药审中心：含量测定分析方法验证的可接受标准简介

1、 药审中心：含景测定分析方法验证的可接受标准简介 药审中心：含量测定分析方法验证的可接受标准简介 审评四部黄晓龙 摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断 该分析方法的可行性。 关键词：含量测定分析方法验证可接收标准 在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以 保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为标准对各种分析方法的验证要求，我国已于 2005 年公布了分析方法验证的指导原那么。该指导原那么对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比拟 详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证

2、时的可接受标准，国际上已公布的指导原那么中也未发现相 关的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重 要性，大都也在按照指导原那么的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而 难以判断该分析方法是否符合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对含 量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1 .准确度 该指标主要是通过回收率来反映。 验证时一般要求分别配制浓度为 80%、100 %和 120 %的供试品溶液各 三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比拟，计算回收率。 可接受

3、的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 98.0%-102.0% 之间，9 个回收率数据的相对标准差 RSD应不大于 2.0% 。 2 .线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为: 在 80 %至 120 %的浓度范围内配制 6 份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。 以含量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y,进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数 R不得小于 0.998 , Y 轴截距应在 100 %响应值的 2 %以内，响 应因子的相对标准差应不大于 2.0% o 3 .精密度 1 重复性 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可

4、能相同的条件下进行测试，所得 6 份供试液含量 的相对标准差应不大于 2.0% o 2中间精密度 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12 个含量 数据的相对标准差应不大于 2.0% o 4 .专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全别离，别离度不得小于 2.0 o 以二极 管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于 980 o 5 .检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3o 的保存时间的相对标准差应不大于 2.0% 7 .耐用性 分别考察流动相比例变化 土 5%、流动相 pH 值变化土 0.2、柱温

5、变化5 C、流速相对值变化 土 20 %时，仪 器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于 2.0 ,主峰与杂 质峰必须到达基线别离；各条件下的含量数据 n=6 的相对标准差应不大于 2.0% o 8、系统适应性 6 .定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10。另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶液主峰 配制 6 份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0% ,主峰保存时间的相 对标准差应不大于 1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于 2.0 ,主峰与杂质峰必须到达基线别离，主峰 的理论塔板数应符合质量标

6、准的规定。 有关物质分析方法验证的可接受标准简介 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的 存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面， 也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、 灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已根本上 意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难 以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求

7、，提出了 在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1 .准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度 分别配制三个浓度的供试品溶液各三份例如某杂质的限度为 0.2%，那么可分别配制该杂质浓度为 0.1 %、 0.2 %和 0.3 %的杂质溶液，分别测定其含量，将实测值与理论值比拟，计算回收率，并计算 9 个回收率 数据的相对标准差RSD o 该工程的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 80%-120% 之间，如杂质的浓度为定量限，那么 该浓度下的平均回收率可放宽至 70%-130% ，相对标

8、准差应不大于 10% o 2 .线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在定量限至一定的浓度范围内配制 6 份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。 以含量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y,进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数 R不得小于 0.990 , 丫轴截距应在 100 %响应值的 25 %以内，响 应因子的相对标准差应不大于 10% 。 3 .精密度 1 重复性 配制 6 份杂质浓度一般为 0.1% 相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行 测试，所得 6 份供试液含量的相对标准差应不大于 15% o 2中间精密度

9、 配制 6 份杂质浓度一般为 0.1% 相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂 进行测试，所得 12 个含量数据的相对标准差应不大于 20% o 4 .专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全别离，别离度不得小于 2.0 o 5 .检测限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3o 6 .定量限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10。另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶 液杂质峰保存时间的相对标准差应不大于 2.0% ，峰面积的相对标准差应不大于 5.0% o 分别考察流动相比例变化 土 5%、流动相 pH 值变化0.2、柱温变化5 C、检测波长变化 5nm、流 速相对值变化20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测 试两次。可接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0 ,杂质峰与其他成分峰必须到达基线别离； 各条件下的杂质含量数据n=6 的相对标准差应不大于 2.0%，杂质含量的绝对值在 + 0.1 %以内。 8、系统适应性 配制 6 份相同浓度的杂质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0% ,保存时间的 相对标准差应不大于 1.0%。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0 ,理论塔板数应符合质量标准的规定。 9 .溶液稳定性 按照分析方法分别配