不同证候的雄激素性脱发患者受损头皮的病理特征及雄激素受体表达的规律

1、不同证候的雄激素性脱发患者受损头皮的 病理特征及雄激素受体表达的规律【关键词】 雄性激素受体摘要：【目的】探讨雄性激素受体AR在雄激素性脱发AA患者 受损头皮的表达特点和分布规律及其与中医证候的关系.【方法】将80例中医证型属脾胃湿热或肝肾缺乏两型的 AA患者作为研究对象, 用免疫组织化学法检测和比照其秃发区与正常非秃发区AR水平,并与32例正常人头皮组织的AR水平进行异体对照研究.【结果】表皮 颗粒细胞层、棘层、基底层、真皮纤维母细胞、血管内皮细胞、神经 组织、立毛肌、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、毛乳头AR表达均为阳性.而表皮角质层、皮下脂肪、内毛根鞘、毛干细胞和毛母质细胞染色均 为阴性.AA患者

2、秃发区头皮总AR阳性细胞百分率以及表皮、汗腺、 皮脂腺、毛根鞘、毛乳头五个皮肤结构中的 AR阳性细胞百分率均高 于非秃发区及正常人P<001.且各皮肤结构AR值上下与秃发区毛 发稀稠程度存在相关性.脾胃湿热组患者秃发区汗腺、皮脂腺中以及 总体AR阳性细胞百分率高于肝肾缺乏组P<005,而表皮、毛根鞘、 毛乳头上的AR表达在两组间差异无统计学意义P>005.【结论】AR 与AA发病有关,局部AR含量的异常是AA的病因之一；不同中医证 候的秃发患者秃发区的病理特征以及 AR的数量也不同,脾胃湿热型 患者头皮秃发区的AR表达总的要比肝肾缺乏的患者高.关键词：雄激素性脱发；秃发/中医

3、病机；受体,雄激素；脾胃湿热；肝肾缺乏雄激素性脱发(androgenetic alopecia,AA),又称男性型脱 发、脂溢性脱发、弥散型秃发.迄今, AA的病因及发病机理已证实 与雄激素及其受体有关1-2.但对于大局部AA患者,其血液中的 雄激素水平并无异常3-5.因此,目前对受损头皮局部雄激素受体 (androgen receptor , AR)数量的检测已引起研究者的关注.AR属于 爸体激素受体超家族,它是一种转录因子,只有AR存在的靶组织细胞才能使雄激素发挥其生物功能.然而AR在AA中的表达情况、AA的中医证型与秃发区 AR的关系尚未见有报道,故我们采用免疫组织 化学法对80例AA患

4、者秃发区和非秃发区皮肤组织中 AR含量进行测 定,并与32例正常人头皮组织进行对照,现报告如下.1资料与方法11 一般资料病例选自2001年3月至2002年1月间我院皮肤科诊断为 AA的患者,共80例,均为男性；年龄2149岁,平均3133岁；病 程120年,平均675年.对照组32例,来源于本院神经外科的手 术患者和头部瘢痕植发患者的正常头皮组织,共32例,均为男性；年龄2048岁,平均3088岁.80例AA患者中医辨证分为两型,脾胃湿热组 47例,平均 年龄2919岁,病程平均586年；肝肾缺乏组33例,平均年龄3436 岁,病程平均813年.参照?临床皮肤病学?6和?中药新药临床研究指导

5、原那么? 第三辑7进行诊断和中医辨证分型.13纳入标准秃发组：1符合上述诊断标准；2年龄在1850岁,男 性；3近3个月未用性激素避孕药物者；4近1个月未经任何脱发 治疗；5依从性好者.对照组：1年龄在1850岁,男性；2近3个月未用性 激素避孕药物者；3本人和家族均无AA 4依从性好者.14排除标准1头部有其他皮肤疾患者；2有其他明显内分泌功能失调 性疾病者；3其他疾病、药物、理化因素等引起的脱发者；4不合 作或资料不全者.15取材部位秃发组取秃发区及后枕非秃发区全层头皮,局部患者取前额及头顶两个稀疏程度不同的脱发区.对照组取后枕手术切口头皮全 层,标本经苏木素伊红HE染色证实为正常头皮组织

6、,其他条件同秃 发组.16试剂来源AR的抗体为即用型单克隆鼠抗人型 AR抗体、链霉菌抗生 物素蛋白一过氧化物酶SP试剂盒和联苯二胺DAB显色试剂盒均为 美国DAK公司产品.标本经40g/L的甲醛固定,石蜡包埋,切成3m厚,经脱 蜡、水化后,依次参加一抗(AR抗体)、生物素化的二抗、链亲和素一 过氧化物酶溶液,以上各步骤间均以001mol/L磷酸盐生理盐水缓冲 液(PBS)(pH=72)清洗3次.用新鲜配制的DAB-H2O双色,中性树脂 封片.分别用阳性片作阳性对照,以PBSS冲液代替一抗作阴性 对照.18测定方法每张切片在Leica图像分析仪系统上,采用光学显微镜观 察,并以HE染色切片作对照

7、.阳性结果判定：细胞浆或细胞核出现 棕黄色颗粒为阳性,与阴性对照片染色一致的为阴性. 采用百分数法 计数：每个皮肤结构如表皮、汗腺等随机取 466个高倍镜视野,每 张涂片记数500个以上同类细胞,计算选取视野中组化染色阳性细胞 的百分比.19统计学处理方法采用SPSS100建立数据库及统计分析,显著性水平 =005. 2结果21光学显微镜下结果211 AR在表皮的分布角质层AR表达为阴性.颗粒细胞层、棘层、基底层 AR表达 均为阳性,AR阳性细胞率从颗粒层至基底层逐渐增多,在颗粒层与 棘层AR以细胞核阳性为主,基底层 AR那么以细胞浆阳性为主(见图 1-a) o212 AR在真皮的分布纤维母细

8、胞、血管内皮细胞、神经组织、立毛肌 AR呈阳性 表达,皮下脂肪AR阴性.213 AR在汗腺的分布汗腺的排泄部、分泌部细胞核均有 AR的分布,且排泄部AR 阳性百分率高于分泌部见图1-b.214 AR在皮脂腺的分布皮脂腺的基内幕胞和腺细胞都有高水平的AR表达见图1-c,且以核阳性为主.同一标本中,两种中医证型比拟,脾胃湿热 型AA患者的皮脂腺在形态上分叶增多、体积增大.215 AR在毛囊的分布外毛根鞘基层和棘层 AR染色均为阳性见图1-d.以毛囊 纵切面观察：毛囊漏斗部 AR阳性表达与表皮分布和含量根本一致. 峡部以下至毛小球部,外毛根鞘 AR阳性百分率逐渐减少.毛乳头上 有较高水平的AR表达见

9、图1-e,而内毛根鞘、毛干细胞和毛母质 细胞染色均为阴性.秃发区毛乳头体积较非秃发区小,但细胞形态无 明显变化.在秃发区和非秃发区,无论是缩小化的生长末期毛囊还是 休止期毛囊,AR的分布均一致.22 AR阳性百分率的比拟结果221秃发区、非秃发区和对照组 AR阳性百分率比拟表1显示,秃发区总体以及秃发区表皮、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、毛乳头五个皮肤结构的 AR阳性百分率均高于非秃发区和正常 人对照组均P< 001,非秃发区总体以及上述部位 AR阳性百分率与 正常人对照组比拟,差异无统计学意义均P>005.表1秃发区、 非秃发区和对照组AR阳性百分率的比拟略222秃发区稀稠程度与AR关系

10、80例秃发组中有38例在前额与头顶两个秃发程度不同区域 各取了标本.这两个区域的 AR阳性百分率比照见表2.经配对t检 验,结果显示稀疏秃发区的总体 AR阳性百分率、表皮与皮脂腺的 AR 阳性百分率与稠密秃发区比拟,差异均有统计学意义.经相关性检验, 各皮肤结构AR值上下与秃发区毛发稀稠程度存在相关性,即头发相 对稠密的秃发区AR值低,头发相对稀疏的秃发区 AR值高.表2 38 例AA患者稀疏秃发区和稠密秃发区的 AR阳性百分率比拟略223不同中医证型患者秃发区的 AR阳性百分率的比拟 脾胃湿热型患者秃发区 AR阳性百分率在汗腺和皮脂腺比肝肾缺乏型高,差异有统计学意义分别为t=2358, P=

11、0021; t=2878, P=0005,但在表皮、毛根鞘和毛乳头中的AR阳性百分率两种证型差 异均无统计学意义P>005,见表3.而在非秃发区,五个皮肤结构 两种证型间AR阳性百分率的差异均无统计学意义P >005o表3两 种中医证型秃发患者秃发区 AR阳性百分率比拟略3讨论现代医学研究说明,AA是一种雄激素依赖的常染色体显性 多基因遗传性秃发,雄激素睾酮,特别是游离活性睾酮以及二氢睾 酮、毛囊单位的AR酶的活性、遗传易感性的秃发区头皮在 AA发 病中起着重要的作用.雄激素与受体结合,形成雄激素一受体复合物,后者进入细胞核,结合到基因位点特异的激素反应元件上,从而刺激或介导毛发生

12、长的细胞内过程.国内巩氏5对AA患者和正常人的血清睾酮水平进行了测定,发现两组间差异无 统计学意义.Sawaya等8通过研究也发现局部皮肤受体量与血清 雄激素水平无相关性.因此,AA患者毛囊单位的雄激素及其受体水 平比血清更能反映AA本质.本研究通过对80例AA患者头皮秃发区 AR检测并与自体、异体比照研究发现：31AR在头皮的分布规律本研究光镜下的结果提示：秃发区、非秃发区以及正常人对 照组头皮的表皮颗粒细胞层、棘层、基底层、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、 毛乳头均有AR的阳性表达,说明这些细胞是雄激素在皮肤的靶细胞. 表皮角质层、真皮胶原纤维、皮下脂肪、内毛根鞘、毛干细胞和毛母 质细胞染色那么均呈

13、阴性.本研究光镜下的结果与蓝长贵9卜Winter 10、Razel 11的研究结果一致.AR在皮肤的分布规律说明,雄激素能刺激真皮纤维母细胞和血管内皮细胞的增殖,对神经组织也有直接调节作用.汗腺上有 AR的阳性表达,证实小汗腺受 雄激素限制.本研究结果发现,皮脂腺细胞和毛乳头细胞上有AR的高表达,这与国外的研究结果12-14 一致,说明雄激素能调节皮 脂腺的基内幕胞和腺细胞的增殖和脂肪生成,刺激皮脂腺的分泌,还能通过作用于毛乳头细胞来限制毛发的生长.本研究还发现,生长期 和休止期毛乳头细胞均有 AR的阳性表达,说明雄激素在这两个毛发 生长阶段均起作用.32头皮中AR阳性百分率与AA关系本研究资

14、料说明,AA患者秃发区头皮表皮、汗腺、皮脂腺、 外毛根鞘和毛乳头的 AR阳性细胞百分率均较自身非秃发区头皮以及 异体正常头皮高.各皮肤结构 AR值上下与秃发区毛发稀稠程度存在 相关性,提示AA的发生是由于局部AR数量的异常引起的.皮脂腺、毛乳头这两个皮肤结构 AR阳性细胞率较其他皮肤 结构高,与 Sawaya 8、Hibberts 15的研究结果相同,揭示它 们对雄激素较其他皮肤结构更敏感.雄激素能调节皮脂腺的大小16,秃发区皮脂腺AR含量高 于非秃发区,这与AA患者头部皮脂分泌较多的临床表现有一定关联. 毛乳头细胞被认为是雄激素作用的位点, 雄激素一方面抑制毛乳头的 生长发育而直接影响毛发生

15、长,使头发提前进入休止期.另一方面使 毛乳头产生旁分泌因子17,这些成份使胞外基质体积缩小,从而 使表皮与真皮间的接触丧失,而表皮与真皮间的相互作用是毛发生长 必不可少的条件8,因此导致AA的发生.33 AA中医辨证分型与秃发区AR的关系及临床意义祖国医学认为AA属于“发蛀脱发、“蛀发癣范畴.中医 学认为本病的主要病因病机为：平素血热之体,复感风邪,郁久转而 化燥,进而耗血伤阴,毛根失养,故发焦脱落；或脾胃运化失常,水 湿内聚化热,致使湿热上蒸巅顶,侵蚀发根白浆,引起头发粘腻而脱 落；或禀赋缺乏,思虑过度,劳伤肝肾,而致精血亏虚、肝肾缺乏,那么发无生长之源,失于濡养而脱落根据以上病因病机,近年

16、来临床研究逐渐趋向主张把本病分 为3型：血热生风型、脾胃湿热型和肝肾缺乏型.脾胃湿热型患者的 头发光泽发亮,皮脂溢出较其他两证型多,我们的实验结果显示脾胃 湿热型患者的皮脂腺分叶增多、饱满,体积增大；同时该型患者秃发 区汗腺、皮脂腺的AR阳性细胞百分率较肝肾缺乏型患者高.脾胃湿 热型AA患者秃发区的汗腺和皮脂腺细胞对雄激素比肝肾缺乏型更为 敏感.这在一定程度上提示了中医辨证分型有其病理解剖结构变化的 根底.本研究结果提示,AA的发生与毛囊皮脂腺单位ARzk平升高 或AR对正常血清水平的雄激素的敏感性增加有关,这局部解释了雄 激素在AA发病中的重要作用与只有少数患者的血清雄激素水平升高 这一事实

17、的矛盾.故推测 AA发病的可能机制为：活性雄激素与皮脂 腺、毛囊的AR结合后,产生激素一受体复合物进入细胞核内,影响 皮脂腺的代谢和毛发的生长.具体表现为促进皮脂腺的分泌,使头部 油腻；抑制毛囊的代谢,造成头发脱落,从而导致脱发的发生.研究 结果初步显示,秃发区的显微结构以及 AR水平与AA的中医辨证分型 有一定的相关性,提示该研究对进一步探讨中医药调节内分泌的机制 具有一定的意义.至于秃发区AR水平能否作为AA中医辨证分型的客 观依据,还有待扩大样本量作进一步深入探讨.(本文的完成得到欧爱华老师在数理统计方面的指导,在此 深表感谢.)参考文献：1 Sinclair RFortnighty r

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