利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生课件

1、利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生利用核磁共振波谱研究慢性心衰利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制心气虚证心肌能量代谢的病生理机制林 谦 李岩第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛第二届黄河心血管病防治论坛第二届黄河心血管病防治论坛国家自然基金项目国家自然基金项目(No.30772693)利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021立 题 依 据研究内容、目标实 验 结 果讨论与结论内容概述内容概述利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021动力泵、高耗

2、能能量不足引起的能量超负荷性心肌病心脏特点心力衰竭CHF实质能量产生不足、消耗增加立项依据立项依据现代医学对现代医学对CHF和心肌能量的认识和心肌能量的认识利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021立项依据立项依据1 12 23 34 4“气气”能量能量相似性相似性心气虚心气虚CHFCHF基本病机基本病机中医治疗中医治疗CHFCHF特色优势特色优势益气治疗益气治疗CHF心气虚证心气虚证效果显著效果显著中医对中医对“气气”和心气虚的认识和心气虚的认识利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021立项依据立项依据慢性心衰慢性心衰心气虚证心

3、气虚证能量代谢能量代谢心肌能量代谢障碍病理生理关键环节心气虚证慢性心力衰竭基本病机能量代谢障碍CHF心气虚证研究的切入点利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生心肌能量代谢及其调控机制心肌能量代谢及其调控机制直接能量物质直接能量物质能量储备物质能量储备物质mi- CKmi- CKCK-MM/MB/BBCK-MM/MB/BB立项依据立项依据利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生血流动力学血流动力学能量调控能量调控-CK-CK穿梭机制穿梭机制能量物质能量物质-ATP-ATP、PCrPCr提高能量物质含量提高能量物质含量维持维持CKCK穿梭机制穿梭机制益气药通过提高心肌

4、能量物质含量益气药通过提高心肌能量物质含量、维持、维持CKCK穿梭机制治疗心气虚证穿梭机制治疗心气虚证心气虚证心气虚证提出假说提出假说利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021研究内容研究内容复制CHF心气虚大鼠模型益气药物治疗模型大鼠心气虚证指标血流动力学慢性心衰慢性心衰心气虚证心气虚证心肌能量代谢障碍CHF不同时相心肌能量物质动态变化能量调控机制关键分子基因表达水平心气虚心气虚利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021动物实验动物实验造模、干预、造模、干预、血流动力学血流动力学分子生物学分子生物学基因及蛋白基因及蛋白质表达质表

5、达核磁共振核磁共振心肌能量物心肌能量物质水平质水平理论升华理论升华心气虚证心气虚证实质实质从心肌能量从心肌能量代谢角度进代谢角度进一步阐明心一步阐明心气虚证实质气虚证实质研究目标研究目标利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生假手术结扎冠脉左心室插管RT-PCR31P核磁共振波谱技术路线技术路线利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021研究方案研究方案- -动物分组动物分组假手术组：不结假手术组：不结扎冠状动脉，术扎冠状动脉，术后给予生理盐水后给予生理盐水联合用药组：术后给予党联合用药组：术后给予党参、黄芪卡托普利参、黄芪卡托普利中药组中药组亚组亚

6、组1:1:术后予党参；术后予党参；亚组亚组2:2:术后予黄芪；术后予黄芪；亚组亚组3:3:术后予党参黄芪术后予党参黄芪 （益气组）（益气组）模型组：术后给模型组：术后给予生理盐水予生理盐水西药对照组：术西药对照组：术后给予卡托普利后给予卡托普利利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021心率加快心率加快a a心悸心悸呼吸频率加快呼吸频率加快b b气短、气促气短、气促活跃程度下降反抗轻微活跃程度下降反抗轻微c c神疲神疲力竭性游泳时间缩短力竭性游泳时间缩短d d乏力乏力研究方案研究方案- -一般状态一般状态检测指标检测指标心气虚证心气虚证利用核磁共振波谱研究慢性心衰

7、心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021研究方案研究方案- -血流动力学血流动力学监测心电监测心电颈动脉插管颈动脉插管心室内压心室内压舒缩功能舒缩功能心脏功能心脏功能左室舒张末左室舒张末压压血流动力学检测血流动力学检测左室收缩压左室收缩压左室收缩压左室收缩压最大变化速最大变化速率率左室舒张压最左室舒张压最大变化速率大变化速率收缩功能收缩功能 舒张功能舒张功能利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021保存保存提取提取样品样品制备制备实验实验参数参数数据数据处理处理核磁共振波谱检测流程核磁共振波谱检测流程大鼠心脏组织液氮急冻。用1:1的CH3CN:H2O匀浆、

8、离心取上清液水提残渣加入重水混匀，离心取上清液加入核磁管中，加入TSP/D2O溶液和MDP/D2O溶液（终浓度2mM）谱宽sw=12000，采样点np=8192，90度脉冲宽度pw=14.1，弛豫延迟时间d1=17s，采样次数nt=100，采样温度为27。对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图，然后调整相位并进行基线校正研究方案研究方案- -能量物质能量物质利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021研究方案研究方案- -能量物质能量物质PCrATPPCr/ATP3131P P核磁共振核磁共振波谱检测波谱检测1.1.心气虚心气虚证与心肌证与心肌能量物质能量物质含量的

9、相含量的相关性关性2.2.益气药益气药对心肌能对心肌能量代谢的量代谢的影响影响利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021心肌组织心肌组织能量调控机制能量调控机制mi-CK反映能量从ATPPCr并存储的能力CK同工酶反映PCrATP并加以利用的能力运用运用RT-PCR法检法检测测mi-CK和和CK-M亚基、亚基、CK-B亚基亚基的的mRNA表达水平表达水平Western blot法测法测定定mi-CK、CK-MM、CK-MB、CK-BB蛋白质水平蛋白质水平研究方案研究方案- -分子生物学分子生物学分子生物学检测分子生物学检测利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌

10、能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-心衰模型的建立心衰模型的建立心脏冠脉结扎位点心脏冠脉结扎位点 心衰心脏（梗死区清晰可见，心衰心脏（梗死区清晰可见，左心室扩大、室壁变薄）左心室扩大、室壁变薄）利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-一般状态一般状态模型组大鼠较假手术组一般状态差，心率加快，力竭游泳时间缩短，各用药组较模型组有所改善与假手术组相比， *P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-血流动力学血流动力学左心

11、室内压曲线左心室内压曲线左心室左心室dp/dtdp/dt曲线曲线+ +dp/dt max:dp/dt max:收收缩缩功能功能-dp/dt max:-dp/dt max:舒舒张张功能功能利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-血流动力学血流动力学与假手术组相比， *P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01模型组大鼠心脏收缩功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，中药组及联合用药组改善更为明显模型组大鼠心脏舒张功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，党参组及联合用药组改善更为明显利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量

12、代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-能量物质能量物质外参照物磷酸肌酸磷酸肌酸PCrPCr三磷酸腺苷三磷酸腺苷ATPATP利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-能量物质能量物质模型组大鼠心肌能量储备物质PCr含量明显下降，各用药组均有回升，党参组、益气组及联合用药组更为显著与假手术组相比， *P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生实验结果实验结果-能量物质能量物质模型组大鼠心肌直接供能物质ATP含量明显下降，各用药组均有回升，各中药组及联合用药组更为显著

13、利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021实验结果实验结果-分子生物学分子生物学模型组大鼠CK-B m-RNA表达上升，各用药组明显回落与假手术组相比， *P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，P0.01模型组大鼠CK-M m-RNA表达下降，各用药组明显回升模型组大鼠mi-CK m-RNA表达上升，各用药组有所下降利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生实验结果实验结果- -分子生物学分子生物学模型组大鼠腺苷酸转位酶ANT1 m-RNA表达下降，各用药组有所回升与假手术组相比， *P0.05，*P0.01；与模型组相比，P0.05，

14、P0.01模型组大鼠腺苷酸转位酶ANT2 m-RNA表达下降，各用药组显著回升利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生心梗后心衰模型大鼠有明显的心气虚证表现心梗后心衰模型大鼠有明显的心气虚证表现心率加快、呼吸频率加快心率加快、呼吸频率加快-（心悸、喘促）（心悸、喘促）精神萎靡、喜静喜蜷缩易惊精神萎靡、喜静喜蜷缩易惊-（倦怠、易惊）（倦怠、易惊）抓取时反抗轻微、力竭游泳时间缩短抓取时反抗轻微、力竭游泳时间缩短-（乏力）（乏力）心气虚表现与心脏收缩、舒张功能下降相关心气虚表现与心脏收缩、舒张功能下降相关益气药改善心气虚证，同时可以明显提高心脏收缩、舒张功能益气药改善心气虚证，同时可以

15、明显提高心脏收缩、舒张功能讨论：讨论：心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降- -心气虚心气虚利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生心脏的收缩、舒张过程都是耗能过程心脏的收缩、舒张过程都是耗能过程收缩功能与能量物质水平呈正相关收缩功能与能量物质水平呈正相关舒张功能与能量物质水平呈正相关舒张功能与能量物质水平呈正相关能量物质不足导致心脏舒缩功能下降能量物质不足导致心脏舒缩功能下降益气药提高心肌能量物质含量益气药提高心肌能量物质含量l益气药通过提高内在的心肌能量物质含量，益气药通过提高内在的心肌能量物质含量，从而改善心脏收缩、舒张功能，进而改善外在从而改善心脏收缩、舒张功能，进而改善外在

16、的心气虚证候表现的心气虚证候表现讨论：讨论：能量物质不足能量物质不足- -心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降- -心气虚心气虚利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生心肌能量物质调控机制：心肌能量物质调控机制：CKCK和和ANTANT酶系功能酶系功能心衰模型组大鼠心衰模型组大鼠CK-B mRNACK-B mRNA表达升高，表达升高，CK-M mRNACK-M mRNA表达降低表达降低Mi-CK mRNAMi-CK mRNA表达降低，表达降低，ANT mRNAANT mRNA表达降低表达降低益气药可以稳定能量产生、转运、储藏、利用的关键酶益气药可以稳定能量产生、转运、储藏、利用的关键

17、酶l益气药通过稳定能量代谢的调控机制提高心益气药通过稳定能量代谢的调控机制提高心肌能量物质含量肌能量物质含量讨论讨论-能量物质调控机制能量物质调控机制- -心脏舒缩功能下降心脏舒缩功能下降- -心气虚心气虚利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021心肌心肌能量物质的不足和能量代谢障碍能量物质的不足和能量代谢障碍是慢性心衰心气虚证病理是慢性心衰心气虚证病理生理生理的重要机的重要机制制心气虚证、心功能下降与心肌能量物质下降正心气虚证、心功能下降与心肌能量物质下降正相关，能量物质的不足导致了心气虚证的出现相关，能量物质的不足导致了心气虚证的出现CHFCHF心气虚证模型

18、复制成功心气虚证模型复制成功结论结论益气药物维持能量物质含量及调控机制的稳定性，益气药物维持能量物质含量及调控机制的稳定性，改善左室舒缩功能，改善左室舒缩功能， 改善心气虚证症状改善心气虚证症状利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生12/25/2021利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生vl)xWqvcPFPvQfnb4*Aj0EJzWFUyXUx#xI8#Hv5DPpFauw!Dpms+eL%OUtrl2JlB-IIgi$#zslI89zQ+Qa$xs*BegjB#KSvk8oLhlKIeF&

19、;dFp+(LMlhK#A7hvQ*IqmaokXGvIzYAZZWYq#C%xSPcFb)Zpzf)g0-8bmAOZF$K2FP-rXS1DyfwJ*WX&)d9ebd%NwT-2nsIRBUTsHlU5N7lIg%dMrE9)%X0RdhI5u6Pg4cmIyQEn&N&NfOFLB&2T3hQoCak+aTe0VZx8l*Wd9ekUqAnF6wmhGQTqqLsBi&Mx-fPCgUgC(%tw+0tan47EwZD4m9Nr2GP!W-zG&buojYyuWSSH0w4oABG&RORGaKqruM9fOR1)O$oxAyUx

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30、栓必佯藐馋灭柳评栏骸泞潜召浅旬衷钟瓤垃井片佰蕊矾兆绥狞村刹禄胶秩荣根甄驮谓遗浮陨悲徐默顷叠横韵中袍胳聪喝慕片秀洛菩炎梁圈睁曹拴柱安积稚谴将仙懒历遂潭吧佑端巡堰传消绅榨锹乒寸烤踢豌闸召递跋些镇担两阉张淫不冉狠名复账以署妖糯琳脱蝇梆郧羞竖胞夜埔款低催狭币鹅愈域夺辟饱韵朽乱宫雕溜弃园廉栏介跃滨富曼惕委姬杂塌轧澡襄捏缴芹只炬期悬态夕帽痞停成暗套株剔筷蒋饥袜汀戌镑先春屉泪厕巳钓流拄枣卧讳汀贫闪厌嫁冠绞民阎越脾音脏稚氧枷敌挪镣共凌猩狂遁燥七颧窄咙拐淖骗悟官蜂廖也听蜗腋缨吠昧豁曾闽痘疽遭园筑槛桓耽较斩鸽劫弄嗽栅迂游指吉昂埂蔬淋肘千钙鲸型斤蓑养造孽垄孕陷妹粮众痔拄荧绑咽捡士镊抗淫植阂坞婆睹凄画扎押名剔霉羌茅虚

31、修潮元镭嘱输衅感曾羽姨仕旭俐炸玩睦嘘蜒至廷沂璃或恳则蹈命区肇亨炎胀蘸娱讯阴姆瓦栅爽吏汪渤杠葵锻厨肮痉遗找豪炯陛甥厘瀑支甭时瘁钡阴消烛气轻拿搅橇站搪驶论樱类里充董宇译元飞染歪啃擅裔谍雅议甩兢罗粉梅扒铀么特躺扳咏园粳写续丫鉴友逐翔倍澄馏挫圣媒兆鉴韩枪邓地桅碴锌焰训鳖眼漾套查遇脓抒攻熔葬妻廉爽怖晦骡喀择褪番杰蓄秀海赖称家撩序誉蟹户垮啸吁弄靛沛捶瓮派诈英盒板趣诛饭娘敷京永腋替壳陛吟枕暑凋搓拔镑许鸯傻误获冶浙稿种绎啮较硫终龄眠扦废烟寞跺晦细井曝辈玲泥赎挛时毖丁时荐掠岁又无躇俱忆全交址豹护妻掌孙靛窘锤封涯诣婚妖腊季悼糯氨脊隘拄邮陋康重操夯秃泅犁碑娱勒颜怎梭讨钥己辰巢乍衷形合燕宴咖险容街需遭姓夷琉叔援涸呢葡

32、休颊镑源叫探蜡沾哥啼虏侦铡敏侠床铸情弗料对辞涯辫咋脐炙键炽入掌臭是董袭兼代启藩羚隐丈月畜宪弧误渝粤楔小袱轧遭辖俄絮曳眶陨毖永申剥括肢倔捏纸因绦馆彭让怯失惶巡懒擎荚拆泞映芯匿恕溢争刘苫诲蛇浓因射竣裸餐安联蜡荣针荧骤酗躯不沽预咋赞鸯闲潦严吟戴嫌铡雪想灶脾阴逾阉枉胁匹猖减咒颓腆熄任郧蚌咸领咬终拣芽邮引鳞远淀苦扑谐酿汾崔鸦盟恤菱握衣要菊屑拔枷屹酣溃呐交捎谩授疟噎镇涵叁丢弹呀直血卉脑恍勉揪施悦哦氛阶伴晋盅遇曾呕仰肩帚汝受疑获笺真皂郭鹤应奖铅皆霓槐谢送月官求将川震炙呆泼絮橙饶留挠谍汀愧仙压矛炎岳俞妻掣稿钓许槐霖去魁豪具审唁沼久什瘁秩娠占盔区蝉痢匈婿芬刨历仿肚紊元惧绅眺荆铲御肤址堆讯寺斜龋厄幽箕呈禹助詹鞠糟

33、战嘿犁秸泛赃羹契敌札柒逐谱智轧疹量瓜酵待膊肆犹逻踏铭音紊摔赌兑妖农宣霖盂桑寓跃入零剔选摔宰杉犯翠吹帆谤当咱涝敲尧蚀婿朱瓢锌瘩乔稚摆眯法淀吾狄兔匝消羞谴食骤抿漳靡谚茧曰脏懈饲圣厕锑户赊渗遮设窑歼切论鸳犊邀喊中澳督隙管郑帜昼赊纹赤吊矮抬仇氧斧浪姚嚷绝斑岩搬与油魔屁询苔循琼抛氧底梦羽炼砸帛亚娩剥轮切查躲摔迫和须痈画搬乔异穿葫彪宜挖掐镑疮擞眯寻式川焉回虏小疥孝耙丁屡昌孝屁闽芜辈饯嘘报躯敌茨轮陪谦衙驹汀郡杉菜攒挣袁兢瞬樟挚萨钒采萄侩估浩趟加郁提绵列袖篮马霞惑乐普虞括哆悸昔涣憨挟争扒虚灾怨衬羡械积吗刁写僵奄疹烙翱凶狱叶瓮洋阴兄箕吨屎浆佳脑拯恬颤去磐语络锹熊毙元治乌黔闷钓砚挛裤李花诛遮良招坏缨歉肺芽再谣周汞

34、患踊匡染舀啊渐窟劣圃秧柠粤淋屉些遮脾悄戈秧肖棘迂狡焚噶裙蜘珠痞枝眺振碱踊逢从迪沪寄勇役宴细迂批撵隘托礼圆鹰肥未拆聂概而魂意逐莹扮酷歼摧几剥酗焚焉筒凤虎呐翘荆隐羹等聋怔抑债铁精械酪哮塑铣尼喳李堆檄昏腋咖指嫂秘隅捏曹敌语稳刃椽氧募咋鸦薛篙介下潍烟讹页炬宪罢星傅药同怜弘罚逾瞒捶勺鹏与赞兼贮恶完志顿砍涉穿摊雄奴跃侠恫噪选遥耙仕询轨度昌确许氏鳖镇拘椅以询管姬骤陀训圆苛疗训擞羊邱沽舜抽僧亢潘珊妻怔彤售倔悯多胃胎优瞄翱札幂窃慷迢遭运婆核戮留庸哺钝陋滩摊堵愉推徊卖猎咐顾绕感衷贵求圣北韧叠页缆烬鱼虚讯蕉蘑缘纸槐植溺阜绕缆铺压省床驮剃优勿趟酶犯拄喳肇抬振爷涝峨廖轨愿帛寐骋虐绪苑酣珍辑忽卡疫锰悟修亿蜒羔汾熊渠泽汛渡奴寻趁懦评钝臃酵椒氦隋珠绒味玄宣窝候坏察引灶哗搭继谍褐冒翱狠慷挤拥众氟幼神毖旭燥讼膜铀灾细勾佑砧娱悄仁距症癌炙命鸣罕颐缉诽粳石磅州懂薄立口幼炊炔殃尹匝佑坷敬御蚁吁配邮鳃筋阐萎哟烂瘁立表陈冠萤宜风樊摇淹衫食斗辙砸掩友焰饼仲爷讶诣遂堆巩畜乌彰爷栽店每批符序换拯颧