中药化学-6黄酮-329

1、 分离黄酮类化合物常用硅胶、聚酰胺、葡聚糖分离黄酮类化合物常用硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶、氧化铝等填料。凝胶、氧化铝等填料。柱色谱法柱色谱法 一般为一般为吸附色谱吸附色谱，可以用于分离极性较小的异，可以用于分离极性较小的异黄酮、二氢黄酮和高度甲基化的黄酮。黄酮、二氢黄酮和高度甲基化的黄酮。 加水去活化后，为加水去活化后，为分配色谱分配色谱，可用于分离极性，可用于分离极性较大的多羟基黄酮及其苷类。较大的多羟基黄酮及其苷类。 （1 1）硅胶柱色谱）硅胶柱色谱 若母核结构相同，而若母核结构相同，而-OH-OH取代数目不同，则取代数目不同，则-OH-OH多的后出柱；多的后出柱； 易形成分子内氢键的易形成

2、分子内氢键的-OH-OH，其极性变小先出柱；其极性变小先出柱；如：邻二如：邻二-OH -OH 间二间二- -OH OH （RfRf值）值） 一般出柱顺序：苷元一般出柱顺序：苷元 单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷 多糖苷。多糖苷。出柱先后顺序：出柱先后顺序：吸附规律：吸附规律：极性大吸附能力强极性大吸附能力强（2 2）聚酰胺柱色谱）聚酰胺柱色谱 聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类等形成氢键，因而对这些物质产生了吸附作用。类等形成氢键，因而对这些物质产生了吸附作用。 聚酰胺分子中具有聚酰胺分子中具有酰胺羰基酰胺羰基，可与酚羟基形成氢键，主要，可与酚

3、羟基形成氢键，主要依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。分离原理：分离原理：吸附强弱取决于：吸附强弱取决于：化合物与聚酰胺化合物与聚酰胺形成氢键的能力形成氢键的能力。 形成氢键的基团越多，则吸附力越强；形成氢键的基团越多，则吸附力越强；聚酰胺对化合物的吸附力在水中有下列规律：聚酰胺对化合物的吸附力在水中有下列规律： 易形成分子内氢键，则吸附力减弱；易形成分子内氢键，则吸附力减弱； 不同类型黄酮化合物被吸附的强弱顺序：不同类型黄酮化合物被吸附的强弱顺序： 黄酮醇黄酮醇 黄酮黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 异黄酮异黄酮 芳香核、共轭双键多者芳香核、共轭双键多者

4、吸附力大；吸附力大；聚酰胺聚酰胺“双重色谱双重色谱”原理原理正相色谱正相色谱非极性固定相（非极性脂肪链）非极性固定相（非极性脂肪链）含水溶剂（甲醇含水溶剂（甲醇- -水，极性大）水，极性大） 苷（极性大）（柱色谱分离）苷（极性大）（柱色谱分离）苷元苷元 苷苷聚酰胺：聚酰胺：洗脱剂：洗脱剂：先洗脱：先洗脱：RfRf值：值：反相色谱反相色谱 分离苷元和苷时，聚酰胺柱色谱表现出双重色谱的性质：分离苷元和苷时，聚酰胺柱色谱表现出双重色谱的性质： 当流动相为水当流动相为水- -醇系统时，其为反相色谱；醇系统时，其为反相色谱； 当流动相为氯仿当流动相为氯仿- -甲醇系统时，其为正相色谱。甲醇系统时，其为正

5、相色谱。极性：水极性：水- -醇醇 聚酰胺聚酰胺 氯仿氯仿- -甲醇甲醇反相：固定相反相：固定相 流动相流动相正相与反相色谱正相与反相色谱硅胶硅胶 固定相固定相（硅醇）（硅醇） 流动相流动相（醇）极性时为（醇）极性时为正相正相聚酰胺聚酰胺 固定相固定相（聚酰胺脂肪链）（聚酰胺脂肪链） OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOCH3OOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOHHOOOOOHOHOHrha-glcABCDE聚酰胺聚酰胺TLC TLC RfRf值：值：聚酰胺柱色谱洗脱顺序：聚酰胺柱色谱洗脱顺序：E B A C DE B A C D 氧化铝对黄酮类化合物吸附力强，特别是具有氧化铝对黄

6、酮类化合物吸附力强，特别是具有3-OH3-OH或或5-OH 5-OH 、4-4-羰基及邻二酚羟基黄酮类化合物与铝离子络羰基及邻二酚羟基黄酮类化合物与铝离子络合而被牢固吸附在氧化铝柱上，难于洗脱，所以很少应合而被牢固吸附在氧化铝柱上，难于洗脱，所以很少应用。用。 通常情况下，要求在分子的结构中无酸性基团，或通常情况下，要求在分子的结构中无酸性基团，或ArAr-OH-OH被甲基化被甲基化，往往也可以用氧化铝柱分离，往往也可以用氧化铝柱分离。（3 3）氧化铝氧化铝柱色谱柱色谱原理原理: : a a 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。 凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于凝

7、胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目游离酚羟基的数目。 b b 分离苷时，则分子筛的属性起主导作用。分离苷时，则分子筛的属性起主导作用。 在洗脱时，黄酮甙类大体上是按在洗脱时，黄酮甙类大体上是按分子量由大到小分子量由大到小的顺序流出柱体。的顺序流出柱体。（4 4）葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶柱色谱柱色谱 VeVe/Vo/Vo越小，化合物越容易洗脱。越小，化合物越容易洗脱。 从表中从表中可以可以看出，看出，首先首先洗脱下来的是苷类成分，按照分子筛原理分离，然后是游离黄洗脱下来的是苷类成分，按照分子筛原理分离，然后是游离黄酮类成分，按照吸附原理分离。酮类成分，按照吸附原理分离。 黄酮类化合物在

8、黄酮类化合物在SephadexSephadex-LH 20-LH 20柱上的分离（甲醇为洗脱剂）柱上的分离（甲醇为洗脱剂）黄酮类化合物黄酮类化合物取代情况取代情况VeVe/Vo/VoA A 芹菜素芹菜素5,7,4-5,7,4-三三OHOH5.35.3B B 木犀草素木犀草素5,7,3,4-5,7,3,4-四四OHOH6.36.3C C 槲皮素槲皮素3,5,7,3,4-3,5,7,3,4-五五OHOH8.38.3D D 杨梅素杨梅素3,5,7,3,4,5-3,5,7,3,4,5-六六OHOH9.29.2E E 山萘酚山萘酚-3-3-半乳鼠李糖基半乳鼠李糖基-7-7-鼠李糖苷鼠李糖苷三糖苷三糖苷3

9、.33.3F F 槲皮素槲皮素-3-3-芸香糖苷芸香糖苷双糖苷双糖苷4.04.0G G 槲皮素槲皮素-3-3-属李糖苷属李糖苷单糖苷单糖苷4.94.9比较它们酸性的强弱比较它们酸性的强弱D C B A比较它们酸性的强弱比较它们酸性的强弱C A B D酸性酸性极性极性比较其酸性和极性的大小：比较其酸性和极性的大小：A C B D；D C B A。 用硅胶柱色谱分离下列一组化合物，用用硅胶柱色谱分离下列一组化合物，用CHClCHCl3 3-MeOH-MeOH进行洗脱，进行洗脱，这四个化合物流出顺序为这四个化合物流出顺序为C A B DOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOHOOOHOHOHOH

10、CH3CH3 以聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇以聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇液洗脱时的洗脱先后顺序：液洗脱时的洗脱先后顺序： A AC CB BC A BB BA AC COOOHHOOHOHOOOHOHHOOHO葡萄糖甙OOOHHOOHOH 以聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇以聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇液洗脱时的洗脱先后顺序：液洗脱时的洗脱先后顺序： B A C 用硅胶柱层析，以不同浓度的氯仿用硅胶柱层析，以不同浓度的氯仿- -甲醇进行梯度洗脱，流出柱甲醇进行梯度洗脱，流出柱外的顺序是外的顺序是 ( )( )( )( ).( )(

11、)( )( ). 用聚酰胺柱层析，以不同浓度的乙醇用聚酰胺柱层析，以不同浓度的乙醇- -水进行梯度洗脱，流出柱水进行梯度洗脱，流出柱外的顺序是外的顺序是 ( )( )( )( ). ( )( )( )( ). OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOGlcOOHOOHOHOGlcRhaABCDA AA AB BB BC CC CD DD DOOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOHOOHOOHOHOGlcOOHOOHOHOGlcRhaABCD在硅胶柱色谱上的出柱顺序为在硅胶柱色谱上的出柱顺序为 （ ） （ ） （ ）在聚酰胺柱色谱上的出柱顺序为在聚酰胺柱色谱上的出柱顺序

12、为 （ ） （ ） （ ）在葡聚糖凝胶柱色谱上的出柱顺序为在葡聚糖凝胶柱色谱上的出柱顺序为 （ ） （ ） （ ）OHOOOHO-GlcOHOHAOOHHOOOHOHBOOHHOOOHC分析比较分析比较以下三个化合物以下三个化合物A AA AB BB BC CC CA AB BC C第第5 5节节 黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识 一、理化检识一、理化检识1.1.性状性状 黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮苷类）为黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末。无定形粉末。 2.2.颜色颜色 多呈黄色多呈黄色（一）物理检识（一）物理检识3.3.旋光性旋光性 游离的各种苷元

13、母核中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄游离的各种苷元母核中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外，其余则无光学活性。苷类由于在结烷及黄烷醇有族光性外，其余则无光学活性。苷类由于在结构中引入糖的分子，故均有旋光性，且多为左旋。构中引入糖的分子，故均有旋光性，且多为左旋。 4.4.溶解度溶解度 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷和苷元、黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。 母核检识：母核检识： 盐酸盐酸- -镁粉反应镁粉反应 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮

14、醇 四氢硼钠反应四氢硼钠反应 二氢黄酮（醇）类二氢黄酮（醇）类 五氯化锑反应五氯化锑反应 查耳酮类查耳酮类取代基团检识：取代基团检识： 锆盐锆盐- -枸橼酸反应枸橼酸反应 3-OH3-OH、 5-OH5-OH黄酮鉴别黄酮鉴别 氨性氯化锶反应氨性氯化锶反应 邻二酚羟基邻二酚羟基（二）化学检识（二）化学检识 纸色谱适合分离检识各种类型黄酮类化合物，包括苷纸色谱适合分离检识各种类型黄酮类化合物，包括苷和苷元。双向纸色谱能检识植物粗提物中黄酮类化合物存和苷元。双向纸色谱能检识植物粗提物中黄酮类化合物存在的最好方法之一。在的最好方法之一。 原理：原理：分配原理分配原理适用范围：适用范围：游离黄酮（苷元）

15、及黄酮苷的分离鉴别游离黄酮（苷元）及黄酮苷的分离鉴别 二、色谱检识二、色谱检识（一）纸色谱（一）纸色谱双向双向PCPC 苷元的反相色谱行为苷元的反相色谱行为: : 平面型分子水溶性平面型分子水溶性 非平面型分子非平面型分子平面型分子平面型分子: : 黄酮黄酮( (醇醇) )、查耳酮的、查耳酮的RfRf小小, , 几乎留在几乎留在 原点不动原点不动(R(Rf f 0.02); 单糖苷双糖苷一般:苷元在0.70以上，而苷则小于0.7。ABCDABCD（二）薄层色谱（二）薄层色谱（TLC）： 用于分析与鉴定弱极性黄酮类化合物。用于分析与鉴定弱极性黄酮类化合物。 展开剂：甲苯展开剂：甲苯- -甲酸甲酯

16、甲酸甲酯- -甲酸甲酸(5:4:1)(5:4:1)， 苯苯- -甲醇，氯仿甲醇，氯仿- -甲醇等。甲醇等。： 适合于含游离酚适合于含游离酚OHOH的黄酮及其苷类的分析。的黄酮及其苷类的分析。 聚酰胺对黄酮类化合物吸附能力强，大多数展开剂中聚酰胺对黄酮类化合物吸附能力强，大多数展开剂中含有醇、酸或水。含有醇、酸或水。陈皮提取物薄层层析，氯化铝显色陈皮提取物薄层层析，氯化铝显色独活提取物薄层层析独活提取物薄层层析黄芪提取物薄层层析荧光检识黄芪提取物薄层层析荧光检识 红移：红移：吸收峰位置向长波方向移动吸收峰位置向长波方向移动紫移：紫移：吸收峰位置向短波方向移动吸收峰位置向短波方向移动紫外光谱图提供

17、两个重要的数据：紫外光谱图提供两个重要的数据： 吸收峰的吸收峰的位置（横坐标位置（横坐标- -波长）波长）和吸收光谱的和吸收光谱的吸收强度吸收强度。 紫外光谱图紫外光谱图第第6 6节节 黄酮类化合物的结构研究黄酮类化合物的结构研究 一、一、UVUV光谱在黄酮类化合物结构研究中的应用光谱在黄酮类化合物结构研究中的应用 测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的UVUV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型； 在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UVUV谱和可见谱和可见光谱以了解光谱以了解3,5,7,3,43,5,7,3,4有无羟基及邻二酚羟基；有无羟基及邻二酚羟基； 苷

18、类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的元的UVUV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。 可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。 一般程序：一般程序：母核结构（交叉共轭系统）是产生紫外吸收的基础，其中母核结构（交叉共轭系统）是产生紫外吸收的基础，其中: : 由苯甲酰系统的电子跃迁产生的吸收峰为带由苯甲酰系统的电子跃迁产生的吸收峰为带II 240II 240280nm280nm； 由桂皮酰系统电子跃迁产生的吸收峰为带由桂皮酰系统电子跃迁产生的吸收峰为带I 300I 3004

19、00nm400nm。 （1）母核光谱特征）母核光谱特征： 不同母核的黄酮类化合物由于共轭系统（交叉共轭系统）不同母核的黄酮类化合物由于共轭系统（交叉共轭系统）的不同，由交叉共轭系统产生的带的不同，由交叉共轭系统产生的带I I或带或带IIII的峰位、峰形、吸收的峰位、峰形、吸收峰的强度也不相同，因此，据此可用于黄酮母核类型的判断。峰的强度也不相同，因此，据此可用于黄酮母核类型的判断。（一）黄酮类在甲醇中的（一）黄酮类在甲醇中的UV特点特点黄酮类化合物的结构鉴定不同类型黄酮的UV基本特征a. b. 共性：两者共性：两者UV光谱图形相似，带光谱图形相似，带、带、带均较强均较强区别：带区别：带位置不同

20、位置不同 黄酮：黄酮：304350nm 黄酮醇（黄酮醇（3-OH游离）：游离）：358385nm 黄酮醇（黄酮醇（3-OH取代）：取代）：328357nm1.黄酮及黄酮醇类黄酮及黄酮醇类 利用在利用在MeOH中的中的UV区别黄酮区别黄酮和和黄酮黄酮醇醇类类Band I黄酮黄酮黄酮醇（黄酮醇（3-O3-O被取代）被取代）黄酮醇（黄酮醇（3-OH3-OH游离）游离）328357304350358385 黄酮类黄酮类在在MeOH中中B环氧环氧代代对对Band I的影的影响响OOOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOH3,5,7-3,5,7,4-3,5,7,3,4-三羟基黄酮四羟基黄酮

21、五羟基黄酮高良姜素山奈酚槲皮素359367370红移红移红移红移OOOHOOOHOHOOOHOHOH7-5,7-5,6,7-羟基黄酮二羟基黄酮三羟基黄酮252262274红移红移 黄酮类在黄酮类在MeOH中中A环氧代对环氧代对Band II的影响的影响252268274红移红移红移红移OOHOOHOHOHOOHOOHOHOHOH c.d.共性：带共性：带为主峰，带为主峰，带很弱，常在主峰的长波方向有一肩峰。很弱，常在主峰的长波方向有一肩峰。区别：带区别：带峰位不同峰位不同 异黄酮：异黄酮： 245270nm 二氢黄酮（醇）：二氢黄酮（醇）：270295nm2.异黄酮、二氢黄酮（醇）类异黄酮、二

22、氢黄酮（醇）类OOOOHOOHHOe. f.共性：带共性：带很强，为主峰，很强，为主峰， 带带较弱，为次强峰，带较弱，为次强峰，带:220270nm区别：带区别：带峰位不同峰位不同 查尔酮：查尔酮：340390nm 橙酮：橙酮： 370430nm 3.查尔酮及橙酮类查尔酮及橙酮类OHOHOOHOHOOCHOHOH（二）（二）加入诊断试剂的加入诊断试剂的UV光谱在黄酮类化合物结构研究中的应用光谱在黄酮类化合物结构研究中的应用诊断试剂对黄酮类化合物UV谱图的影响及结构的关系诊断试剂对黄酮类化合物UV谱图的影响及结构的关系200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOMeNaOMe -

23、 -OOOHHOOHOHOglc 61rha+50nm,+50nm,强度增加（不降）强度增加（不降）有有4 4 -OH -OH 1.NaOMeOOOHOOHOCH3OHrha200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOMeNaOMe - -+50nm+50nm，强度降低，强度降低有有3-OH3-OH，无，无4 4 -OH -OH 1.NaOMe碱性较弱，酸性强的碱性较弱，酸性强的Ar-OH解离解离带带，+520nm 示有示有7-OHOOOHHOOHOHOglc 61rha2.NaOAc（未熔融）（未熔融）200 300 400 500MeOHMeOH - -NaOAcNaOAc

24、 - -+12nm+12nm3. NaOAc/H3BO3：用于用于鉴鉴定定邻邻二二酚酚OH。 在醋酸在醋酸钠碱钠碱性下，性下，邻邻二二酚酚OH与与硼酸硼酸络络合，引起峰合，引起峰带红带红移。移。3. NaOAc/H3BO3OOOOBOHOHOOBHOHOAB带带 ，+510nm A环有邻二环有邻二Ar-OH带带，+1230nm B环有邻二环有邻二Ar-OH3. NaOAc/H3BO34. AlCl3 5. AlCl3 /HCl： 分子中有分子中有3-OH，5-OH，邻二酚，邻二酚OH时，可与时，可与Al3+络合，络合，引引 起吸收峰红移。起吸收峰红移。： 黄酮醇黄酮醇3-OH 黄酮黄酮5-OH

25、 二氢黄酮二氢黄酮5-OH 邻二酚邻二酚OH 二氢黄酮醇二氢黄酮醇3-OHAlCl3 和和AlCl3 /HClOOOOAl2+OOOHOHHOHCl/H2OOOOHOHHOHOOHOAlOAl2+2+AlCl3OOOOAl+OAlOOOHOHOHHO2+HCl/H2OOOOHOHOAl2+HOHOAlCl3OOOOAl2+OOOHOHHOHOHCl/H2OAlCl3AlCl3 和和AlCl3 /HClOOOHHOOHOHOglc 61rhaAlCl3 AlCl3/HCl-43nm-43nmB B环有邻二环有邻二ArAr-OH-OHAlCl3 和和AlCl3 /HCl 黄酮（醇）： 带 II、带

26、I均强母核光谱特征 二氢黄酮类、异黄酮类：带 II强、 带I弱 母核的推断母核的推断 （甲醇） 查耳酮、橙酮：带 II弱、带I强 取代基：OH等，为助色团 依红移规律推断取代基团依红移规律推断取代基团甲醇钠：强碱，所有酚羟基解离醋酸钠：碱性弱，酸性强的酚羟基解离 醋酸钠/硼酸：邻二酚羟基络和三氯化铝：3-OH，4-羰基 5-OH，4-羰基 络和 邻二酚羟基加入诊断试剂加入诊断试剂相应吸收峰红移相应吸收峰红移实例实例P.107OOOHOHOHOH木犀草素木犀草素 4357 二、二、1 1H-NMRH-NMR谱在黄酮结构研究中的应用谱在黄酮结构研究中的应用 常用溶剂有常用溶剂有CDClCDCl3

27、3，适用于测定极性较小的黄酮苷元。极性，适用于测定极性较小的黄酮苷元。极性较大的黄酮类化合物应用较大的黄酮类化合物应用DMSO-dDMSO-d6 6（全氘代的二甲亚砜）或将（全氘代的二甲亚砜）或将样品先制成三甲基硅醚衍生物，用样品先制成三甲基硅醚衍生物，用CClCCl4 4作为测定溶剂作为测定溶剂，但不能，但不能显示羟基质子特征，目前已基本不被采用。显示羟基质子特征，目前已基本不被采用。 用用DMSO-dDMSO-d6 6作为溶剂，对黄酮苷及苷元均能溶解，能测定作为溶剂，对黄酮苷及苷元均能溶解，能测定- -OHOH质子信号，但质子信号，但DMSO-dDMSO-d6 6沸点高，样品不易回收。沸点

28、高，样品不易回收。(一一) C环质子环质子1. 黄酮黄酮: H-3, d dH 6.3, s (尖尖单单峰峰)OOH2. 异黄酮异黄酮H-2受受 C=O 影响，影响，d dH 7.67.8, sOHO 3. 二二氢黄酮氢黄酮(醇醇)OOHAHBHX二氢黄酮二氢黄酮ABXABX系统系统 二氢黄酮醇二氢黄酮醇OOOHHAHB4. 查查耳耳酮酮及橙及橙酮类酮类OHH2345623456OCHO1234561234567苄氢S,6.50 6.70H-H-H-H-d, J = 17.0 Hz6.70 7.407.00 7.701) 5,7-二二OH取代取代 A环上只有环上只有H-6, H-8;为为间位偶

29、合间位偶合, d dH 5.706.90,d峰峰, H-6 较高场较高场OOH8OHHOH6（二）（二）A环质子环质子 2) 7-OH取代取代 H-5: C=O去屏蔽去屏蔽 ，d dH =8.0OOH8H5HOH6 H-5 H-6 H-8 d dd dJ5,6=Jo=9.0Hz J6,5=Jo=9.0Hz J8,6=Jm=2.5Hz J6,8=Jm=2.5Hz (三三) B环质子环质子1) 4-OR取代取代 为为AABB系统系统 四重峰四重峰d dH 6.57.9ORBABABORBOR 2) 3,4-二二OR H-6 H-2 H-5 d dH 7.27.9 6.77.1 dd d d Jo=

30、8.5Hz Jm=2.5Hz Jo=8.5Hz Jm=2.5Hz 3) 3,4,5-三三OR H-2,6d dH 6.57.5, sORORORB(四四) 糖上的质子糖上的质子黄酮苷类化合物上糖的质子信号（端基质子）黄酮苷类化合物上糖的质子信号（端基质子） 黄酮醇黄酮醇-3-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 5.70 6.00 黄酮醇黄酮醇-3-O-鼠李糖苷鼠李糖苷 5.00 5.10 黄酮类黄酮类 -7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 4.80 5.20 黄酮类黄酮类-4-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黄酮类黄酮类 -5-O-葡萄糖苷葡萄糖苷 黄酮类黄酮类-6 及及 8-C-糖苷糖苷甲氧基质子甲氧基质子甲甲氧基质子信号一

31、般在：氧基质子信号一般在：d dppm 3.50 4.10 (四四) 其他质子其他质子6-及及8-CH3dHdH 2.0且且6-CH3质质子子较较8-CH3质质子稍高子稍高场场0.2ppm三、三、1313C-NMRC-NMR谱在黄酮类化合物结构研究中的应用谱在黄酮类化合物结构研究中的应用 利用利用1313C-NMRC-NMR谱中黄酮类化合物的中央三个谱中黄酮类化合物的中央三个碳核信号的位置以及它们在偏共振去偶谱中的碳核信号的位置以及它们在偏共振去偶谱中的裂分情况裂分情况 。黄酮类化合物骨架类型的判断黄酮类化合物骨架类型的判断178.4163.2153.6133.7129.0126.3OO131

32、.8131.6125.2125.7124.0118.1107.6129.0126.3利用黄酮类化合物中芳香碳原子利用黄酮类化合物中芳香碳原子（A-A-环碳原子、环碳原子、B-B-环碳原子）的信号特征环碳原子）的信号特征确定取代基的取代图式确定取代基的取代图式黄酮母核黄酮母核1313C-NMRC-NMR信号归属信号归属四、质谱在黄酮类化合物结构研究中的应用四、质谱在黄酮类化合物结构研究中的应用方法：方法：EI-MSEI-MS（电子轰击质谱）、（电子轰击质谱）、FD-MSFD-MS（场解吸质谱）、（场解吸质谱）、FAB-MSFAB-MS（快原子轰击质谱）（快原子轰击质谱）苷元：苷元：EI-MSEI

33、-MS可得到分子离子峰可得到分子离子峰( (强强, , 往往为基峰往往为基峰) )；苷：苷：用用FD-MSFD-MS、FAB-MSFAB-MS或将甙作成甲基化或三甲基硅醚化或将甙作成甲基化或三甲基硅醚化衍生物，再测衍生物，再测EI-MSEI-MS。黄酮类化合物黄酮类化合物MSMS特征特征 测定分子量（测定分子量（M+M+）苷元（极性小）苷元（极性小）EI-MS（以前）：苷看不到（以前）：苷看不到,须制备成衍生物须制备成衍生物PM等）方能等）方能测得很弱的测得很弱的M+、苷元峰为基峰。、苷元峰为基峰。 FD-MS、FAB-MS、ESI-MS（目前）：可测得分子离子（目前）：可测得分子离子峰峰M+

34、或准分子离子峰或准分子离子峰M+1、M+23等。等。EI-MSEI-MS裂解规律裂解规律1 1分子离子峰为基峰分子离子峰为基峰M +M +用于测定分子；用于测定分子；2 2主要碎片离子峰为裂解途径主要碎片离子峰为裂解途径I I 产生的产生的A1A1和和B1B1及裂及裂解途径解途径IIII产生的产生的 B2B2+ +。取代基团推断（碎片离子峰）取代基团推断（碎片离子峰）苷（极性大、难气化、与热不稳定）苷（极性大、难气化、与热不稳定）裂解途径裂解途径I I（RDARDA裂解）：裂解）：OOAB+.+.+.+.+.MOCOCHCA1B1裂解途径裂解途径IIII：OOAB+.+.+.+.MCOB2OC

35、HC+ 通常，上述两种基本裂解途径是相互竞争、相互制约的。并且，途通常，上述两种基本裂解途径是相互竞争、相互制约的。并且，途径径I I裂解产生的碎片离子丰度大致与途径裂解产生的碎片离子丰度大致与途径IIII裂解产生的碎片离子的丰度裂解产生的碎片离子的丰度互成反比。互成反比。m/z=222m/z=105m/z=222m/z=102m/z=120 两种途径裂解得到的碎片离子两种途径裂解得到的碎片离子A1A1、B1B1、B2B2等，等，保留着保留着A-A-环、环、B-B-环的基本骨架，且碎片环的基本骨架，且碎片A1A1与相应与相应的的B1B1碎片的质荷比之和等于分子离子碎片的质荷比之和等于分子离子M

36、+M+的质荷的质荷比。比。根据结果推断结构：根据结果推断结构： 母核推断母核推断 A A、B-B-环取代情况确定环取代情况确定 槐米为豆科植物槐（槐米为豆科植物槐（SophoraSophora japonica L. japonica L.）的花蕾。其主要有效）的花蕾。其主要有效成分为芸香苷（又称芦丁），有维生素成分为芸香苷（又称芦丁），有维生素P P样作用，能保持和恢复毛细血样作用，能保持和恢复毛细血管的正常弹性，临床上常作为治疗高血压的辅助药和毛细血管脆性所致管的正常弹性，临床上常作为治疗高血压的辅助药和毛细血管脆性所致出血的止血药。出血的止血药。第第7 7节节 含黄酮类化合物的中药实例含

37、黄酮类化合物的中药实例 芸香苷为淡黄色的粉末或细微针状结晶，常含芸香苷为淡黄色的粉末或细微针状结晶，常含3 3分分子结晶水，加热至子结晶水，加热至185185以上熔融继而分解。以上熔融继而分解。 在冷水中溶解度为在冷水中溶解度为1:100001:10000，沸水中，沸水中 1:2001:200，冷乙，冷乙醇中醇中1:6501:650，沸乙醇中，沸乙醇中1:601:60，可溶于乙醇、丙酮、乙酸，可溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶和碱性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿乙酯、吡啶和碱性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿及乙醚中及乙醚中槐米粉末加约6倍水及硼砂适量，煮沸，在搅拌下加入石灰乳至pH89。在保持该pH条件下，微沸2030min，随时补充失去的水分，趁热抽