酒萸肉检验方法验证方案

1、安徽人民中药饮片有限公司受控文件酒萸肉检验方法验证方案TS-56-001 安徽人民中药饮片有限公司验证立项申请表 立项部门质量部申请日期立项题目 酒萸肉检验方法验证方案要求完成日期验证原因确认酒萸肉检验方法是否符合本公司产品类别前验证验证要求目的： 确认酒萸肉检验方法是否符合本公司产品。确保酒萸肉成品质量合格。 立项部门负责人签名 化验室意见 签名 年 月 日 质量部意见签名 年 月 日验证管理部门意见签名 年 月 日质量副总经理意见签名 年 月 日指定编制验证方案部门及人员部门：质量部化验室人员：化验员、化验室主任编制验证方案要求及完成日期按照公司验证管理文件的规定编制出该验证项目的验证对象

2、、验证的目标和范围，验证的要求与内容、所需的条件、测试方法以及时间进度，并设计出验证所需的表格。此方案应在 月 日前编制完成。验证完成要求及日期验证小组严格执行该验证方案，验证结束后，拟订出该方法的验证周期和验证报告报验证领导小组批准。此验证应在 月 日前验证结束。验证小组签名 年 月 日备注验证方案审批表 3 审批程序部门负责人签名日期备注起草 审 核QC主管质量部验证管理部门批准备注参加验证人员姓 名所在部门职务/职称验证分工化验室QC检测化验室QC主任方案的制定质量部质量部负责人验证方案的审批，指导、组织、落实验证工作其 它安徽人民中药饮片有限公司验 证 文 件题 目酒萸肉检验方法验证方

3、案编 码页 码第 1 页/共 页起 草 人起草日期审 核 人 审核日期批 准 人批准日期一、简介酒萸肉 取净山萸肉，照酒炖法或酒蒸法(附录 D)炖或蒸至酒吸尽。主要用于用于眩晕耳呜，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴。二、验证目的：酒萸肉检验质量标准收载在中国药典2010版一部P26, 为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。三、验证范围、鉴别、含量测定四、验证小组成员及职责4.1验证小组成员4.2人员职责人 员职 责验证小组组长组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项

4、目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。验证小组成员按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。 表1：五、验证实施步骤1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施1.1仪器：己经过校正并在有效期内1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器1.3对照品：1.4材料：均符合检验要求1.5参考资料：中国药典2010年版一部2、鉴别2.1试验A1：取本品粉末0.5g，加乙酸乙酯10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇

5、制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 (附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：4：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。2.2 试验B1：取乙酸乙酯10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取试验A1下的对照品溶液，照薄层色谱法 (附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-

6、乙酸乙酯-甲酸(20：4：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。2.3检测结果:表2检验结果结果判断试验A试验B检测人: 检测日期:2.4 验证标准:试验A供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显紫红色斑点。2.5检验结果评价 2.6试验A2：取本品粉末0.5g，加无水乙醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 (附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5

7、l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50：10：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。2.7 试验B2：取无水乙醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取试验A2下的对照品溶液，照薄层色谱法 (附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50：10：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，在105加热至斑点显色清晰。2.8检测结果:表3检验结果结果判断试验

8、A1试验B1检测人: 检测日期:2.9 验证标准:试验A2供试品色谱中，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。试验B2供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显紫红色斑点。3.0检验结果评价3、含量测定照高效液相色谱法测定。仪器：LC-3000液相色谱仪3.1专属性3.1.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10l。3.1.2对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时后的马钱苷对照品约2mg，置50ml

9、容量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，作为马钱苷对照品溶液。3.1.3供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.1.4空白溶液的制备：直接取80%甲醇作为空白溶液。3.1.5将结果填入下表。表3 含量测定专属性试验表保留时间供试品溶液对照品溶液空白溶液检测人： 检测日期：3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与马钱苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。3.1.7结果评价3.2准确度3.2.1色谱条件与系统适用性

10、试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10l。3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.2.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下的供试品溶液，作含量测定用。3.2.4取本品粉末(过三号筛)约0.1g，置25ml量瓶中，共称九份。3.2.4.1三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液2.5ml，置25ml量瓶中，精密加80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.

11、2.4.2三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液5ml，置25ml量瓶中，精密加80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.2.4.3三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液7.5ml，置25ml量瓶中，精密加80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.2.5计算式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。3.2.6计算结果填入下表：表5 含量测

12、定马钱苷加样回收率试验表序号样品称量（g）样品中马钱苷的含量（mg）对照品加入量（mg）实测值（mg）回收率（%）回收率的平均值（）RSD（%）123456789检测人： 检测日期：3.2.7结果评价3.3精密度3.3.1重复性（设操作人员A）3.3.1.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10l。3.3.1.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.3.1.3供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.1g，共称六

13、份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入80甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.1.4计算 式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。3.3.1.5将计算的结果填入下表表6 含量测定马钱苷重复性试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）123456检测人： 检测日期：3.3.1.6结果评价3.3.2中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）3.3.2.1色谱条件与系统适用性试验 以

14、十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长为240nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10l。3.3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.3.2.3供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.1g，共称六份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入80甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.2.4计算 式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT

15、为供试品的称量；单位g。3.3.2.5将计算的结果填入下表表7： 含量测定马钱苷中间精密度试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）操作员A123456操作员B123456检测人： 检测日期：3.3.2.6结果评价3.4耐用性3.4.1以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。3.4.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.4.3供试品溶液的制备：取3.3.3项下供试品溶液作为供试品溶液。3.4.4色谱条件1：以乙腈-水(15：85)为流动相，C18，检测波长为240nm，流速：1.0ml/min；进样量：10l。3.