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文档简介
1、课下能力提升(十三)【基础题组】1.下列有关PCR的叙述,不正确的是()A.是一一种酶促反应B .引物决定了扩增的特异性C. PCR反应中的目的片段一般以 2n指数扩增D.扩增对象是氨基酸序列解析:选D PCR是一种体外迅速扩增 DNA片段的技术,它以极少量的DNA为模板, 以四种脱氧核甘酸为原料,在引物作用下使DNA聚合酶从引物的3端连接脱氧核甘酸,短时间内迅速复制上百万份的DNA拷贝,其扩增产量 y=a 2n, a代表模板DNA量,y代表DNA片段扩增后的理论拷贝数,n代表循环次数;在扩增过程中,被扩增的是 DNA序列,而不是氨基酸序列,因此 D项错误。2 .如图为DNA变性和复性示意图,
2、下列相关说法正确的是()A.向右的过程为加热(80100 C)变性的过程B,向左的过程是 DNA双链迅速冷却复性C.变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同D.图中DNA片段共有4个游离的磷酸基团、4个3端答案:A3 . PCR利用了 DNA的热变性原理,PCR仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器。 下列对PCR过程中“温度的控制”的说法,错误的是()A. PCR反应需要高温,是为了确保模板是单链B.延伸的温度必须大于复性温度,而小于变性温度C.要用耐高温的 DNA聚合酶D.需要耐高温的解旋酶解析:选D PCR过程中,DNA双链的解开不需要解旋酶,而是靠高温使其变性解体。 复性后,在耐高温的
3、Taq DNA聚合酶的作用下根据碱基互补配对原则合成新的DNA ,因此延伸的温度要大于复性温度但小于变性温度。4.下列对操作过程的叙述,错误的是()A. PCR反应中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸储水等在使用前必须进行高压 灭菌B. PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在 20 c储存C. PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后,迅速融化D.在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的吸液枪头都必须 更换解析:选C为了防止外源DNA等因素的污染,PCR反应中使用的微量离心管、枪头、 缓冲液以及蒸储水等在使用前必须进行高压灭菌;所用的缓冲液及酶应分装成小份保存, 并使用一次性
4、吸液枪头。 在冰箱中放置的缓冲液和酶取出后应放在冰块上缓慢融化,而不能迅速融化。5.标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步,这三大步需要的温度依次是 ()1. 92C、50C、72C8. 72C、50C、92C9. 50C、92C、72C10. 80C、50C、72C解析:选A 当温度上升到 90 c以上(9096 C)时,双链DNA解聚为单链,称之为 变性;当温度下降到50 C左右(4060 C)时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合,称为复性;当温度上升到72 C左右(7075 C)时,溶液中的四种脱氧核甘酸(A、T、 C、G)在Taq DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补
5、配对原则合成新的DNA链,称为延伸。11. PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器,它调控不同温度的目的是()95 C,使DNA分子变性,失去生物活性95 C,使DNA分子变性,解开螺旋55 C,使DNA分子开始复制、延伸 55 C,使DNA分子的两条单链与引物结合, 恢复活性 72 C,使DNA分子开始复制、延伸 72 C,使DNA分子恢复双螺旋结 构,恢复活性A.B.C.D.解析:选C PCR技术在温度上升到 90 C以上时,双链 DNA解聚为单链;当系统温 度下降到50 C左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;当系统温度上升到72 C左右时,溶液中的四种脱氧核甘酸在DNA
6、聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。12. 图所示为PCR扩增的产物,请分析此产物是哪次循环的产物()引物1inninn nnniiii niiiHiii ”i|iinTnTA.第一次循环B.第二次循环C.第三次循环D.第四次循环解析:选A 在PCR反应中,以引物为标记,第一次循环时,以加入的DNA为模板,两条DNA链可分别由引物I和引物H与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸,所以形成的每个DNA中只有一种引物;从第二次循环开始,上次产生的DNA分子又可作为模板参与反应,所以会形成 DNA分子两端均含引物的情况,如图所示,因此题干中所出现的情况 是第一次循环的产物。, I L
7、13. PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸储水使用前必须进行的关键步骤是 ()A.反复洗涤B.用酒精擦洗C.高压灭菌D.在20 C下储存解析:选C 为了避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、 枪头、 缓冲液以及蒸储水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在-20 c储存。使用前,将所需的试剂从冰箱内拿出,放在冰块上缓慢融化。【能力题组】14. PCR过程与细胞内的 DNA复制过程相比,主要有两点不同,它们是 ()PCR过程需要的引物是人工合成的单链 DNA或RNA PCR过程不需要DNA聚合 酶PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶,而是
8、通过对反应温度的控制来实现的PCR过程中,DNA不需要解旋,直接以双链 DNA为模板进行复制A.B.C.D.解析:选C PCR过程与细胞内的 DNA复制过程相比较,主要有两点不同:一是PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA ,长度通常为2030个核甘酸。二是 PCR过程中,DNA解旋不依赖解旋酶,而是通过对反应温度的控制来实现的。10.下列有关PCR技术的叙述,不正确的是 ()A.多聚酶链式反应是一种体外迅速扩增DNA片段的技术B,在用PCR技术扩增DNA时,DNA的复制过程与细胞内 DNA的复制类似C. PCR反应只需在一定的缓冲溶液中提供DNA模板以及四种脱氧核甘酸D. PCR
9、 一般经历三十多次循环,每次循环分为变性、复性、延伸三步解析:选C PCR是多聚酶链式反应的英文缩写,是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。在用PCR技术扩增DNA时,DNA的复制过程与细胞内 DNA的复制类似,也需要提 供模板(母链)、酶、原料、引物等条件。PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为变性、复性和延伸三步。11 .如图是PCR第二轮的产物a、b、c、d,它们分别是以 PCR第一轮产物的哪一条单 链DNA为模板复制产生的()PCR第一轮的产物IIIIIIII IIIIIIIIII IIIIIII 111IIIIIII IIIIIIIIIFTT大引物口、链、©链胃 11
10、口11111U11U 111J11L1111111 j 11L1111111U111.TTT1mlm-rI 11 I 11 ILI 11 I 11 I 11 I 口 11 I 11 川 11 I 11 I 11 I I I 口 11 I 11 11引物UA. C. 解析:选DB.D.因为PCR的过程需要引物,在第二轮循环过程中,DNA分子a、d形成时需要的模板链分别为链、链,DNA分子b、c形成时需要的模板链分别为链、链。12 .下列有关PCR技术中引物的叙述,正确的是 ()A.引物是一小段 DNA分子或双链RNA分子B.扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目C.两种引
11、物之间能够发生碱基互补配对D. DNA聚合酶只能从引物的 5端连接脱氧核甘酸解析:选B 引物是一小段单链 DNA分子或单链RNA分子;在DNA分子扩增时,需 要两种引物,由于新合成的子链都需要引物作为复制的起点,则扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目;两种引物分别与DNA母链之间发生碱基互补配对,并不是两种引物之间发生碱基互补配对;DNA聚合酶只能从引物的 3端连接脱氧核甘酸,从而使子链 DNA分子的复制方向只能是 5端一3端。13.结合图示回答下列问题:川物修仲变性引资显弹J 片忖二变性 引物靖'_ I周二与弓隘结合斯(1)PCR是一种DNA体外扩增技术。1
12、988年,PCR仪问世,并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。如图是 PCR技术示意图,请回答:引物是此过程中必须加入的物质,从化学本质上说,引物是一小段将温度加热到 ,使双链 DNA 变性,从而导致引物延伸需提供 作为原料。(2)现代科学研究发现,通过比较不同生物的 DNA序列,可以确定不同生物间的亲缘关 系。如图为编码甲、乙、丙三种生物血红蛋白的部分相对应的基因片段、DNA单链及DNA单链中的碱基序列。.因片段 UKA单链L|I 力f 4 -山山Mt口山口*/ 、口小g 1丁1 1 J 巾玉回t|丙二匚二一k -* iTfrlrltHTMilulxlTlMlMlTlTluli/rlTlN
13、lAlTl如果让c链和b链分另IJ与a链混合,能配对的碱基间则形成氢键,相同的碱基间则形成环状结构。试填写下表:环的数目配对的碱基对数目b链与a链混合c'链与a链混合分析表中数据可推测:与甲的亲缘关系最近的生物是 ;引起三种生物碱基序列差异的根本原因是。上述研究为生物进化提供了 (方面)的证 据,从 的本质上,揭示了生物进化的原因。解析:(1)DNA复制时,DNA聚合酶不能从头开始合成DNA ,而只能从3端延伸DNA链,因此需要一小段单链 DNA或RNA作引物,DNA聚合酶从引物的 3端开始延伸 DNA 链;导致DNA变性解开双链的温度是 80100 C;延伸实际就是 DNA合成的过程
14、,因此 需要四种脱氧核甘酸作为原料。(2)解答此题的关键是按照 DNA碱基互补配对原则, 找出不能配对的碱基间形成的环状结构数和碱基配对数,从而确定三种生物的亲缘关系。答案:(1)单链DNA或RNA 95 C 双链DNA分开形成两条单链四种脱氧核甘酸 (2)2 11 1 17丙 基因突变分子生物学遗传与变异14.在遗传病及刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析,PCR技术能快速扩增DNA片段,在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝,有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题:日域5,-G-GT-C-3*5'-6一仃一口£(引物I )
15、h饿3r-C-CA-G-5' 引物ID 95 5J-G-GT-C- T-C-CA-G-5?55 T |5r-G-fi-OH5-G-GTC- 3* 3J-C- CA-Gf72 *C(1)在相应的横线上写出引物n ,并在复性这一步骤中将引物n置于合适的位置。(2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。(3)若将作为原料的4种脱氧核甘酸用32P标记,请分析循环一次后生成的DNA分子的特点: ,循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为 。(4)PCR反应过程的前提条件是, PCR技术利用DNA的 原理解决了这个问题。(5)在对小品DNA进行分析的过程中发现,DNA掺
16、杂着一些组蛋白,要去除这些组蛋白可加入的物质是 。解析:(1)DNA聚合酶不能从头开始合成 DNA ,只能从3'端延伸DNA链,所以子链延 伸方向为53',引物I与b链部分碱基互补,引物n则与a链部分碱基互补,且连接到a链的3端,故引物H的结构为 5- G-A-OH ,复性结果为:HO A G 5'(2)经过一次循环后,产生的两个DNA分子分别含有引物I和引物H。(3)由于作为原料的4种脱氧核甘酸被32P标记,所以新合成的子链均含有放射性,一次循环后的两个DNA中各有一条链含32P,若复制n次,共产生子链2nX 2,其中只有DNA母链不含32p,则其 所占比例为2/(2
17、n 2)=1/2n。(4)DNA复制是以两条母链为模板,按照碱基互补配对原则进 行的。因此,首先要解旋,使两条母链的碱基暴露出来,才能按照碱基互补配对原则把相应 的碱基一个个地连接起来。DNA分子在80100 c的温度范围内变性,双链解开成单链,当温度慢慢降低时,又能重新结合形成双链。(5)DNA中杂质蛋白的去除可利用酶的专一性, 加入蛋白酶。答案:(1)52G A OHHO-A- G- 5'5- G-GT-C-3,(2)3 - C-CA G5'5- G-GT -C-3,5' g g -GT C3'3 - C- CAG5,(3)每个DNA分子各有一条链含 32P
18、 1/2n (4)DNA解旋 热变性 (5)蛋白酶15. PCR技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,操作步骤简介如下:第I步:准备“汤”和模板 DNAA.配制多聚酶链式反应“汤”配小震席长00 SPU缓冲液15叩U震化候溶液A SPU用物13 SPU利物3 SPUDNA聚合梅1 SPU矿物油1 SPU四肿脱软幡酉解答加4 SPU注:SPU是一种溶液的计量单位;矿物油可防止聚合酶在冻结时受伤害,以保证 酶的活性。B.准备要拷贝的 DNA如要拷贝自己的 DNA ,可以用一牙签轻刮口腔内壁,将牙签放入蒸储水中摇动。加热 使蒸储水沸腾,使细胞破碎释放出 DNA。用离心机离心后,去除蒸储水中较大的细
19、胞碎片。 这时上清液中就有了较纯的DNA。第H步:多聚酶链式反应将DNA(B)放入汤(A)中。水浴加热。首先,95 C,使DNA双螺旋打开,历时1 min;然后,55 C,使引物 结合到DNA上,历时30 s;最后,72 C,与DNA聚合酶结合使 DNA复制,历时1 min。重复步骤。每重复一次,即完成一次拷贝。根据上述操作过程回答下列问题:(1)以上材料可以说明()A. DNA的复制必须在活细胞中才能完成B. DNA能指导蛋白质的合成C.在合适的条件下,非细胞环境也能进行DNA的复制D. PCR技术是一种无性生殖技术(2)若用人体细胞内的遗传物质做PCR扩增,则扩增后的几百亿个 DNA分子起码可分为46种。要将其分开,可用电泳、染色等技术,常用的试剂有澳化乙锭等。有些试剂毒性 较强,因此应戴上化学实验专用手套作
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