人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段2ppt课件

1、多聚酶链式反响扩增多聚酶链式反响扩增DNA片段片段多聚酶链式反响多聚酶链式反响PCRl1、概念：、概念：l又称为基因的体外扩增法，是一种在体外又称为基因的体外扩增法，是一种在体外快速扩增特定基因或快速扩增特定基因或DNA片段的技术，片段的技术，它能以极少少量的它能以极少少量的DNA为模板，在几小为模板，在几小时内复制出上百万份的时内复制出上百万份的DNA拷贝，能有拷贝，能有效地处理由于样品中效地处理由于样品中DNA含量太低而难含量太低而难以对样品进展分析研讨的问题。以对样品进展分析研讨的问题。2、PCR原理l1DNA复制的条件：复制的条件：l模板模板亲代链亲代链l原料原料核苷酸核苷酸l能量能量

2、ATPl酶酶解旋酶等解旋酶等l适宜的温度：适宜的温度：PCR仪自动调控仪自动调控l适宜的适宜的PH：用一定的缓冲溶液调理：用一定的缓冲溶液调理l2参与的组分：参与的组分：参与的组分参与的组分在在DNA复制中的作用复制中的作用解旋酶解旋酶打开打开DNA双链双链DNA母链母链提供提供DNA复制的模板复制的模板4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸合成子链的原料合成子链的原料DNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DNA子链子链引物引物使使DNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸l3DNA复制方向：复制方向：DNA聚合酶不能从头开场聚合酶不能从头开场所成所成DNA，而只能从

3、，而只能从3端延伸端延伸DNA链，故链，故DNA复制需求引物。当引物与复制需求引物。当引物与DNA母链经过碱基互补母链经过碱基互补配对结合后，配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的聚合酶就能从引物的3端开场端开场延伸延伸DNA链，链，DNA的合成方向总是从子链的的合成方向总是从子链的5端端向向3端延伸。端延伸。l4DNA的热变性原理：在的热变性原理：在80100的温度的温度范围内，范围内，DNA的双螺旋构造将解体，双链分的双螺旋构造将解体，双链分开，这个过程称为变性；当温度缓慢降低后，开，这个过程称为变性；当温度缓慢降低后，两条彼此分别的两条彼此分别的DNA链又会重新结合成双链，链又会重新结合成

4、双链，这个过程称为复性。这个过程称为复性。l5PCR反响的条件：反响的条件：l一定的缓冲溶液；一定的缓冲溶液；lDNA模板；模板；l分别与两条模板链相结合的两种引物；分别与两条模板链相结合的两种引物；l四种脱氧核苷酸；四种脱氧核苷酸；l耐热的耐热的DNA聚合酶；聚合酶；l控制温度；控制温度；3、PCR过程3、PCR过程lDNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。数扩增。配方及微量移液器实验步骤预备好预备好PCR反响体系的配方反响体系的配方用微量移液器按配方在往微用微量移液器按配方在

5、往微量离心管中参与各组分量离心管中参与各组分盖严盖子，用手指悄然盖严盖子，用手指悄然弹击管壁混合反响液弹击管壁混合反响液离心离心10分钟分钟将离心管放入将离心管放入PCR仪上，设仪上，设置好循环程序进展反响置好循环程序进展反响实验操作循环程序DNA含量的测定稀释稀释对照调零对照调零测定测定计算计算DNA含量含量ug=50260nm的读的读数数 稀释倍数稀释倍数练习稳定1、关于、关于PCR技术的运用，错误的一项为技术的运用，错误的一项为哪一项哪一项A 古生物学、刑侦破案、古生物学、刑侦破案、DNA序列测定序列测定B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案序列测定、基因克隆、刑侦破案D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序序列测定列测定2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是技术最突出的优点是A 原理简单原理简单 B 原料易找原料易找C TaqDNA聚合酶有耐热性聚合酶有耐热性D 快速、高效、灵敏、易于操作快速、高效、灵敏、易于操作4、做、做PCR运用的微量离心管、枪头、缓冲液运用的微量离心管