酶工程在制药领域的应用

1、酶工程在制药领域的应用潘天敏摘要 : 随着科学技术的不断发展，酶工程技术在工业领域的应用会越来越广泛，本文主要探讨了酶工程在中药制药领域的应用。其酶法在中药成分提取中酶解作用机制及在中药有效成分提取中的应用进行综述， 以叙述黄酮类化合物提取中的应用， 与新技术结合用于中药提取，分析酶法的现存问题，展望酶法在中药提取中的发展前景。关键词 : 酶工程、黄酮类成分、中药。中药治疗疾病的物质基础是其中有效的化学成分，中药中植物药约占90% ，由于中药成分十分复杂且很多有效成分含量很低， 因此有效成分的提取与分离纯化是中药开发中的关键工序。 随着酶工程应用技术的发展， 将酶工程技术应用于中药有效成分的提

2、取分离和纯化， 可以提高中药有效成分的提取效率， 取得了显著效益。1. 酶的提取1.1 水溶液法常用稀盐溶液或缓冲液提取、经过预处理的原料，包括组织糜、匀浆、细胞颗粒以及丙酮粉等， 都可用水溶液抽提。 为了数量和种类上不同材料却有很大的差别， 组织中酶的总量虽然小少、 仅各种酶的含量却非常少、 从己有的资料看，个别酶的含量在 0.01% 1%。因此在提取酶时应根据各种酶的分布特点和存在特性选择适宜的生物材料 - 防 巨提取过程中酶活力降低， 一般在低温下操作 : 但对温度耐受性较高的酶 ( 如超氧化物歧化酶 ) ，却应提高温度，以使杂蛋白变性，利于酶的提取和纯化。1.2 水溶液的 PH选择对提

3、取也很重要，应考虑的因素有 : 酶的稳定性、酶的溶解度、酶与其他物质结合。性质、选择 pH的总原则是 : 在酶稳定的 pH范围内，选择偏离等电点的适当 PH。有机溶剂法某些结合酶，如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合， 用水溶液很难提取， 为此必须除去结合的脂质， 且小能使酶变性。2. 酶提取技术的原理植物药提取过程中， 细胞原生质中的有效成分向溶媒扩散时， 须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。 细胞壁的主要成分是纤维素， 细胞间质中存在纤维素、 果胶等，通过选用一些适当的酶类，如纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶等作用于植物细胞，使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶等物质降解，细胞的致

4、密性降低，而有利于有效成分的溶出。 还可以控制非目标物的溶出， 在提高有效成分溶出效率的同时，简化后续精制操作。3, 酶工程在中药提取中的应用3.1 用于中药有效成分的提取酶提取的原理是利用酶反应的高度专一性， 将细胞壁组成成分水解或降解， 破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。 选用恰当的酶， 无需高温即可将影响液体制剂的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除，较温和地分解植物组织，加速有效成分的释放提取， 也可促使某些水溶性不好的成分转化为糖有等易溶于水的成分，有利于提取，生物催化活性专一。3,2 用于提取液的精制中药水提液含有多种类型的杂质，如淀粉、蛋白质、蹂质、果胶等。采用常规提取法时，煎

5、煮过程中药材里的蛋白质遇热凝固、淀粉糊化，影响有效成分煎出，分离困难。针对中药水提液中所含的杂质类型， 采用相应酶将其降解为小分了物质或分解除去，可解决上述问题， 并改善中药日服液、 药酒等液体制剂的澄清度，提高成品质量。4, 酶技术在中药黄酮类成分提取中的应用4.1 单独利用酶技术实现黄酮类成分的高效提取通常对黄酮类化合物的提取以水、 乙醇、甲醇等溶剂为提取溶媒， 水浸提取成本低，但提取率较低； 而用乙醇等有机溶剂提取的成本较高。 且水煎煮法和有机溶剂提取法的提取效率受多种因素的影响， 如当药材中含有黏液质、 果胶和树脂等成分时，提取液的黏稠性增大，提取效率更低，药液也不容易滤过。此外，通常

6、细胞壁是传统方法提取中药中有效成分的主要屏障， 因为大部分有效成分存在于细胞壁内，少量存在于细胞间隙， 细胞壁一般都是由纤维素构成的， 传统的提取方法很难破坏其结构。中药酶法提取的原理是在传统溶剂提取方法的基础上，利用酶反应的高度专一性，根据药材植物细胞壁的构成，选择相对应的酶如纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶以及多酶复合体等， 水解或降解细胞壁的组成成分， 破坏细胞壁结构， 使细胞壁的致密性降低，从而使有效成分充分溶出、溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而提高有效成分的提取率酶法提取具有提取收率高、 成本低、环保等优点， 还可以控制非目标物的溶出， 简化后续精制操作。 目前，酶法在中药黄酮类成分提取中

7、的应用主要体现在纤维素酶的作用上， 用纤维素酶可以破坏细胞壁中纤维素的 -D- 葡萄糖链，有利于黄酮类成分的提取。欧阳辉等用酶法直接提取绞股蓝中总黄酮，发现纤维素酶在49 ，pH 3.9 ，酶用量 120 U/mL 条件下酶解 2.5 h 后，总黄酮得率为 0.357%，与传统溶剂浸提法的总黄酮得率相比提高了 25.0% 。王文渊等采用纤维素酶和果胶酶组成的复合酶法提取苦瓜叶中的总黄酮， 发现纤维素酶浓度为 0.8mg/mL，果胶酶浓度为 0.5 mg/mL，提取温度为 55 ，提取介质 pH 4.5 的条件下酶解 140 min 后，苦瓜叶总黄酮的提取率可达到 3.13% ，与直接醇提工艺相

8、比总黄酮提取率提高了30.0%以上。沙棘总黄酮是研究最多的沙棘活性成分之一，具有抗心肌缺血、调血脂、抗肿瘤、调节免疫系统等药理作用，且在其果渣中的量相当高，已有文献主要探讨了用有机溶剂结合超声、 微波、热加工等物理方法提取沙棘果渣总黄酮徐升运等采用了生物酶法提取沙棘果渣总黄酮，发现当生物酶用量占沙棘果渣质量 4%、pH 5.0 、酶解温度 60 、酶解时间 120min ，料水质量比 1 30 时，总黄酮提取率高达 0.769%，与有机溶剂回流法和超声波法相比，分别提高了 51.91% 和 48.51% 。王宏志等用纤维素酶法提取黄芩中黄芩素、 汉黄芩素，最佳工艺条件为 20 倍量水、加酶量

9、20 U/g 药材、 pH 4.8 、温度 50 、时间8 h，与传统水煎提取工艺相比， 酶法提取使得黄芩中黄芩素提取率提高了 5 倍、汉黄芩素提取率提高了近 4 倍。陈皮主要成分为黄酮类化合物，是强自由基清除剂，具有强抗氧化作用，王岩岩等采用纤维素酶提取陈皮黄酮，结果表明，与传统化学法相比， 纤维素酶法提取陈皮黄酮较好， 在最佳条件下， 纤维素酶法所得黄酮提取率可达到 6.96% ，为化学法黄酮提取率的 2.5 倍。黄芪中的黄酮类成分具有多种药理活性，具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、增强免疫力、抗病毒以及促进细胞增殖的作用， 贲永光等用纤维素酶法提取黄芪总黄酮， 发现在最优工艺条件下，黄芪

10、总黄酮的提取率为 0.402% ，提取率明显增加。4.2 与其他技术联合应用以实现黄酮类成分的高效提取酶解 - 超声偶联技术超声波和酶解技术是新兴的天然活性物质辅助提取技术，均能有效提高多种活性物质的提取率。酶解- 超声偶联技术已经成为一种新型、快速、有效的总黄酮提取方法具有提取率高、省时、高效、节能等优点。旷超阳等用水酶法与超声法相结合提取连翘中总黄酮，结果显示，在纤维素酶的用量为 1.2% 、 pH 6.0 、酶解温度为 50的条件下酶解4 h ，连翘总黄酮的提取率为 10.54% ，两者结合大大提高了黄酮的提取率。陈雅维等采用酶解 - 超声偶联技术对葛根中总异黄酮进行提取， 葛根总异黄酮

11、收率明显提高， 提取率为 7.10% 。酶解 - 微波偶联技术微波提取能迅速升温、及时灭酶、缩短提取时间、提高效率，符合环境保护的要求， 酶解可以破坏细胞壁的致密结构， 将酶法与微波提取相结合，可以在温和的条件下，快速、高效地提取出黄酮类成分，提高提取率。茶多酚是茶叶中儿茶素类、黄酮类、酚酸类和花色素类化合物的总称，是一类具有重要药理作用的生物活性物质。 但是大多数提取茶多酚工艺的提取率还较低，且茶多酚产品不稳定，舒红英等采用复合酶 - 微波法提取茶多酚，发现复合酶 - 微波法提取茶多酚比复合酶法、索氏法和微波法耗时少、提取效率高。在50 条件下用纤维素酶和果胶酶前处理 40 min，微波辐射 8 min，微波功率 500 W，料液质量比 1 30，25%乙醇溶液萃取，提取率可达到 18.4% 。复合酶可以将细胞壁及细胞间层的纤维素和果胶质形成的阻挡层有效破解， 使大部分茶多酚溶解到乙醇溶液中。 另外，微波可以使体系的温度快速达到复合酶酶