现代分离分析方法

1、现代分离分析方法一、计算化学位移（见信纸）二、术语解释及回答1.荧光（磷光）及荧光光谱的概念，以及反映了什么意义？分子荧光光谱Fluorescence spectra 分子磷光光谱phosphorescence spectra 光致发光photoluminescence（注：荧光及磷光又称为光致发光分析，就是这个英文）荧光（磷光）激发光谱和发射光谱：（下册P240）荧光和磷光光谱均属于光致发光，所以都涉及到两种辐射跃迁过程，即激发过程和发射过程。因而也都具有两种特征光谱，即激发光谱和发射光谱。激发光谱：通过测量荧光（或磷光）体的发光通量（即强度）随激发光波长的变化而获得的光谱，称为激发光谱。它

2、的测定方法是，通过扫描激发单色器，使不同波长的入射光照射激发荧光（磷光）体，发出的荧光（磷光）通过固定波长的发射单色器而照射到检测器上，检测器荧光（磷光）强度，最后通过记录仪记录光强度对激发光波长的关系曲线，即为激发光谱。发射光谱：通过测量荧光（或磷光）体的发光通量（强度）随发射光波长的变化而获得的光谱，成为荧光（磷光）发射光谱。其测定方法是，固定激光发光的波长，扫描发射光的波长，记录发射光强度对发射光波长的关系曲线，即为发射光谱。并且磷光发射波长比荧光长。* 荧光光谱：指的是物质吸收电磁辐射后受到激发，受激发原子或分子在去激发过程中再发射波长与激发辐射波长相同或不同的辐射。激发态-基态能量传

3、递途径 荧光发射S1S0：由第一激发单重态的最低振动能级回到基态各振动能级间的跃迁所产生的辐射，10-7-10-9 能量比分子吸收的能量小，波长长磷光发射：T1S0由第一激发三重态的最低振动能级回到基态各振动能级间的跃迁所产生的辐射 ，能量比荧光发射的能量小，波长长，发光速度慢 10-4-100s 禁阻跃迁荧光激发光谱：让不同波长的激发光激发荧光物质使之发生荧光，而让荧光以固定的发射波长照射到检测器上，然后以激发光波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标所绘制的图，即为荧光激发光谱。荧光体的发光强度随激发光波长的变化。荧光发射光谱的形状与激发光的波长无关 。荧光发射光谱：使激发光的波长和强度保持不变，

4、而让荧光物质所发出的荧光通过发射单色器照射于检测器上，亦即进行扫描，以荧光波长为横坐标，以荧光强度为纵坐标作图，即为荧光光谱，又称荧光发射光谱。荧光体的发光强度随发射光波长的变化。2.荧光光谱的应用（内源荧光和荧光探针）（除了讲的这些别的见下册书P247）荧光探针Fluorescent probe内源荧光Endogenous fluorescence内源荧光：物质本身可以吸收紫外光并发射出荧光，我们把这种荧光称为其内源荧光。应用：内源荧光法用于鉴别细菌表征的方法和原理;详细综述了近年来该方法用于食品分析、临床检验、环境监测和防生物恐怖等领域的细菌鉴别、代谢及追踪细菌源的现状和研究进展,并对其应

5、用前景作了展望.荧光探针:在紫外-可见-近红外区有特征荧光，并且其荧光性质（激发和发射波长、强度、寿命、偏振等）可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子. 应用：最常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体，亦可用于表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等微环境特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移。用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。荧光光谱应用领域：特殊应用领域、有机大分子、生物大分子、精细化工（荧光染料颜料Fluorescent dyes and pibments ）、功能材料。 并

6、且可以用于痕量分析、无机化合物分析、有机化合物分析、荧光探针等。（书下册P247）3. 一维核磁谱与二维核磁谱（基本种类）（下册P168 第一页）核磁共振：Nuclear Magnetic Resonance二维相关谱 ：COSY 2D correlation spectroscopy一维核磁谱：One-dimensional NMR spectroscopy一维核磁谱：在外磁场的作用下，核自旋磁矩与磁场相互作用而裂分为能量不同的核磁能级，吸收射频辐射后产生能级跃迁，产生核磁共振波谱（如果问核磁共振就只答这个就行）。将核磁共振一维谱中重叠在一个频率坐标上的信号分别在两个独立的坐标轴(化学位移

7、耦合常数等)上展开，成为了一维核磁共振谱。一维核磁共振谱分为核磁共振碳谱和核磁共振氢谱。核磁共振氢谱原理：氢原子具有磁性，如电磁波照射氢原子核，它能通过共振吸收电磁波能量，发生跃迁。用核磁共振仪可以记录到有关信号，处在不同环境中的氢原子因产生共振时吸收电磁波的频率不同，在图谱上出现的位置也不同，各种氢原子的这种差异被称为化学位移。利用化学位移，峰面积和积分值以及耦合常数等信息，进而推测其在碳骨架上的位置。并且主要利用H1来进行。核磁共振氢谱原理：大多数有机分子骨架由碳原子组成，故用C核磁共振研究有机分子的结构显然是十分理想的。而在C的同位素中，只有13C有自旋现象，存在核磁共振吸收，其自旋量子

8、数为1/2。与核磁共振氢谱的原理相同，而主要的区别在于C谱化学位移值可以较大，同时碳谱可以直接反应结构信息，对常见的官能团可以直接解析出来。二维核磁谱：二维核磁共振波谱将一维谱在两个独立的频率域展开（分为同核相关谱、异核相关谱），消除了谱带的重叠，同时能提供丰富的有机化合物结构和构型的信息。二维核磁共振波谱是两个独立频率和变量的函数，通过对两个时域函数FID进行二维傅里叶变换得到。通常二维谱的脉冲序列包括四个区间：预备期、发展期、混合期和检测期。二维核磁共振波谱又可以分为J-分解谱（分为同核J-分解谱和异核J-分解谱）、化学位移相关谱（分为同核相关谱和异核相关谱）、NOE相关谱、质子全相关谱等

9、。4.二维同核相关谱上对角线正常峰、交叉峰含义。二维同核相关谱 COSY 2D correlation spectroscopy与J-分解谱相比，应用比较多的是化学位移相关谱，它通过J-耦合来简历不同和的化学位移之间的联系。根据相互作用的核为同核或异核，分为同核相关谱和异核相关谱。（有一张打印的指上有一个图 关于对角峰，自相关峰和交叉峰的解释）通过同核耦合，建立同种共振频率的核间连接图，就得到同核化学位移相关谱。其主要对象为1H-1H体系，简称COSY谱。COSY谱是关于主对角线完全对称的二维谱，称为对角峰（如图）（即正常峰）。对角峰并不比普通一维谱所给的信息多，临近主对角线的属于同核的多重态

10、之间的交叉峰称为相关峰。COSY谱中两种不同核之间的交叉峰称为交叉相关峰，交叉相关峰的出现说明它所对应的对角峰所属的核之间有耦合。* 在2维同核COSY谱中，对角峰指在两次采样脉冲t1、t2期间产生的吸收峰的频率1和2相等，仅可提供简单的1维H或C谱。在对角线两侧的是交叉峰（相关峰），表现出相邻质子或碳原子之间的相关性（谁和谁挨着），从而确定结构。5.DEPT碳谱及重要性（P141）DEPT(Distortionless Ennancementby polariza- tion Transfer)INEPT(Insensitive Nuclei Enhanced by Polarization

11、 Transfer)DEPT：即无失真的极化转移增强技术,是一种多脉冲程序,它对(13)C谱的研究有十分重要的特点。对INEPT技术的改进，不同的设置将使CH、CH2、CH3显示不同的信号强度与符号。1H、13C通道的脉冲信号。分别得到（这个可以画我那个图）CH、CH2、CH3的正峰，季碳不出峰。=45 均为正峰;=90仅CH为正峰;=135 CH2出负峰。适当组合分别得到CH、CH2、CH3的正峰，季碳不出峰。各种13C-NMR谱中均使用宽带去耦技术。INEPT是一种通过极化转移方法使非灵敏的信号增强的实验方法，它不仅可使13C核的灵敏度增强4倍，而且可进行谱编辑，即把季碳，CH，CH2，和

12、CH3基团区分开来广泛用于结构分析。6.质谱中质量分析器及其种类（离子阱、时间飞行器、四级杆）（上册P29或利润卿P310）7.电喷雾电离质谱与软电离方法（P38）电喷雾电离质谱（electrospray ionization,ESI-MS）通过测量样品组份的质量电荷比（M/Z），检测样品组份的分子量，对多肽、蛋白质和寡核苷酸等物质定性、定量并能与高效液相色谱仪联用对混合物进行分析。ESI-MS是一种软的电离方式，在一定的电压下它不会使样品分子产生碎片，因此对于小分子的样品ESI谱图可确定样品的组成成份有几种。电喷雾质谱(ESI-MS)软电离质谱技术。ESI技术是一种利用强静电场的电离技术,被

13、分析的样品溶液流过加以数kV高电压的毛细管出口时,迅速形成雾状气溶胶并产生高电荷液滴。随着高速氮气流的逆向引入,液滴中的溶剂不断挥发,使得液滴表面的电荷密度增加,产生强烈的库仑排斥力而碎裂,样品最终从液滴中溅射出来,形成单电荷或多电荷的离子。 由于ESI在离子化过程中不涉及任何高能量的激发过程,对样品的破坏程度很小,因此在研究化学和生命体系中以非共价作用结合的复合物和超分子聚集体方面具有极大潜力。软电离方法：P38大气压化学电离源，P40大气压光致电离源，P40激光解析源如*（P40）大气压光致电离源（atmospheric pressure chemical ionization,APCI）

14、APCI源是在气流的作用下，使液体雾化，然后使用外加放电的模式，使微粒带电。适合做小分子且极性较小的化合物，并且其离子化歧视效应较低。APCI-MS是指质谱所带的离子源为大气压化学电离源。8.制备色谱与制备高效液相色谱、高效薄层色谱和快速柱色谱（FCC）（小书P94P115）制备色谱（Preparative chromatography）制备高效液相色谱（Preparative high performance liquid chromatography）快速柱色谱 (flash chromatography)制备色谱（Preparative chromatography）是指采用色谱技术制备

15、纯物质，即分离、收集一种或多种色谱纯物质。制备薄层色谱（Preparative thin layer chromatography,PTLC）薄层色谱（TLC）亦称薄板色谱，是一种快速、简单高效的分离制备发，最早是将硅胶加入一定量的石膏制成规格化的商品，为了方便裁剪和携带，目前商品化的薄层将吸附剂涂在聚氨酯膜及铅箔上。而后的高效薄层色谱，更具有分离快速、分离效果好和检测灵敏度高的特点。而制备性薄层色谱（PTLC）与鉴定用TLC的操作是相似的，不同点是：样品溶液浓度为5%10%；板厚度增加到0.51cm；一般分离样品量在1015mg；样品的点样可点成一条直线也可以点成虚线，单若采用浓缩区的薄层制

16、备板。点样成型效果更好；色谱带位置确定最好采用物理方法；样品的获得可按色带刮下带有样品的吸附剂分别置于小层析柱洗脱。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。（制备HPLC 0.5-10g/半制备100-200mg/分析1-2mg/提高容量 损失分离度与速度 达负荷极限或超载 循环或再分离（不断富集） 柱效高/无直径损失 应用范围广 易从流动相

17、中离析 设备尺寸小 非破坏性检测方式 有效应用于天然产物分离 40-60微米全多孔填料/比表面 示差折光检测 不需灵敏 ）高效薄层色谱采用粒度分布很窄的微粒硅剂（5-10um）制备高效薄层板，用程序多级展开或园形展开技术使薄层色谱的灵敏度和分辨率大大提高。（1）提高分辨效率：分辨率与吸附剂微粒半径的平方成反比。100um的吸附剂制成的薄层，理论增板数为200左右，而小于20um硅胶制板其增板数可增至数千至上万，而5-10um硅胶板的增板数还要更高。（2）缩短分析时间：展开速度与吸附剂颗粒半径成正比，故颗粒越小，展开速度越慢，但因分离效率提高了之后可以大大缩短展开距离。（3）增加检出灵敏度：采用

18、程序多级展开技术，可以克服因吸附剂颗粒小造成的拖尾现象，并可使圆或椭圆斑点集中在一条线，使斑点的单位面积中样品浓度增加，从而提高检出灵敏度。要求：点样体积小于0.1ul，原点直径小于1.0mm，甚至0.1mm快速柱色谱（FCC）flash chromatography：快速柱色谱即加压柱色谱技术。这种柱色谱分离效率高，可选用颗粒很细的吸附剂，例如硅胶（60nm）。这种柱色谱常用干法装柱，一般高度为1820nm并在柱顶再加0.51cm石英砂，然后加入洗脱溶剂，加压赶去硅胶内气泡。用尽量少的溶剂溶解样品，加至柱顶，加压压入硅胶层。对难溶于洗脱剂的样品可拌入少量硅胶，干燥后再装柱，硅胶上面再覆盖石英

19、砂。选择的洗脱剂在硅胶曾上对难以分离的化合物，移动速度为2cm/min压力为0.030.04MPa。9.蒽醌组分的分离分析：大黄中蒽醌类的提取分离原理：大黄中的蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于乙醚而被提取出来。再利用各种蒽醌类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法分离得到各种蒽醌类化合物。梯度萃取法分离得到各种蒽醌类化合物。姜酚组分的分离：本发明公开了一种从生姜中分离6-姜酚的方法，其工艺经过制备姜油树脂、硅胶柱色谱分离、制备粗姜酚、液相色谱分离、去除溶剂、制备6-姜酚纯品等步骤，使得本发明分离提纯得到的6-姜酚纯度高，同时本发明操作简便、工艺简单且分离效率高。三、说明主要波谱特征（见用红

20、色笔标识的打印纸）1.o,p,m-硝基苯胺（手算及分析用纸上的，这里是chemdraw的结果） 2.水杨酸（手算及分析用纸上的，这里是chemdraw的结果） 3.薄荷醇和香芹酮（手算及分析用纸上的，这里是chemdraw的结果）a薄荷醇 b香芹酮 碳谱4.烷基聚氧乙烯醚和烷基酚聚氧乙烯醚（见蓝色笔标记纸 以及文献）先答纸上面的图和断裂方式再答文献5.含磺酸基的多偶氮染料（见蓝色笔标记的纸）6.丙烯酸酯与苯乙烯共聚物（见蓝色笔标记纸）四、论述题1论述各种分析方法的比较，联系，应用。分析方法原理定量分析分子量信息官能团信息结构信息应用范围红外光谱（IR）利用物质对的分子对红外辐射的吸收，并由其振

21、动或转动运动引起偶极矩的经变化，产生分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁，得到分子振动能级和转动能级变化产生的振动-转动光谱，称为红外光谱。红外光谱吸收谱带的强度与分子组成或官能团的含量有关，可用于定量分析和纯度鉴定。可给出分子量信息。红外光谱在横轴的位置、谱峰的形状以及谱峰的强度反映了分子结构上的特点，可用来鉴定未知物的结构组成并确定官能团。红外光谱可以研究分子的结构和化学键，利用红外光谱可以测定分子的键长和键角，并由此推测分子的立体构型。同时红外光谱有时也可提供未知物的细微结构. 如直链 、支链，链长、结构异构及官能团间的关系等信息红外光谱在鉴定脂肪族、芳香族化合物中应用广泛，同时在天然

22、物以及生物高分子中也有很好的应用。同时也可用于杂环以及立体异构的结构鉴定。紫外光谱（UV）利用溶液中分子对紫外光和可见光的吸收，引起分子电子能级从基态到激发态的跃迁，产生紫外-可见吸收光谱。可根据朗伯-比尔定律及最大吸收波长强度变化可进行定量分析。可给出分子量信息。可以给出官能团信息。但虽然可以反映分子结构中发色团和助色团的特性信息 ,但特征性差 ,且不能完全反映整个分子的特性。紫外-可见吸收光谱的波长范围是100800nm，所有的有机化合物均在这一区域产生吸收带，可根据最大吸收波长可进行化合物结构分析。而紫外波谱主要用于确定化合物的类型及共轭情况. 如是否是不饱和化合物， 是否具有芳香环结构

23、， 是否具有共轭体系等化合物的骨架信息。主要用于芳香族化合物，杂环化合物的结构解析，也可以用于天然物，生物高分子以及用于立体异构的鉴定。核磁共振谱（NMR）在外磁场的作用下，核自旋磁矩与磁场相互作用而裂分为能量不同的核磁能级，吸收射频辐射后产生能级跃迁，产生核磁共振波谱。核磁共振波谱包括1H核磁共振波谱和13C核磁共振波谱等。可根据峰的面积进行定量分析，但一般用于定性分析。可给出分子量信息。核磁共振氢谱在综合光谱解析中主要提供化合物中有关质子的信息。 (1)质子的类型:质子所处的化学环境说明化合物具有哪些种类的含氢官能团.(2)氢分布:由峰的强度(面积)可说明各种类型氢的相对数目。(3)核间关

24、系:峰的数目标志分子中磁不等性质子的种类,共振信号的数目表明分子中不同类型质子的数量,这里应注意是否存在信号的重叠;峰的裂分数可说明相邻碳原子上质子数;偶合常数可确定化合物构型。氢核间的耦合关系与氢核所处的化学环境可提供化合物的二级结构信息,如连结方式、位置、距离;结构异构与立体异构(几何异构、光学异构、构象)等。核磁共振碳谱 (13C NMR)与氢谱类似 ,也可提供化合物中碳核的类型、碳的分布、碳核间的关系三方面结构信息.主要提供化合物的碳“骨架”信息。碳谱的各条谱线一般都有它的惟一性 ,能够迅速、正确地否定所拟定的错误结构式. 碳谱对立体异构体比较灵敏 ,能给出细微结构信息。是有机化合物鉴

25、定和解决复杂结构问题最重要的方法。广泛用于脂肪族，芳香族，杂环，天然物，生物高分子，以及立体异构的鉴定。质谱分析（MS）通过一定手段将被测样品分子产生气态离子，然后按质荷比（m/z）对这些离子进行分离和检测的一种分析方法。质谱法是高灵敏度的定量分析方法之一。质谱是确定分子量的主要手段。根据碎片离子峰的断裂可以得到官能团相关信息。质谱提供有关分子的元素组成、由裂解碎片推导结构单元等结构信息. 质谱图上的碎片峰可以提供一级结构信息。并可以在综合光谱解析后 ,验证所推测的未知物结构的正确性。在确定脂肪族、芳香族、杂环、天然物、生物高分子、立体异构上有广泛应用。*后面都是浮云紫外光谱在波谱综合解析中的

26、作用紫外吸收光谱主要用于确定化合物的类型及共轭情况. 如是否是不饱和化合物 ? 是否具有芳香环结构 ? 是否具有共轭体系等化合物的骨架信息. 这里要注意的是紫外吸收光谱虽然可以反映分子结构中发色团和助色团的特性信息 ,但特征性差 ,且不能完全反映整个分子的特性. 它只能作为结构鉴定的一种辅助工具 ,主要用于定量分析红外光谱在波谱综合解析中的作用红外吸收光谱主要是通过测定分子中化学键的振动频率来确定官能团 ,提供未知物具有哪些官能团 、化合物的类别 (芳香族、脂肪族、饱和、不饱和) 等. 红外光谱有时也可提供未知物的细微结构. 如直链 、支链，链长、结构异构及官能团间的关系等信息 ,但它在综合光

27、谱解析中居次要地位质谱在波谱综合解析中的作用质谱主要提供有关分子的分子量、元素组成、由裂解碎片推导结构单元等结构信息. 质谱图上的碎片峰可以提供一级结构信息. 质谱的另一个主要功能是在综合光谱解析后 ,验证所推测的未知物结构的正确性.核磁共振氢谱在波谱综合解析中的作用核磁共振氢谱在综合光谱解析中主要提供化合物中有关质子的信息. (1)质子的类型:质子所处的化学环境说明化合物具有哪些种类的含氢官能团.(2) 氢分布:由峰的强度(面积)可说明各种类型氢的相对数目. (3)核间关系:峰的数目标志分子中磁不等性质子的种类 ,共振信号的数目表明分子中不同类型质子的数量 ,这里应注意是否存在信号的重叠 ;

28、峰的裂分数可说明相邻碳原子上质子数 ;偶合常数可确定化合物构型. 氢核间的偶合关系与氢核所处的化学环境可提供化合物的二级结构信息 ,如连结方式、位置、距离 ;结构异构与立体异构 (几何异构、光学异构、构象) 等核磁共振碳谱在波谱综合解析中的作用核磁共振碳谱 (13C NMR)与氢谱类似 ,也可提供化合物中碳核的类型、碳的分布、碳核间的关系三方面结构信息.主要提供化合物的碳“骨架”信息。碳谱的各条谱线一般都有它的惟一性 ,能够迅速、正确地否定所拟定的错误结构式. 碳谱对立体异构体比较灵敏 ,能给出细微结构信息。2.现代波谱分析方法在不同类型有机物分析应用中的重要性。波谱综合解析的应用(1) 红外

29、光谱. 在聚合物组成与结构表征中具有独特的优势 ,应用傅里叶变换红外光谱 (sFTIR) 上的特征吸收峰可以推断未知物的结构. 从 EPM 的 FTIR光谱的亚甲基摇摆振动区域的谱带中可判断出序列结构 . 而 FT2Raman 仪是在 FTIR 仪的基础上附加FT2Raman 附体组成的 ,对 C = C、C C、S = S、C = S、P = S 等红外弱谱峰很灵敏 ,可出现强峰。(2) 质谱.气相色谱 质谱联用技术对小分子混合物样品的分析极为方便. 飞行时间二次离子质谱利用碎片离子的质量 、相对丰度和谱图峰形的分布解析碎片离子.碎片离子的质量是质谱图解析的根本依据 ; 碎片峰的相对丰度则提

30、供了被测物质的结构信息 ; 谱图峰形的分布为有机组分的化学组成提供了概略的宏观信息. 全二维气相色谱与通常的气相色谱相比具有分辨率高 、峰容量大 、灵敏度好 、分析速度快以及定性更有规律可循等特点6 ,非常适合复杂体系的分离分析. 已被应用于石油产品 、精油 、杀虫剂 、中药挥发油及烟气等复杂体系领域的研究.(3) 核磁共振波谱法 (NMR) . 可提供有机分子中氢和碳以及由它们构成的官能团 、结构单元和它们彼此的连接方式和顺序的准确结构信息 ,堪称定性剖析中分子结构的“总装配师”. 在 NMR 谱图中的每个峰都可找到而且必须找到确切的归属. 对于一个拟定的分子结构 ,可以从理论上很好地预见其

31、出现的谱峰位置 、形状和强度等.(4) 核磁共振二维谱. 对于复杂化学结构的未知物 , 可以测定氢-氢相关谱或碳-氢相关谱 (COSY) ,提供化合物氢核与氢核或氢核与碳核之间的相关关系 ,测定细微结构.波谱综合解析过程中的分析与综合要想确定某一化合物的结构 ,先要对各种波谱信息做细致、全面的观察分析,从不同侧面 ,由此及彼、由表及里、由浅入深 ,逐步地加以分析 ,经过分析和考察 ,掌握各方面特征,从而为逐步地认识化合物打基础. 综合 ,是把分析得到的大量有价值的各种光谱数据汇集起来 ,作全面整体考察 ,以明确各信息之间、信息与结构之间、各谱之间的内在联系及分析其蕴含的结构实质 ,从而在本质上

32、认识化合物的结构.分析和综合是密切相关、相辅相成的 ,分析为综合准备材料 ,综合为分析提供指导. 波谱解析的过程有时就是一个边分析边假设验证的过程 ,通过分析综合再分析再综合的往复循环 ,逐步认识和鉴定化合物的结构.当然,这里也有一个实践经验积累的过程 ,平时见的越多,解的越多,量的积累就会产生质的飞跃 ,综合解谱会越来越顺利。3.LC-MS（液质联用）在精细化工或生物大分子领域应用的重要性。（小书P353 但是书没用）样品分别针对流动性强的水体和使用量大的纺织品，利用色谱的高分离效能和质谱的高灵敏度检测特点，提高分析方法的灵敏度、选择性和方法可靠性，高效液相色谱一质谱联用分析技术集在线分离、

33、定性和定量为一体，有利于实现快速分析，降低分析费用，增加方法的实用性，使其更适用于痕量的芳香胺类污染物样品的分析;将该方法用于染色纺织品在模拟汗液、碱性洗涤剂浸泡溶液中的芳香胺定量分析，并得到芳香胺在模拟条件下的迁移初步研究结果。色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。液质联用（LC-MS）主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定。在药物、化工、临床医学、分子生物学等许多领域中获得广泛的应用,具有高灵敏性,高选择性,高效率的

34、特点,可以快速准确的在线监测。HPLC-MS己经在环境分析中,尤其是涉及芳香族中间体及染料方面有很多的应用，如样品中的抗生素、多环芳烃、多氯联苯、酚类化合物、农药残留等。由于目前对低浓度、难挥发、热不稳定和强极性物质分析方法并不是十分理想。高效液相色谱法弥补了气相色谱法不宜分析难挥发，热稳定性差的物质的缺陷。自从80年代末大气压电离质谱(APIMS)成功地与HPLC联用以来，HPLC-MS已经在农药残留分析中占了很重要的地位，成为芳香族中间体及染料分析最有力的工具。生化方面的分析中的应用：生物体内的蛋白质、肽和核酸，都以混合物状态出现，具有强极性，难挥发性，又具有明显的热不稳定性，HPLC能分

35、析强极性、不易挥发、高分子量及对热不稳定的化合物；MS具有高灵敏度，能在复杂基质中进行准确的化合物的优点，所以HPLC-MS作为生化分析的一个有力工具，正在得到日益的重视。研究人员利用HPLC-MS技术在生化方面己经有很多应用。同时还可以用于十二烷基苯磺酸的鉴定 以80%甲醇为流动相，在流动相中添加7mmol/L醋酸铵电解质，流速0.5ml/min，PH=9的条件下使用高效液相色谱和UV联用，可以快速检测十二烷基苯磺酸。检出限1.32g/ml4.哪些分离方法在大黄根茎中蒽醌组分的分析。大黄中的蒽醌成分有 大黄酚，大黄素，芦荟大黄素，大黄酸，大黄素甲醚，大黄素8-O-D-吡喃葡萄糖苷、芦荟大黄素

36、8-O-D-吡喃葡萄糖苷和羟基大黄素等。方法一：重结晶法。大黄根茎粉碎，酸性条件下（硫酸，15%）水解，氯仿提取（与硫酸水溶液体积比1比5，56，提取3次）。使用不同条件重结晶法提纯分离各混合物。使用紫外可见吸收分析含量。使用标准物，配置不同浓度标准溶液，在436nm处测定吸光度，绘制标准曲线。最后测试不同方法分离得到的样品在436nm下的吸光度，确定含量。结构用红外和核磁表征。方法二：PH梯度法萃取分离将大黄粗粉用20%H2SO4水溶液酸化，加热，置冷后抽滤，将水洗至中性的滤饼于70干燥后，用乙酸乙酯回流提取得到提取液。用5% NaHCO3水溶液萃取三次，观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生，

37、继以5% Na2CO3水溶液萃取，提尽大黄素后，合并Na2CO3萃取液，并用HCl酸化，得大黄素沉淀。水洗沉淀物至洗出液呈中性，用适量丙酮溶解， 根据各组分Rf值不同用薄层色谱分离纯化大黄素。其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。展开剂：石油醚：己烷:乙酸乙酯:甲酸（1：3:1.5:0.1）分析检出：UV 芦荟大黄素在269 和427. 5 nm 处有较大吸收; 大黄酸在269 及431 nm处有较大吸收, 其中最大吸收波长为431 nm; 大黄素的最大吸收波长为290 nm , 在439 nm 处有较大吸收。方法三：超临界流体萃取萃取和分离合二为一 当饱含溶解物的超临界流体流经分离器时，由于压力下降使得流体与萃取物迅速成为两相（气液分离）而立即分开，不存在物料的相变过程，无需回收溶剂，操作方便；不仅萃取效率高，而且能耗较少，节约成本。   超临界流体萃取通常在较低温度下进行 可以有效地防止热敏性成分的氧化和逸散，特别适合于那些对热敏感性强、容易氧化分解成分的分离提取。   超临界二氧化碳流体常态下是气体，