第十一章 酸度的测定

1、原子吸收分光光度法原理：原子吸收分光光度法原理： 原子吸收分光光度法是利用原子吸收分原子吸收分光光度法是利用原子吸收分光光度计来测定限量元素。它是基于基态光光度计来测定限量元素。它是基于基态原子对特定波长光吸收的一种测量方法。原子对特定波长光吸收的一种测量方法。它的基本原理是使光源辐射出的待测元素它的基本原理是使光源辐射出的待测元素的特征光谱通过样品的蒸气时，被蒸气中的特征光谱通过样品的蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，在一定范围待测元素的基态原子所吸收，在一定范围与条件下，入射光被吸收而减弱的程度与与条件下，入射光被吸收而减弱的程度与样品中待测元素的含量呈正相关。样品中待测元素的含量

2、呈正相关。原子吸收分光光度计特点：原子吸收分光光度计特点： 它主要用于痕量元素杂质的分析，具有它主要用于痕量元素杂质的分析，具有灵敏度高及选择性好两大主要优点。但是灵敏度高及选择性好两大主要优点。但是每种待测元素都要有一个能发射特定波长每种待测元素都要有一个能发射特定波长谱线的光源，即相应的空心阴极灯，这对谱线的光源，即相应的空心阴极灯，这对检测工作带来不便。检测工作带来不便。2.测定脂溶性维生素测定脂溶性维生素A时样品需如何处理？时样品需如何处理？ 皂化法皂化法 ：适用于维生素：适用于维生素A含量不高的试样。含量不高的试样。（1）皂化样品；）皂化样品； （2）水洗去除类脂物；）水洗去除类脂物

3、；（3）有机溶剂提取脂溶性维生素）有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物不皂化物)； （4）浓缩，溶于适当的溶剂测定。）浓缩，溶于适当的溶剂测定。 研磨法：适用于每克试样维生素研磨法：适用于每克试样维生素A含量大于含量大于5-10 ug试样试样（1）研磨）研磨 （2）提取）提取 （3）浓缩）浓缩 3.水溶性维生素测定时样品处理方法水溶性维生素测定时样品处理方法 测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。前处理。 维生素维生素Bl、B2 盐酸水解盐酸水解 酶解酶解 提取提取 纯化纯化 维生素维生素C通常采用草酸、草酸通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸

4、、偏磷酸醋酸溶液直接提取。醋酸溶液直接提取。淀粉酶、淀粉酶、木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶活性人造浮石、活性人造浮石、硅镁吸附剂硅镁吸附剂第十一章第十一章 酸度的测定酸度的测定第一节第一节 概述概述一、一、 酸度的概念酸度的概念1. 食品中的几种酸度食品中的几种酸度 总酸度总酸度指食品中所有酸性成分的总量。指食品中所有酸性成分的总量。包括包括在测定前已离解成在测定前已离解成 H+ 的酸的浓度（游离态），的酸的浓度（游离态），也包括未离解的酸的浓度（结合态、酸式盐）。也包括未离解的酸的浓度（结合态、酸式盐）。其大小可借助标准碱液滴定来求取，故又称其大小可借助标准碱液滴定来求取，故又称可滴可滴定酸度。定酸度

5、。有效酸度有效酸度指被测溶液中指被测溶液中H+ 的浓度。的浓度。反映反映的是已离解的酸的浓度，常用的是已离解的酸的浓度，常用pH值表示。其值表示。其大小由大小由pH计测定。计测定。 pH的大小与总酸中酸的性的大小与总酸中酸的性质与数量有关，还与食品中缓冲物的质量与缓质与数量有关，还与食品中缓冲物的质量与缓冲能力有关。冲能力有关。 活度活度强电解质，因为总离子浓度高，离子强电解质，因为总离子浓度高，离子间的力大，参加化学反应的有效浓度要比它的间的力大，参加化学反应的有效浓度要比它的实际浓度低，所以，活度浓度。实际浓度低，所以，活度浓度。 人的味觉只对人的味觉只对H+有感觉，所以，总酸度高，有感觉

6、，所以，总酸度高，口感不一定酸。口感不一定酸。 在一定的在一定的 pH下，人类对酸味的感受强度下，人类对酸味的感受强度不同。不同。如：如： 醋酸甲酸乳酸草酸盐酸醋酸甲酸乳酸草酸盐酸一般食品在一般食品在 pH3.0，难以适口；，难以适口； pH 5 为酸性食品；为酸性食品； pH 56 无酸味感觉。无酸味感觉。 挥发酸挥发酸指食品中易挥发的有机酸指食品中易挥发的有机酸，如甲，如甲酸、乙酸（醋酸）、丁酸等低碳链的直链脂肪酸、乙酸（醋酸）、丁酸等低碳链的直链脂肪酸，其大小可以通过蒸馏法分离，再借标准碱酸，其大小可以通过蒸馏法分离，再借标准碱液来滴定。液来滴定。 挥发酸挥发酸包含游离的和结合的两部分。

7、包含游离的和结合的两部分。 牛乳酸度牛乳酸度 外表酸度（固有酸度）外表酸度（固有酸度） 真实酸度（发酵酸度）真实酸度（发酵酸度）牛乳总酸牛乳总酸度由两部度由两部分组成分组成外表酸度外表酸度指刚挤出指刚挤出来的新鲜牛乳来的新鲜牛乳本身所具有的本身所具有的酸度。酸度。主要来源于主要来源于酪蛋白、白蛋白、酪蛋白、白蛋白、柠檬酸盐、磷酸盐等。柠檬酸盐、磷酸盐等。约占牛乳的约占牛乳的 0.150.18%(以乳酸计）以乳酸计）真实酸度真实酸度指牛乳在放置过程中，在乳指牛乳在放置过程中，在乳酸菌作用下使乳糖发酵产生了乳酸而升高酸菌作用下使乳糖发酵产生了乳酸而升高的那部分酸度。的那部分酸度。 不新鲜的牛乳总酸

8、量不新鲜的牛乳总酸量0.200.20牛乳酸度表示法牛乳酸度表示法 牛乳除按乳酸表示总酸外，还有一种表示法，牛乳除按乳酸表示总酸外，还有一种表示法， 用用T表示，滴定酸度简称表示，滴定酸度简称“酸度酸度”。牛乳牛乳T指滴定指滴定 100 mL牛乳样品，消耗牛乳样品，消耗0.1 mol/L NaOH 溶液的溶液的 mL数，或滴定数，或滴定10 mL 样品，样品，结果再乘结果再乘10。新鲜牛乳的酸度常为。新鲜牛乳的酸度常为16 18T。二、酸度测定的意义二、酸度测定的意义 有机酸影响食品的色、香、味及稳定性。有机酸影响食品的色、香、味及稳定性。 食品中有机酸的种类和含量是判断其质量好食品中有机酸的种

9、类和含量是判断其质量好坏的一个重要指标。坏的一个重要指标。 利用食品中有机酸的含量和糖含量之比，可利用食品中有机酸的含量和糖含量之比，可判断某些果蔬的成熟度。判断某些果蔬的成熟度。三、食品中有机酸的种类与分布三、食品中有机酸的种类与分布（一）食品中常见的有机酸种类（一）食品中常见的有机酸种类 见见207页页 表表11-1、11-2（二）食品中常见的有机酸含量（二）食品中常见的有机酸含量 见见208页页 表表11-311-5果蔬及其食品中常见的有机酸果蔬及其食品中常见的有机酸7 77 777( (三）三） 食品中酸的来源：食品中酸的来源：p207207 生产加工不当，贮藏、运输中污染生产加工不当

10、，贮藏、运输中污染 原料带入原料带入 加工过程中人为加入加工过程中人为加入 生产中有意让原料产酸生产中有意让原料产酸 各种添加剂带入各种添加剂带入第二节第二节 酸度的测定酸度的测定一、总酸度的测定（滴定法）一、总酸度的测定（滴定法）（一）原理（一）原理 用标准碱液滴定食品中的酸，中和生成盐，用标准碱液滴定食品中的酸，中和生成盐，用酚酞做指示剂。当滴定终点用酚酞做指示剂。当滴定终点 (pH=8.2，指示剂，指示剂显红色显红色)时，根据耗用的标准碱液的体积，计算出时，根据耗用的标准碱液的体积，计算出总酸的含量。总酸的含量。 反应式：反应式：RCOOH+NaOHRCOONa+H2O（二）适用范围（二

11、）适用范围 适用于各类浅色食品中的总酸含量的测定适用于各类浅色食品中的总酸含量的测定（三）试剂（三）试剂 0.1 molL NaOH标准溶液，注意：正确配标准溶液，注意：正确配制、准确标定、妥善保存。制、准确标定、妥善保存。 1%酚酞指示剂酚酞指示剂 称取酚酞称取酚酞1g溶解于溶解于100 ml 95%乙醇中。乙醇中。变色范围变色范围pH（8.210.0）。）。为何以为何以pH8.2为终点而不是为终点而不是pH7?为何以为何以pH8.2为终点而不是为终点而不是pH7? 因为食品中有机酸均为弱酸，用强碱滴定因为食品中有机酸均为弱酸，用强碱滴定生成强碱弱酸盐，显碱性。一般生成强碱弱酸盐，显碱性。一

12、般 pH8.2pH8.2左右，左右，故选酚酞为指示剂。此盐在水解时生成金属阳故选酚酞为指示剂。此盐在水解时生成金属阳离子，弱酸，离子，弱酸，OHOH。故显碱性。例：。故显碱性。例： CHCH3 3COONa+HCOONa+H2 2OCHOCH3 3COOH+NaCOOH+Na+ +OH+OH（四）（四） 操作方法操作方法 样液的制备样液的制备 固体样品、干鲜果蔬、蜜饯及罐头样品用粉固体样品、干鲜果蔬、蜜饯及罐头样品用粉碎机或高速组织捣碎机粉碎，混合均匀。取适碎机或高速组织捣碎机粉碎，混合均匀。取适量样品（约量样品（约 25 g，精确至，精确至 0.01 g）最后用碱量）最后用碱量 5 mL，最

13、好在，最好在10 15 mL，用，用 150 mL 水将水将样品移入样品移入250 mL容量瓶中，在容量瓶中，在75 80 水浴水浴上加热半小时，冷却，加水至刻度，用干燥滤上加热半小时，冷却，加水至刻度，用干燥滤纸过滤，弃去初液，收集滤液备用。纸过滤，弃去初液，收集滤液备用。 含含CO2 的饮料、酒类，要先除的饮料、酒类，要先除CO2。 调味品及不含调味品及不含CO2 的饮料、酒类，直接取样。的饮料、酒类，直接取样。 咖啡样品，粉碎，加乙醇，放置过夜。咖啡样品，粉碎，加乙醇，放置过夜。 固体饮料，加水研磨，定容，过滤固体饮料，加水研磨，定容，过滤。 测定测定 用移液管准确吸取滤液用移液管准确吸

14、取滤液 50 mL，注入三角，注入三角瓶中，加入酚酞指示剂瓶中，加入酚酞指示剂35滴。用滴。用 0.1 mol/L 的的 NaOH 溶液滴定至浅（微）红色，且溶液滴定至浅（微）红色，且 30 秒不秒不褪色。记录消耗的褪色。记录消耗的 NaOH 量。量。注：用碱式滴定管，先用水洗净，检查是否漏液，注：用碱式滴定管，先用水洗净，检查是否漏液，排气泡，再使用。排气泡，再使用。（五）计算（五）计算 P209 因食品中含有多种有机酸，总酸度的测定因食品中含有多种有机酸，总酸度的测定结果通常以样品中含量最多的那种酸表示。要在结果通常以样品中含量最多的那种酸表示。要在结果中注明以哪种酸计。结果中注明以哪种酸

15、计。 K K值的变化见公式下边说明。值的变化见公式下边说明。 c-标准标准NaOH溶液的浓度，溶液的浓度，mol/L； V-滴定消耗标准滴定消耗标准NaOH溶液的体积，溶液的体积，mL； m-样品质量或体积，样品质量或体积，g或或mL； V0 -样品稀释液总体积，样品稀释液总体积，mL； V1 -滴定时吸取的样液体积，滴定时吸取的样液体积，mL； K-换算为主要酸的系数，即换算为主要酸的系数，即1毫摩尔氢氧化钠相毫摩尔氢氧化钠相当于主要酸的克数。当于主要酸的克数。100cVk%10VVm）总酸度（六）讨论（六）讨论 1. 上述方法适用于各种浅色食品的总酸的测定。如上述方法适用于各种浅色食品的总

16、酸的测定。如果是深色样品可采取以下措施：果是深色样品可采取以下措施： 滴定前把滴定前把50 mL 样液（已放入三角瓶内的）再样液（已放入三角瓶内的）再用无用无CO2 水稀释一倍。水稀释一倍。 若还不行，在上述快到终点时，用小烧杯取出若还不行，在上述快到终点时，用小烧杯取出 2 3 mL 液体，再加入液体，再加入 20 mL 水稀释，观察。水稀释，观察。 如果样液颜色过深或浑浊，则宜用电位滴定法，如果样液颜色过深或浑浊，则宜用电位滴定法，经测经测pH值来定终点，一边滴定，一边电磁搅拌，值来定终点，一边滴定，一边电磁搅拌，到规定到规定 的的pH值时为终点。值时为终点。二、有效酸度（二、有效酸度（p

17、H）值的测定）值的测定在食品酸度测定中，有效酸度在食品酸度测定中，有效酸度(pH值值)的测定，的测定，往往比测定总酸度更有实际意义，更能说明问题，往往比测定总酸度更有实际意义，更能说明问题，表示食品介质的酸碱性。测表示食品介质的酸碱性。测H的活度的活度(近似认为是近似认为是浓度浓度)。pH值的测定方法：值的测定方法： 电位法电位法 ( pH计法计法 ) 比色法比色法 化学法化学法利用蔗糖的转化速度重氮基醋酸利用蔗糖的转化速度重氮基醋酸 乙酯或乙缩醛的分解速度来求乙酯或乙缩醛的分解速度来求pH值值。电位法电位法 (pH计法计法) 1.原理原理 以玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电以玻璃电极为指示电极

18、，饱和甘汞电极为参比电极，插入待测样液中，组成极为参比电极，插入待测样液中，组成原电池，该电池电动势的大小，与溶液原电池，该电池电动势的大小，与溶液pHpH值有直线关系。值有直线关系。E = EE = E- 0.0591 pH (25- 0.0591 pH (25）2.2.适用范围适用范围 本方法适用于各种饮料、果蔬及其制品，以本方法适用于各种饮料、果蔬及其制品，以及肉、蛋类等食品中及肉、蛋类等食品中pHpH值的测定。测定值可准值的测定。测定值可准确到确到0.01pH0.01pH单位。单位。3. 仪器仪器 酸度计酸度计 pHS- 29A 型型 （手提式）（手提式） pHS-2型（实验中使用的）

19、型（实验中使用的） pHS-25型（老型号）型（老型号） pHS-3C型（数字显示）型（数字显示） PhHJ90B型（盒式）型（盒式） 231型或型或221型玻璃电极型玻璃电极 玻璃电极头部是由特殊的敏感玻璃薄膜制成，是电玻璃电极头部是由特殊的敏感玻璃薄膜制成，是电极的主要部分，仅对氢离子有作用，里边为极的主要部分，仅对氢离子有作用，里边为Ag.AgCl泡在泡在0.1 mol/L 盐酸溶液中。盐酸溶液中。a) 231 型玻型玻+ 232 型甘汞电极，可测试型甘汞电极，可测试 pH 014。 221 型玻型玻+ 222型甘汞电极，可测试型甘汞电极，可测试 pH 19。b) 新电极或很久未用的干燥

20、电极，必须先浸在蒸馏水新电极或很久未用的干燥电极，必须先浸在蒸馏水 或或 0.1 mol/L的盐酸溶液中的盐酸溶液中24小时以上。小时以上。c) 每换一次样液，须将电极用蒸馏水清洗一次，擦干每换一次样液，须将电极用蒸馏水清洗一次，擦干 再用。再用。 232型型 或或 222型甘汞电极型甘汞电极 甘汞电极内装甘汞电极内装 Hg Hg2Cl2 KCl (饱）饱）（a)甘汞电极的两个橡胶小帽，使用时应摘下，甘汞电极的两个橡胶小帽，使用时应摘下，用完后还应戴上。用完后还应戴上。（b) 检查内部检查内部KCl是否能接近侧口，不能有气泡是否能接近侧口，不能有气泡存在。存在。（c）安装时要让内部）安装时要让

21、内部KCl液面高于外边被测样的液面高于外边被测样的液面。液面。 现有复合电极现有复合电极 将两个电极装在一起，有保护措施，将两个电极装在一起，有保护措施， E-201-0型型试剂：试剂： 缓冲溶液（标准）注意使用温度是缓冲溶液（标准）注意使用温度是20， (见实验讲义见实验讲义 p22） 自己配制要用优级纯试剂，也可购买配好的药自己配制要用优级纯试剂，也可购买配好的药品，溶解后使用。品，溶解后使用。（色谱纯、优级纯、分析纯、化学纯、工业纯）（色谱纯、优级纯、分析纯、化学纯、工业纯） 4. 操作方法操作方法(1) 样品制备：样品制备： 一般液体样品摇匀后可直接取样测定。一般液体样品摇匀后可直接取

22、样测定。 含含CO2的液体样品，除的液体样品，除CO2后再测，方法同总酸。后再测，方法同总酸。 果蔬样品：榨汁后，取汁液直接测果蔬样品：榨汁后，取汁液直接测pH 果蔬干制品：取适量样品加数倍的无果蔬干制品：取适量样品加数倍的无 CO2水，水，于水浴上加热于水浴上加热30分钟，捣碎，过滤，取滤液测分钟，捣碎，过滤，取滤液测定。定。 肉类制品：称取肉类制品：称取 10 克已除去油脂并捣碎克已除去油脂并捣碎的样品，加入的样品，加入 100 ml 无无CO2蒸馏水，浸蒸馏水，浸泡泡 15 分钟，随时摇动，取滤液测定。分钟，随时摇动，取滤液测定。 制备好的样品不宜久存，马上测定。制备好的样品不宜久存，马

23、上测定。（2） pHs-2型酸度计、型酸度计、 pHS-3C型的使用型的使用 三、三、 挥发酸的测定挥发酸的测定 食品中的挥发酸主要是低碳链的脂肪酸，主要食品中的挥发酸主要是低碳链的脂肪酸，主要是醋酸和痕量的甲酸、丁酸等。不包括乳酸、琥珀是醋酸和痕量的甲酸、丁酸等。不包括乳酸、琥珀酸、山梨酸及酸、山梨酸及CO2、SO2等。等。 正常生产的食品中，其挥发酸的含量较稳定，正常生产的食品中，其挥发酸的含量较稳定，若生产中使用了不合格的原料或违反正常的工艺操若生产中使用了不合格的原料或违反正常的工艺操作，则会由于糖的发酵，而使挥发酸含量增加，降作，则会由于糖的发酵，而使挥发酸含量增加，降低食品的品质。

24、因此挥发酸的含量是某些食品的一低食品的品质。因此挥发酸的含量是某些食品的一项质量控制指标项质量控制指标。1.直接滴定法直接滴定法通过水蒸气蒸馏或溶剂萃取，把挥通过水蒸气蒸馏或溶剂萃取，把挥发酸分离出来，然后用标准碱液滴定。发酸分离出来，然后用标准碱液滴定。特点：操作方便，较常用于挥发酸含量较高的样品。特点：操作方便，较常用于挥发酸含量较高的样品。2. 间接法测定间接法测定将挥发酸蒸发排除后，用标准碱滴将挥发酸蒸发排除后，用标准碱滴定不挥发酸，最后从总酸中减去不挥发酸，即得定不挥发酸，最后从总酸中减去不挥发酸，即得挥发酸含量。挥发酸含量。 总酸总酸 = 挥发酸挥发酸 + 不挥发酸不挥发酸特点：适

25、用于样品中挥发酸含量较少，或在蒸馏操特点：适用于样品中挥发酸含量较少，或在蒸馏操作的过程中蒸馏液有所损失或被污染。作的过程中蒸馏液有所损失或被污染。水蒸汽蒸馏法测总挥发酸水蒸汽蒸馏法测总挥发酸(一）原理一）原理 样品经适当的处理后，加适量磷酸使结合态样品经适当的处理后，加适量磷酸使结合态挥发酸游离出来，用水蒸气蒸馏分离出总挥发酸，挥发酸游离出来，用水蒸气蒸馏分离出总挥发酸，经冷却、收集后，以酚酞做指示剂，用标准碱液经冷却、收集后，以酚酞做指示剂，用标准碱液滴定至微红色，滴定至微红色，30 秒秒 不褪色为终点，根据标准不褪色为终点，根据标准碱的消耗量计算出样品总挥发酸含量。碱的消耗量计算出样品总

26、挥发酸含量。 反应式同反应式同“总酸度的测定总酸度的测定”。 适用范围：适用于各类饮料、果蔬及其制品、适用范围：适用于各类饮料、果蔬及其制品、发酵制品、酒等中间挥发酸含量的测定。发酵制品、酒等中间挥发酸含量的测定。 试剂试剂 0.1molLNaOH标准溶液，配法同前。标准溶液，配法同前。 1%酚酞乙醇溶液，配法同前。酚酞乙醇溶液，配法同前。 10%磷酸溶液，称取磷酸溶液，称取10.0g磷酸，用少许无磷酸，用少许无CO2水溶解，并稀释至水溶解，并稀释至100ml。（二）（二） 仪器仪器 水蒸气蒸馏装置水蒸气蒸馏装置 (P 214 图图11-1）见下页。）见下页。 电磁搅拌器电磁搅拌器 除含除含C

27、O2样品中的样品中的CO2。（三）（三） 样品处理方法样品处理方法 一般果蔬及饮料可直接取样。一般果蔬及饮料可直接取样。 含含CO2的饮料、发酵酒类，须排除的饮料、发酵酒类，须排除CO2 固体样品（如干鲜果蔬及其制品）及冷冻、固体样品（如干鲜果蔬及其制品）及冷冻、 粘稠等制品，取可食部分，加定量水，捣碎粘稠等制品，取可食部分，加定量水，捣碎机机 粉碎。粉碎。（四）（四） 测定测定 样品蒸馏样品蒸馏 取样品取样品 2 3 g 或或 25 ml 移到蒸馏瓶中，加移到蒸馏瓶中，加 50 ml无无 CO2的水和的水和 1 ml 10 H3PO4溶液，连接水蒸汽溶液，连接水蒸汽蒸馏装置打开冷凝水，加热蒸

28、馏至馏出液约蒸馏装置打开冷凝水，加热蒸馏至馏出液约 300 ml为止，于相同条件下作一空白试验（烧瓶内加为止，于相同条件下作一空白试验（烧瓶内加 50 ml 水代替样品）。水代替样品）。 滴定滴定 将馏出液加热至将馏出液加热至 60 65 ，加入，加入3滴酚酞指示滴酚酞指示剂。用剂。用 0.1 molL 的的NaOH滴定至微红滴定至微红30秒不褪秒不褪色，记录数据。色，记录数据。（五）（五） 结果计算结果计算 食品中总挥发酸通常以醋酸的重量百分数表示。食品中总挥发酸通常以醋酸的重量百分数表示。 计算如下：计算如下：X % = (V1-V2) C0.06 100m式中：式中：X以醋酸计，以醋酸计

29、，g100 g (ml) 样品。样品。 N标准碱液的浓度标准碱液的浓度 ，molL。 V1样品蒸馏液滴定时所消耗的样品蒸馏液滴定时所消耗的 0.01 molL NaOH溶液的溶液的ml数。数。 V2对空白蒸馏液滴定时消耗的标准对空白蒸馏液滴定时消耗的标准 碱的量。碱的量。 m 样品质量或体积，样品质量或体积，g 或或 ml。 0.06 换算为醋酸的系数。换算为醋酸的系数。（六）说明（六）说明 样品中挥发酸如采用直接蒸馏法比较困难，样品中挥发酸如采用直接蒸馏法比较困难，因挥发酸与水构成有一定百分比的混溶体，并因挥发酸与水构成有一定百分比的混溶体，并有固定的沸点。在一定沸点下，蒸汽中的酸与有固定的

30、沸点。在一定沸点下，蒸汽中的酸与溶液中的酸之间有一个平衡关系，（即蒸发系溶液中的酸之间有一个平衡关系，（即蒸发系数数x),在整个平衡时间内在整个平衡时间内x不变，故一般不采用直不变，故一般不采用直接蒸馏法。而水蒸气蒸馏中，挥发酸和水蒸气接蒸馏法。而水蒸气蒸馏中，挥发酸和水蒸气分压成比例地自溶液中一起蒸馏出来，加速挥分压成比例地自溶液中一起蒸馏出来，加速挥发酸的蒸馏速度。发酸的蒸馏速度。 在蒸馏前应先将水蒸气发生器中的水煮沸在蒸馏前应先将水蒸气发生器中的水煮沸10分钟，或在其中加入分钟，或在其中加入2滴酚酞指示剂并加滴酚酞指示剂并加NaOH至呈浅红色，以排除其中的至呈浅红色，以排除其中的CO2,

31、并用蒸汽冲洗并用蒸汽冲洗整个装置。整个装置。 溶液中总挥发酸包括溶液中总挥发酸包括游离态游离态与与结合态结合态2种。种。而而结合态结合态挥发酸又不容易挥发出来，所以要加少挥发酸又不容易挥发出来，所以要加少许磷酸，使许磷酸，使结合态结合态挥发酸挥发出来。挥发酸挥发出来。滴定前，将蒸馏液加热至滴定前，将蒸馏液加热至 60 65 ，为了使终，为了使终点明显，加速滴定反应，缩短滴定时间，减少点明显，加速滴定反应，缩短滴定时间，减少溶液与空气接触的机会。以提高测定精度。溶液与空气接触的机会。以提高测定精度。若样品中含若样品中含 SO2 还要排除它对测定的干扰。还要排除它对测定的干扰。测定食品中各种挥发酸

32、的含量，还可使用纸色测定食品中各种挥发酸的含量，还可使用纸色谱法和气相色谱法。谱法和气相色谱法。 在整个蒸馏装置中，蒸馏瓶内液面要保持恒定，在整个蒸馏装置中，蒸馏瓶内液面要保持恒定，不然会影响测定结果，另外，整个装置连接要好，不然会影响测定结果，另外，整个装置连接要好，防止挥发酸泄露。防止挥发酸泄露。第三节第三节 食品中有机酸的分离与定量食品中有机酸的分离与定量常用方法：气相色谱法、离子交换色谱法、高效常用方法：气相色谱法、离子交换色谱法、高效液相色谱法。液相色谱法。三、三、 气相色谱法（气相色谱法（GC法）法） Gas Chromatography 流动相流动相气体（由载气带着物料气体）气体

33、（由载气带着物料气体） 一般用高压气瓶供给（一般用高压气瓶供给（N2、He ) 固定相固定相 固体固体 固体吸附剂固体吸附剂 液体液体担体担体 + 固定液固定液 1906年，俄国植物学家年，俄国植物学家茨威特分离植物叶绿体中茨威特分离植物叶绿体中色素而得名，玻璃管中装色素而得名，玻璃管中装CaCO3,石油醚溶解植物石油醚溶解植物叶绿体倒入管内，再用石叶绿体倒入管内，再用石油醚做淋洗剂，结果，柱油醚做淋洗剂，结果，柱子中被分成几个不同颜色子中被分成几个不同颜色的谱带。的谱带。 气相色谱流程示意图：气相色谱流程示意图：针形阀针形阀载气载气转子流量计转子流量计汽化室汽化室进样器进样器层析柱层析柱检测

34、器检测器微电流放大器微电流放大器记录仪记录仪电脑电脑载气载气净化器净化器流量计流量计色谱柱色谱柱柱箱柱箱汽化室汽化室检测器检测器记录器记录器进样进样放空放空载气入口接色谱柱散热片加热块汽化室示意图 tRt0从记录仪得到的色谱图从记录仪得到的色谱图保留时间保留时间从进样到出现组分浓度极大点从进样到出现组分浓度极大点 （色谱峰最高点）的时间（色谱峰最高点）的时间tR 在一定固定相，一定操作条件下，各组分的在一定固定相，一定操作条件下，各组分的 t 值不一样。同一组分有同样的值不一样。同一组分有同样的 t 值，可用来作定性值，可用来作定性分析。此外，峰高（分析。此外，峰高（h）、峰面积（）、峰面积（

35、A）可用作定）可用作定量分析。量分析。A = h 半宽度（峰高一半处色谱峰宽度）半宽度（峰高一半处色谱峰宽度） A=（底（底高）高）2 A 值值 = 积分仪求得总面积的积分仪求得总面积的 94。 计算计算 （一组分峰面积（一组分峰面积94） （ 总峰面积总峰面积94） 以标准曲线来计算含量，以含量为横坐标，峰以标准曲线来计算含量，以含量为横坐标，峰面积为纵坐标。面积为纵坐标。 某一组分比例某一组分比例 =层析柱和检测器层析柱和检测器 1. 检测器有多种检测器有多种 热导池检测器（热导池检测器（TCD） 在气相色谱中应用最早、最广泛的检测器。灵在气相色谱中应用最早、最广泛的检测器。灵敏度为敏度为

36、100 ppm。 原理：不同组分和载气有不同的导热系数。当通原理：不同组分和载气有不同的导热系数。当通过热导池的气体组成及浓度发生变化时，可引起过热导池的气体组成及浓度发生变化时，可引起热敏元件上温度的变化，由此而产生阻值变化，热敏元件上温度的变化，由此而产生阻值变化，可衡量组分的含量。可衡量组分的含量。 氢火焰离子化检测器（氢火焰离子化检测器（FID） 灵敏度比热导池检测器高灵敏度比热导池检测器高1000倍，可在室温至倍，可在室温至300范围内使用。范围内使用。 原理：以原理：以H2（燃烧气）和空气（助燃气）的火（燃烧气）和空气（助燃气）的火焰为能源，在氢火焰附近装置两个电极（收集焰为能源，

37、在氢火焰附近装置两个电极（收集极、发射极），两个电极之间外加极、发射极），两个电极之间外加100350V电电压，当样品组分从色谱柱馏出后，由载气携带，压，当样品组分从色谱柱馏出后，由载气携带，与与H2汇合，从喷嘴流出，与空气相遇，经引燃汇合，从喷嘴流出，与空气相遇，经引燃就燃烧。在氢火焰高温能源作用下，样品组分、就燃烧。在氢火焰高温能源作用下，样品组分、电离成正、负离子，电离成正、负离子，在直流电场的作用下，离子向电极移动产生电流，在直流电场的作用下，离子向电极移动产生电流，这微小的电流经放大器放大后输入记录器，得出色谱这微小的电流经放大器放大后输入记录器，得出色谱峰信号。氢焰检测器（与单位时

38、间内进入火焰组分的峰信号。氢焰检测器（与单位时间内进入火焰组分的质量成正比，是典型的质量型检测器）对大多数有质量成正比，是典型的质量型检测器）对大多数有机物都很灵敏。但对在氢火焰中不电离的或电离很少机物都很灵敏。但对在氢火焰中不电离的或电离很少的物质如的物质如N2、NO、CO、CO2、SO2、NH3、H2O、SiCl4、SiF4、HCN等，及无机物不能用这种检测器。等，及无机物不能用这种检测器。 电子捕获鉴定器（电子捕获鉴定器（ECD） 是一种具有选择性和灵敏度很高的色谱检测器。是一种具有选择性和灵敏度很高的色谱检测器。 放射源放射源以同位素以同位素Ni63和和3H为为射线放射源，将射线放射源

39、，将载气电离产生正离子和慢速低能量的电子，他们在载气电离产生正离子和慢速低能量的电子，他们在恒定的电场作用下向极性相反的电极移动形成恒定恒定的电场作用下向极性相反的电极移动形成恒定的电流的电流基始电流。基始电流。 当具有电负性的组分进入检测器时，它捕获了当具有电负性的组分进入检测器时，它捕获了电子，变成带负电离子，并与载气产生的正离子结电子，变成带负电离子，并与载气产生的正离子结合成中性化合物，被载气带出检测器，结果使基始合成中性化合物，被载气带出检测器，结果使基始电流降低产生信号，形成峰值。电流降低产生信号，形成峰值。这种检测器是对具有电负性的物质（如含有这种检测器是对具有电负性的物质（如含

40、有卤素、卤素、S、P、N的物质）产生信号，且电负性越的物质）产生信号，且电负性越强，产生的灵敏度越高，有机氯农药含有卤素强，产生的灵敏度越高，有机氯农药含有卤素 Cl，所以非常适合。也属浓度型检测器。，所以非常适合。也属浓度型检测器。另外还有火焰光度检测器（另外还有火焰光度检测器（FPD）测含）测含S、P化合物，在氢火焰中燃烧测其中发光情况。化合物，在氢火焰中燃烧测其中发光情况。2. 层析柱（色谱柱）层析柱（色谱柱） 直径直径 2 3 mm，长，长 1 2 m，特殊的达十几米，玻璃、尼，特殊的达十几米，玻璃、尼龙、金属龙、金属有机氯在高温下易挂壁，产生催化分解和吸附现有机氯在高温下易挂壁，产生

41、催化分解和吸附现象，干扰分析。象，干扰分析。 气液色谱固定相：担体气液色谱固定相：担体 + 固定液。固定液。 要求：担体要求：担体 化学惰性，与溶质之间不起任何化学作用。买化学惰性，与溶质之间不起任何化学作用。买来后往往要自己处理，来后往往要自己处理， 经酸洗水洗至中性，干燥后在硅烷化经酸洗水洗至中性，干燥后在硅烷化处理。处理。 固定液固定液 常用常用OV系列，系列，可在可在350350下使用，热稳定性下使用，热稳定性好等，都属硅酮类含甲基、氟等。要让固定液很好的涂在担好等，都属硅酮类含甲基、氟等。要让固定液很好的涂在担体上。体上。四、高效液相色谱法（四、高效液相色谱法（HPLC)（高速液相色谱法、（高速液相色谱法、 高压液相色谱法）高压液相色谱法）由经典的液相层析法发展来的，始于由经典的液相层析法发展来的，始于19061906年，年，比气相色谱分析法早四十多年。但一度停滞，因其比气相色谱分析法早四十多年。但一度停滞，因其流动相靠自身的重力流过色谱柱，效率低，分析周流动相靠自身的重力流过色谱柱，效率低，分析周期长，缺乏自动灵敏的检测装置。期长，缺乏自动灵敏的检测装置。7070年代后，又吸年代后，又吸取气相经验迅速发展。取气相经验迅速发展。 高效液相色谱的特点：高效液相色谱的特点： 应用范围广应用范围广 只要能制成只要能制成 溶液