 6H2O),先溶于少量试剂水，

7、 俟完全溶解后，再加试剂水至全量为 100 mL , 灭菌(过滤灭菌或 121c高温高压灭菌15分钟)后，储存于冰箱中备用。4 2 C下保存期限为 3个月。3、无菌稀释液分别取10 mL氯化镁储备溶液和 2.5 mL磷酸二氢钾储备溶液再加入试剂水至2,000 mL,混摇均匀后，分装于稀释瓶中，经 121c灭菌15分钟，作为无菌稀释液备用。如欲用于水样稀释，分装之无菌 稀释液灭菌后体积须为90 士 2.0 mL。4 2 C下保存期限为 3个月。六、采样与保存质量内容#京文似供参若，融固盘脚可制除（一）盛装水样检验微生物之容器，应使用清洁并经灭菌之玻璃瓶或无菌塑料容器或市售无菌采样袋，且于采 样时

8、应避免受到污染。水样若含有余氯时，无菌容器中应加入适量之无菌硫代硫酸钠（采取加氯之废水 时，每100 mL水样中加入0.1 mL、10%硫代硫酸钠可还原 15 mg/L余氯。采取含氯之饮用水水样时，每 100 mL之水样如加入 0.1 mL之3%硫代硫酸钠，可中和之余氯量约为5 mg / L。）。（二）采样前应清洁手部，再行采水样，所采水样应具有代表性。（三）运送时水样温度应维持在小于10c且不得冻结，而实验室内保存温度应维持在4 2 Co（四）水样应于采样后 24小时内完成推定实验之水样添加步骤（七、步骤（一）4、），并置入培养箱中培养。（五）水样量须以能做完所需检验为度，但不得少于120

9、mL。七、步骤试验分两阶段进行。首先进行推定试验，若推定试验结果为阳性反应，则继续进行第二阶段之确定试 验，如结果仍是阳性反应则显示有大肠杆菌群存在。各试验步骤如下述：（一）推定试验1、慎选发酵管中没有气泡且未污染之10 mL、2倍浓度LST试管。2、水样在进行检测或稀释之前必须剧烈摇晃25次以上，以使样品充分混摇均匀。3、视水样中微生物可能浓度范围进行水样稀释步骤，使用无菌吸管吸取 10 mL水样至90 mL无菌稀释液中，形成10倍稀释度水样，混合均匀，而后自10倍稀释度水样以相同操作方式进行一系列适当之100、1000、10000倍等稀释水样， 进行稀释步骤时，均需更换无菌稀释吸管， 水样稀释步骤如图一所示 （注 1）。4、以无菌吸管分别取各稀释度10 mL水样至内含10 mL 2倍浓度的LST试管中，每一稀释度各作5支，小心混合均匀，混合后发酵管内不可产生气泡。5、在35 1焙养箱中培养48 士