实验五 霉菌的形态观察

1、实验中心网站：实验中心网站：http:/ 2010.12细菌生理生化反应细菌生理生化反应2 目的要求目的要求: : 1. 1.了解霉菌的形态观察的原理。了解霉菌的形态观察的原理。 2.2.学习并掌握观察霉菌形态的操作方学习并掌握观察霉菌形态的操作方法。法。 3.3.掌握青霉菌的形态特征。掌握青霉菌的形态特征。目的要求细菌生理生化反应细菌生理生化反应3青霉青霉青霉细菌生理生化反应细菌生理生化反应4霉菌 ( molds)一一 是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称, ,即即“发霉的真菌发霉的真菌”。通常指菌丝体比。通常指菌丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候较发达而又不产生大型子实体的

2、真菌。常在潮湿的气候下大量生长繁殖。（青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬下大量生长繁殖。（青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫菜、粮食和皮革等物体上，菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的结构，结构的每一个分枝上，生有成串的孢子，帚状的结构，结构的每一个分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青绿色，进行孢子生殖。）成熟的孢子呈青绿色，进行孢子生殖。） 细菌生理生化反应细菌生理生化反应5一一 霉菌是由许多交织在一起的菌丝体构成。在潮霉菌是由许多交织在一起的菌丝体构成。在潮湿条件下生长繁殖，长出丝状、绒毛状或蜘蛛湿条件下生长繁殖，长出丝状、绒毛状或蜘蛛网状的菌丝体，并在

3、形态及功能上分化成多种网状的菌丝体，并在形态及功能上分化成多种特化结构。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的特化结构。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉），有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉），有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。二二 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为得多（约为3-10m3-10m）, ,常是细菌菌体宽度的几常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容霉菌菌丝较粗

4、大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散。易飞散。细菌生理生化反应细菌生理生化反应6形态特征1 1. .属异养型真核生物，具有丝状或管状结构，单个分支属异养型真核生物，具有丝状或管状结构，单个分支称为菌丝。菌丝形成的网络状结构称为菌丝体。称为菌丝。菌丝形成的网络状结构称为菌丝体。2.2.通过有性或无性繁殖产生孢子。通过有性或无性繁殖产生孢子。3.3.营养菌丝（营养菌丝（vegetative myceliumvegetative mycelium）：吸取营养（）：吸取营养（营养营养菌丝，又称基质菌丝或一级菌丝，主要功能是吸收菌丝，又称基质菌丝或一级菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是

5、菌种鉴定的营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据重要依据 ）4.4.气生菌丝（气生菌丝（aerial myceliumaerial mycelium）：又称二级菌丝。）：又称二级菌丝。( (是是指从指从基质基质伸向空气中的伸向空气中的菌丝体菌丝体。菌类菌类的菌丝体多是的菌丝体多是匍匐在基质上，或是贯通基质而伸长的，为了孢子匍匐在基质上，或是贯通基质而伸长的，为了孢子的形成而生长气生菌丝。的形成而生长气生菌丝。) ) 5.5.繁殖菌丝繁殖菌丝: :孢子丝，进行繁殖。孢子丝，进行繁殖。细菌生理生化反应细菌生理生化反应7菌丝分类（classification）一一有隔菌丝有隔菌丝：在隔

6、菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。如曲霉和青霉相互沟通。如曲霉和青霉。细菌生理生化反应细菌生理生化反应8无隔菌丝无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体质量的长过程中只有核的分裂和原生质体质量的增加，没有细胞数目的增多。如

7、毛霉和根增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。霉。细菌生理生化反应细菌生理生化反应9细菌生理生化反应细菌生理生化反应10实验原理实验原理 霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多，分为菌大得多，分为基内菌丝基内菌丝和和气生菌丝气生菌丝。气生菌丝生长到一。气生菌丝生长到一定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。形态特征是识别不同种类霉菌的重

8、要依据。 细菌生理生化反应细菌生理生化反应11一扦片法1.将菌种接种在琼脂平板上，扦上灭菌后的盖玻片后培养，使霉菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片交接处生长并附着在盖玻片上。2.这种方法可观察到霉菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长时期的形态细菌生理生化反应细菌生理生化反应12一玻璃纸法1.玻璃纸是一种半透膜2.将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，将菌种接种于玻璃纸上，培养后，玻璃纸上会形成菌苔。3.可保持霉菌的自然生长状态，也便于观察不同时期的形态结构细菌生理生化反应细菌生理生化反应13实验步骤实验步骤一一1.配制培养基配制培养基1.配制配制200ml马丁氏液体培养基，每组分装马丁氏液体培养

9、基，每组分装1管后，加入管后，加入4g琼脂入锥形瓶中，塞上棉塞。琼脂入锥形瓶中，塞上棉塞。二二2.包扎灭菌包扎灭菌1.1）培养基加塞包扎）培养基加塞包扎2.2）包扎）包扎2个培养皿（每小组）个培养皿（每小组）3.3）玻璃纸灭菌：将玻璃纸剪成盖玻片大小）玻璃纸灭菌：将玻璃纸剪成盖玻片大小6片，用旧报纸隔层叠好灭菌片，用旧报纸隔层叠好灭菌(每小组每小组)三三灭菌条件：灭菌条件：121、30min细菌生理生化反应细菌生理生化反应14一一3.倒平板倒平板1.每组倒每组倒2个马丁氏平板个马丁氏平板二二4.扦片法扦片法1.接种接种：每小组用连续划线法接种青霉菌介入：每小组用连续划线法接种青霉菌介入一个马丁

10、氏平板中一个马丁氏平板中2.扦片：将灭菌的盖玻片垂直菌线以扦片：将灭菌的盖玻片垂直菌线以45度角插度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或或1/3(6片）片）3.培养：将接菌及扦片结束后的培养皿放入培养：将接菌及扦片结束后的培养皿放入28的培养箱倒置培养的培养箱倒置培养35d细菌生理生化反应细菌生理生化反应15细菌生理生化反应细菌生理生化反应16细菌生理生化反应细菌生理生化反应17细菌生理生化反应细菌生理生化反应18一一5.玻璃纸法玻璃纸法1.铺玻璃纸：在无菌操作下，用镊子将无菌玻铺玻璃纸：在无菌操作下，用镊子将无菌玻璃纸覆盖在琼脂平板上璃纸覆盖在琼脂平板

11、上2.接种：用接种环沾取少许青霉孢子接种入另接种：用接种环沾取少许青霉孢子接种入另一马丁氏平板中，接种方法在玻璃纸上方轻一马丁氏平板中，接种方法在玻璃纸上方轻轻抖落于玻璃纸上轻抖落于玻璃纸上3.培养；培养；2830培养培养35d细菌生理生化反应细菌生理生化反应19一6、液体接种法接种酵母菌入马丁氏液体培养基试管中，培养。细菌生理生化反应细菌生理生化反应20观察:一一 1.1.扦片法：无菌操作法小心用镊子将盖玻片抽出，扦片法：无菌操作法小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将有菌的一面轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将有菌的一面向上放于载玻片上，直接在显微镜下观察画图。向上放于

12、载玻片上，直接在显微镜下观察画图。 二二 2.2.玻璃纸法：用镊子取出一片玻璃纸，有菌的一面玻璃纸法：用镊子取出一片玻璃纸，有菌的一面向上放于载玻片上，直接在显微镜下观察画图。向上放于载玻片上，直接在显微镜下观察画图。细菌生理生化反应细菌生理生化反应21关键步骤及注意事项关键步骤及注意事项一一 1.1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。且不能倒平板要厚一些，接种时划线要密。且不能将培养基划破。将培养基划破。二二 2.2.插片时要有一定角度（插片时要有一定角度（4545度）并与划线垂直。度）并与划线垂直。三三 3.3.放玻璃纸时，使玻璃纸紧贴培养基表面，不放玻璃纸时，使玻璃纸紧贴培养基表面，不留空隙。留空隙。四四 4.4.扦片时要等到盖玻片完全冷却后在扦入培养扦片时要等到盖玻片完全冷却后在扦入培养基中。基中。细菌生理生化反应细菌生理生化反应2