顾振纶—金蝉花孢子粉及野生金蝉花粗多糖—抗肿瘤作用初步报告

1、金蝉花孢子粉及野生金蝉花粗多糖金蝉花孢子粉及野生金蝉花粗多糖抗肿瘤作用初步报告抗肿瘤作用初步报告Applied report of Cordyceps cicadae and polysaccharide of wild cordycepssobolifera on Anti-tumors2011年3月18日 香港一、前 言Introduction 蝉花Cordyceps cicadae属虫生性药用真菌，生于蝉蛹体上，是蝉在羽化前，接近地面约34cm处，被蝉拟青霉等麦角菌科( Claviceptaceae)真菌寄生的产物。 其药用始载于南北朝刘宋时代的雷公炮炙论。唐慎微所著经史证类备急本草言

2、“蝉花味甘寒，无毒，主小儿天吊，惊痫，夜啼，心悸”。本草纲目中亦记载：“蝉花可治疗惊痫，夜啼心悸，功同蝉蜕”。 医家认为蝉花是:一种与冬虫夏草相近的珍贵药材。1. 蝉花的分类 大蝉草 大蝉草又名金蝉花，其子座一般单生、2个或多个，不分枝，棒状，褐色；寄生的蝉若虫较大。 小蝉花 麦角菌科虫草属真菌小蝉草寄生于蝉科慈姑（Platylenre Kaempferi Fabr）幼虫的体内所抽出的子座及寄生幼虫尸体的干燥复合体。 蝉生虫草 其子座聚生至近丛生，从成虫寄主的整个腹部长出，子囊壳斜埋在子座内。 蝉拟青霉 蝉拟青霉又名雌蝉花，属半知菌类或有丝分裂孢子真菌，其孢梗束自虫体头部丛聚成束长出，浅黄色，

3、长 1.56.0cm，前端膨大，呈纺锤形。2. 蝉花的药理作用 免疫调节作用 调节脂类代谢 滋补强壮，提升机体的营养状况 抗疲劳，抗应激 解热镇痛催眠作用 降血糖作用 抗肿瘤作用 日本学者Ukai等从蝉花中分离出一种水溶性多糖即半乳甘露糖，它由D-甘露糖和 D-半乳糖构成，二者比例4：3。当剂量为20mg/kg时，对小鼠S180肉瘤的抑制率为47。 蝉花粗提物能选择性杀伤 G2/M期细胞，显著抑制肺癌细胞株 PAA细胞生长。 一定浓度的蝉拟青霉多糖能使人外周血单个核细胞的增殖率升高，较高浓度多糖能抑制白血病细胞株U937、 K562的增殖，同时蝉拟青霉多糖能提高外周血单个核细胞表达 nTNF-

4、、nIFN-。Materials and Methods二、材料与方法 1. 药品 人工培养金蝉花孢子粉（孢子粉），批号：101201 野生金蝉花粗多糖（粗多糖），批号：110128 均由上海泛亚生命科学研究院提供 人工培养金蝉花孢子粉醇提物由苏州中药研究所植化室制备。 人工培养金蝉花孢子粉醇提物、野生金蝉花粗多糖 均用DMSO溶解后配成100mg/ml（DMSO含量5），4保存。 2. 实验用肿瘤细胞（由中国科学院上海细胞库供应）编号编号来源来源细胞株细胞株1 1人乳腺癌人乳腺癌MCF-72 2人宫颈癌（鳞癌）人宫颈癌（鳞癌）Hela3 3人宫颈癌（腺癌）人宫颈癌（腺癌）Siha4 4人胶质

5、瘤人胶质瘤LN2295 5人胶质瘤人胶质瘤SHG446 6人胶质瘤人胶质瘤U2517 7人胶质瘤人胶质瘤U87MG8 8人肝癌人肝癌HepG29 9人胰腺癌人胰腺癌SW19901010人白血病人白血病K562编号编号来源来源细胞株细胞株1111人白血病人白血病PBL9851212人回盲肠癌人回盲肠癌Ccl-2441313人横纹肌肉瘤人横纹肌肉瘤RD1414人肺腺癌人肺腺癌A5491515人卵巢癌人卵巢癌Hey1B1616人卵巢癌人卵巢癌HO-8910PM1717人黑色素瘤人黑色素瘤A3751818人黑色素瘤人黑色素瘤C81611919人胶质母细胞瘤人胶质母细胞瘤A1722020人胃癌人胃癌HG

6、C27 3. 主要试剂： DMEM（高糖）、MEM及1640培养基，批号：1361834，Hyclone 产品。 胎牛血清（FBS），Hyclone 产品。 四氮唑蓝 (MTT)、胰酶、二甲基亚砜（DMSO）、RNA酶（Rnase）、 碘化丙锭(Propidium Iodide，PI)，均为Sigma产品。 戊二醛、锇酸等制作电镜样本所需试剂，由苏州大学电镜室提供。 Annexin V/PI 双染试剂盒：Biouniquer Technology Co. LTD Wright-giemsa染色试剂盒：苏州金莱生物科技有限公司。 4. 主要仪器设备 CO2 培养箱，Napco 5410 型，Na

7、pco 公司，美国。 医用净化工作台，YJ-1450 B 型，吴江市设备净化总厂。 倒置显微镜，CKX41，OLYMPUS 公司，日本。 酶联免疫检测仪，DG5032 型，南京华东电子集团医疗装备有限公司。 流式细胞仪，EPICS XL 型，Beckman-Coulter 公司，美国。 荧光显微镜，IX71 型，OLYMPUS 公司，日本。 高速低温离心机，5417R 型，Effendorf 公司，德国。 透射电子显微镜，H-600 型，Hitachi 公司，日本。 扫描电子显微镜，S-4700型，日立公司，日本。 三、实 验 结 果Results（一）四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测结果F

8、ig. 1-1A. The inhibited rates of Cordyceps cicadae were detected by MTT assay （n=6）表表1-1A 金蝉花孢子粉对金蝉花孢子粉对9株肿瘤细胞生长抑制率的影响株肿瘤细胞生长抑制率的影响 （n=6）编号编号细胞细胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1 1人胃癌细胞人胃癌细胞HGC27 0 -2.55 0 -2.5512.4412.4422.822.8* * *37.9537.95* * *71.8471.84* * *2 2人宫颈癌人宫颈癌Hela

9、 0 0 26.2526.25* * *42.142.1* * *44.6844.68* * *44.2944.29* * *61.7861.78* * *3 3人宫颈癌人宫颈癌Siha 0 -8.85 0 -8.8515.4415.44* * *32.4432.44* * *26.426.4* * *35.0735.07* * *4 4人胶质瘤人胶质瘤LN229 0 0 35.835.8* * *36.2336.23* * *44.0944.09* * *47.447.4* * *50.5250.52* * *5 5人胰腺癌人胰腺癌SW1990 0 0 2.872.87* * *66.296

10、6.29* * *63.7763.77* * *60.1860.18* * *77.0577.05* * *6 6人白血病细胞人白血病细胞K562 0 35.35 0 35.3540.7740.7741.5241.52* * *49.949.9* * *58.7358.73* *7 7人白血病细胞人白血病细胞PBL985 0 17.24 0 17.2418.8918.8920.3920.3940.9340.93* * *56.0756.07* * *8 8人回盲肠癌细胞人回盲肠癌细胞Ccl-244 0 -8.28 0 -8.28-11.89-11.8932.4532.45* *20.5420.

11、5427.9527.95* *9 9人横纹肌肉细胞瘤人横纹肌肉细胞瘤RD 0 -3.66 0 -3.668.948.945.495.4922.2222.22* * *69.1469.14* * *P0.05, *P0.01 vs control group编号编号细胞细胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1010人胶质瘤人胶质瘤SHG44 0 -0.24 0 -0.240.490.4915.8115.812.342.3433.133.11111人胶质瘤人胶质瘤U251 0 0.95 0 0.95-0.18-0.1822.6

12、622.66-13.84-13.8416.3916.391212人胶质瘤人胶质瘤U87MG 0 -0.49 0 -0.49-2.43-2.4312.4112.416.246.2419.8219.821313人肝癌人肝癌HepG2 0 -0.45 0 -0.45-1.31-1.31-0.84-0.84-0.45-0.450.2470.2471414人肺腺癌人肺腺癌A549 0 -8.19 0 -8.19-20.01-20.01-14.2-14.23.363.3639.3639.361515人卵巢癌细胞人卵巢癌细胞Hey1B 0 -1.51 0 -1.51-10.75-10.75-2.21-2.2

13、1-13.91-13.91-4.73-4.731616人卵巢癌细胞人卵巢癌细胞HO8910PM 0 -0.26 0 -0.262.352.352.012.0113.4313.4319.3819.381717人黑色素瘤细胞人黑色素瘤细胞A375 0 4.61 0 4.61-15.7-15.72.822.8214.0814.0839.3739.371818人黑色素瘤细胞人黑色素瘤细胞C8161 0 7.28 0 7.28-0.09-0.0930.6530.651.941.9435.1835.181919人胶质母细胞瘤人胶质母细胞瘤A172 0 -10.1 0 -10.1-2.81-2.8116.8

14、116.8110.0810.0829.2129.212020人乳腺癌人乳腺癌MCF-7 0 -1.86 0 -1.86-1.89-1.89-1.17-1.17-0.17-0.171.521.52*P0.05, *P0.01 vs control group表表1-1B 金蝉花孢子粉对金蝉花孢子粉对11株肿瘤细胞生长抑制率的影响株肿瘤细胞生长抑制率的影响（n=6）表表1-2A 野生金蝉花粗多糖对野生金蝉花粗多糖对9株肿瘤细胞生长抑制率的影响株肿瘤细胞生长抑制率的影响 （n=6） Tab. 1-2A. The inhibited rates of Cordyceps cicadae polysac

15、charide were detected by MTT assay. （n=6）*P0.05, *P0.01 vs control group编号编号细胞细胞 抑制率抑制率(%)Control50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1 1人胃癌细胞人胃癌细胞HGC27HGC270 010.4910.4910.6110.6124.6624.66* * *46.2846.28* * *80.7480.74* * *2 2人宫颈癌人宫颈癌Hela0 044.8944.89* * *61.0861.08* * *61.2661.26* * *57.5357.53* * *5

16、8.9558.95* * *3 3人宫颈癌人宫颈癌Siha0 020.6920.69* * *29.7629.76* * *35.7135.71* * *31.9131.91* * *39.6539.65* * *4 4人胶质瘤人胶质瘤LN2290 041.4341.43* * *38.5738.57* * *37.2837.28* * *40.0540.05* * *47.2647.26* * *5 5人胰腺癌人胰腺癌SW19900 037.5437.54* * *50.7250.72* * *50.9550.95* * *55.5155.51* * *87.2487.24* * *6 6人

17、白血病细胞人白血病细胞K5620 011.2111.2117.0117.0117.7217.7221.7621.7633.3533.357 7人白血病细胞人白血病细胞PBL9850 030.5830.5816.7916.7953.3753.37* * *54.1254.12* * *55.4755.47* * *8 8人回盲肠癌细胞人回盲肠癌细胞Ccl-2440 017.0117.01-13.36-13.3650.1350.13* * *34.9434.94* *33.9733.97* *9 9人横纹肌肉细胞瘤人横纹肌肉细胞瘤RD0 0-5.13-5.13-1.30-1.304.404.403

18、0.5430.54* * *54.0054.00* * *编号编号细胞细胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1010人胶质瘤人胶质瘤SHG44 0 -2.58 0 -2.581.861.8623.5223.522.942.9410.3310.331111人胶质瘤人胶质瘤U251 0 -13.3 0 -13.3-2.46-2.4627.7627.76-24.45-24.458.468.461212人胶质瘤人胶质瘤U87MG 0 -7.98 0 -7.98-10.72-10.726.336.3323.523.518.2618.

19、261313人肝癌人肝癌HepG2 0 -0.77 0 -0.77-0.58-0.583.023.0218.6718.6729.8629.861414人肺腺癌人肺腺癌A549 0 -20.79 0 -20.79-24.37-24.37-37.52-37.52-32.76-32.764.954.951515人卵巢癌细胞人卵巢癌细胞Hey1B 0 -4.91 0 -4.91-0.82-0.826.096.09-7.57-7.571.481.481616人卵巢癌细胞人卵巢癌细胞HO-8910PM 0 22.49 0 22.49-3.11-3.113.083.082.392.3920.9420.941

20、717人黑色素瘤细胞人黑色素瘤细胞A375 0 5.49 0 5.49-9.49-9.497.577.578.888.8853.6153.611818人黑色素瘤细胞人黑色素瘤细胞C8161 0 -0.54 0 -0.541.921.9233.8833.881.071.0721.6821.681919人胶质母细胞瘤人胶质母细胞瘤A172 0 -0.38 0 -0.381.261.2621.121.11.011.0131.4831.482020人乳腺癌人乳腺癌MCF-7 0 -1.43 0 -1.43-1.14-1.14-1.11-1.11-0.58-0.580.020.02*P0.05, *P0

21、.01 vs control group表表1-2B 野生金蝉花粗多糖对野生金蝉花粗多糖对11株肿瘤细胞生长抑制率的影响株肿瘤细胞生长抑制率的影响（n=6）（二） 瑞氏吉姆萨（Wright-giemsa）染色结果Fig. 2-1 Effect of on SW1990 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.图图2-1 金蝉花对人胰腺癌金蝉

22、花对人胰腺癌SW1990细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉；：孢子粉；H-L：粗多糖：粗多糖组；组；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） IA controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖图图2-2 金蝉花对人宫颈癌金蝉花对人宫颈癌Hela细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉；：孢子粉；H-L：蝉花粗多糖：蝉花粗多糖组；组；G：5-氟尿

23、嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-2 Effect of on Hela (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉

24、粗多糖粗多糖图图2-3 金蝉花对人回盲肠癌金蝉花对人回盲肠癌ccl-244细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖组；：粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-3 Effect of on ccl-244 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/

25、ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml粗多糖粗多糖孢子粉孢子粉图图2-4 金蝉花对人横纹肌肉瘤金蝉花对人横纹肌肉瘤RD细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖组；：粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-4 Effect of on RD (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h

26、 respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖图图2-5 金蝉花对人胶质瘤金蝉花对人胶质瘤LN229细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖组；粗多糖组；G：环磷酰胺）：环磷酰胺）Fig. 2

27、-5 Effect of on LN229 (Light microscope 200) A: control group; H-L: Cordyceps cicadae for 48h respectively; G-K: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:100 M Cy.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml粗多糖粗多糖孢子粉孢子粉图图2-6 金

28、蝉花对人胃癌金蝉花对人胃癌HGC-27细胞形态学的影响（细胞形态学的影响（A：正常组；：正常组；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖组；粗多糖组；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-6 Effect of on HGC-27 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/m

29、l I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖 上述结果表明：人工培养金蝉花孢子粉和野生金蝉花粗多糖对体外培养的人胃癌HGC27、人白血病K562和PBL985/GPD、人横纹肌肉瘤RD、人宫颈癌Siha、Hela、人胰腺癌SW1990、人胶质瘤LN229及人回盲肠癌ccl-244细胞等肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。（三） 流式细胞仪（PI单染）检测结果G1期： DNA合成前期S期：DNA合成期G2期：DNA合成后期M期：有丝分裂期，DNA的复制Cell Cycle

30、图图3-1 金金 蝉花对人胰腺癌蝉花对人胰腺癌SW1990细胞周期的影响（细胞周期的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.3-1 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of SW1990 treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1m

31、g/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.ABCDG1期S期G2期图图3-2 金蝉花对人白血病金蝉花对人白血病K562细胞周期的影响（细胞周期的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶 ） Fig.3-2 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of K562 treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A

32、: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide;D: 5 M 5-Fu.ABCD图图3-3 金蝉花对人宫颈癌金蝉花对人宫颈癌Hela细胞周期的影响（细胞周期的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.3-3 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of Hela treated with Cordycep

33、s cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.ABCD表表3-1 金蝉花对人胰腺癌金蝉花对人胰腺癌SW1990、人白血病、人白血病K562及人宫颈癌及人宫颈癌Hela细胞周期的影响细胞周期的影响Tab.3-1 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of SW1990、K562 and

34、 Hela treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. 细胞株细胞株浓度浓度正常对照正常对照(%)(%)孢子粉孢子粉 (%)(%)G1G1S SG2G2G1G1S SG2G2人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml66.41719.62819.62813.95613.95666.22466.22415.43315.43318.34318.343人白血病人白血病K562K5621mg/ml41.99650.45650.4567.5487.54820.60920.60952.6352.6326

35、.7626.76人宫颈癌人宫颈癌HelaHela1mg/ml59.45627.77327.77312.77112.77173.73873.73813.30513.30512.95712.957细胞株细胞株浓度浓度粗多糖粗多糖(%)(%)5-Fu(%)5-Fu(%)G1G1S SG2G2G1G1S SG2G2人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml70.04670.0469.8529.85220.10120.10181.2481.249.0819.0819.6799.679人白血病人白血病K562K5621mg/ml33.85533.85551.77651.77614.36914.3

36、6936.30736.30753.12653.12610.56610.566人宫颈癌人宫颈癌HelaHela1mg/ml57.87157.87132.06832.06810.06110.06145.41845.41847.46347.4637.1197.119 流式细胞仪（PI单染）检测结果表明： 金蝉花孢子粉醇提物和野生蝉花粗多糖可使人胰腺癌SW1990及人白血病K562细胞周期阻滞在G2期； 金蝉花孢子粉醇提物可使人宫颈癌Hela细胞周期阻滞在G1期。肿瘤细胞死亡有哪几种形式？chromatin clumpmitochondria swellcellular componentsdisin

37、tegratemembrane rupturenuclear compactionorganelles intactnucleus fragments, membrane-bound apoptotic bodiesphagocytosis of apoptotic bodies,lysosomal degradationisolationmembraneautophagosomelysosomeautophago-lysosomenecrosisapoptosisautophagyThree forms of cell deathnecrosisapoptosisautophagyAP-au

38、tophagosomeAL-autophagolysosome肿瘤细胞死亡的主要形式： 坏死（necrosis） 凋亡（apoptosis） 坏死性凋亡（necroptosis ） 自噬（autophagy）（四） 流式细胞仪（Annexin V/PI双染）检测结果金蝉花能否诱导肿瘤细胞凋亡？图图4-1 金金 蝉花对人胰腺癌蝉花对人胰腺癌SW1990细胞凋亡的影响（细胞凋亡的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.4-1 Flow cytometric analyses of Annex

39、in V-FITC binding and PI uptake in SW1990 after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.3.85%43.77%12.11%5.31%ABCD左上象：死亡细胞左下象：活细胞右上象：晚期凋亡细胞右下象：早期凋亡细胞图图4-2 金蝉花对人白血

40、病金蝉花对人白血病K562细胞凋亡的影响（细胞凋亡的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.4-2 Flow cytometric analyses of Annexin V-FITC binding and PI uptake in K562 after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cica

41、dae; C: 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.3.35%52.59%33.35%3.16%ABCDFig.4-3 Flow cytometric analyses of Annexin V-FITC binding and PI uptake in Hela after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1

42、mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.图图4-3 金蝉花对人宫颈癌金蝉花对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响（细胞凋亡的影响（A：正常组；：正常组；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） 2.17%86.75%57.50%3.70%ABCD表表4-1 金蝉花对人胰腺癌金蝉花对人胰腺癌SW1990、人白血病、人白血病K562及人宫颈癌及人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响细胞凋亡的影响Tab.4-1 Flow cytometric analyses of Annexin

43、 V-FITC binding and PI uptake in SW1990、K562 and Hela after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. 细胞株细胞株浓度浓度对照对照孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖5-Fu5-Fu凋亡率凋亡率% %坏死率坏死率% %凋亡率凋亡率% %坏死率坏死率% %凋亡率凋亡率% %坏死率坏死率% %凋亡率凋亡率% %坏死率坏死率% %人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml4.934.930.320.3243.7743.777.27.21

44、2.1112.1113.3813.385.315.310.830.83人白血病人白血病K562K5621mg/ml3.363.360.110.1152.5952.5911.5111.5133.3533.3510.1710.173.163.160.040.04人宫颈癌人宫颈癌HelaHela1mg/ml1.171.170.180.1886.7586.753.783.7857.557.534.3334.333.73.70.120.12 流式细胞仪（Annexin V/PI双染）初步观察结果: 金蝉花孢子粉作用人胰腺癌SW1990、人白血病K562及人宫颈癌Hela细胞48小时后，凋亡率分别为43.

45、17%、52.59%和 86.75% ； 蝉花粗多糖作用人胰腺癌SW1990、人白血病K562及人宫颈癌Hela细胞48小时后，凋亡率分别为12.11%、33.35%、 57.5% 。 （五） 电镜观察结果核大，核型不规则，有切迹，核质比值大，核仁明显，细胞器丰富。（18000） 给药前人胰腺癌细胞胞核内核膜旁异染色质边集，细胞膜溶解消失，线粒体肿胀，内质网扩张 ，呈坏死性凋亡。（12000） 孢子粉（1mg/ml） 图图 5-1. 透射电镜观察金蝉花对人胰腺癌透射电镜观察金蝉花对人胰腺癌SW1990及人宫颈癌及人宫颈癌Hela细胞超微结构的影响细胞超微结构的影响胞核变小，核浆比值减小，核仁减

46、小，异染色质增多，沿核膜边集，呈早期凋亡形态 （22500） 。核膜旁异染色质边集，胞浆内空泡变性，可见自噬小体（18000） 。 人胰腺癌细胞粗多糖组（1mg/ml） 人胰腺癌细胞粗多糖组（1mg/ml） 核型不整，核膜有切迹，核浆比值大，双核仁，细胞表面有微绒毛（9000）。给药前人宫颈癌Hela细胞（1mg/ml） 核小，核异染色质边集在核膜旁，未见核仁 （22500）。人宫颈癌Hela细胞孢子粉组（1mg/ml） 人宫颈癌Hela细胞孢子粉组（1mg/ml） 核膜旁异染色质边集，可见自噬小体，脂质空泡（30000）。.核膜旁异染色质边集，胞质内线粒体肿胀，内质网扩张，细胞膜破损，呈坏死性凋亡（ 9000 ）人宫颈癌Hela细胞粗多糖组（1mg/ml） 透射电镜观察结果表明： 1. 金蝉花孢子粉和粗多糖可诱导人胰腺癌SW1990、人宫颈癌Hela细胞和人胰腺癌SW1990细胞凋亡。 2. 金蝉花孢子粉和粗多糖可诱导人胰腺癌SW1990及人宫颈癌Hela细胞坏死性凋亡。 3. 金蝉花孢子粉和粗多糖可诱导人胰腺癌SW1990及人宫颈癌Hela细胞自噬。 金蝉花孢子粉和粗多糖对肿瘤细胞形态和 肿瘤细胞膜有什么影响呢？细胞分裂末期，其中数对子细胞逐步分开，子细胞呈椭圆形（1000）。