HIV测定ELISA法珠海丽珠第二人民医院

1、HIV 测定 ELISA 法珠海丽珠)1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理(ELISA)定性检测人血清、血浆标本中的 HIV (1+2)型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的 监测。2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV (1+2)型抗体，预包被高纯度基因重组 HIV (1+2)型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体 反应，加入HRP标记HIV (1+2)型抗体抗原结合，形成抗原抗体酶标抗原 复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度(0D值)，根 据0D值判断HIV抗体的存在与否。3、性能参数灵敏度高( 0.5ng

2、/ml )4、标本要求( 1 )标本类型：血清，血浆。( 2)标本采集：见标本采集手册(3) 标本储存和运输：室温放置不超过 8小时，2-8C不超过72小时，-20C 可长期保存，应避免反复冻融( 4)标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。5、容器和添加剂类型6、试剂(1)试剂名称：人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。( 2)试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司( 3)包装规格： 96T/Kit(4) 试剂盒组成：、HIV酶标板；、HIV酶标试剂；、HIV( 1+2)型阳 性及阴性对照血清；、显色剂A液和B液；、此外还有浓缩洗涤液、终止液、 自封袋、封板膜

3、、说明书等。7、操作步骤 、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 25倍稀释至1000ml备 用。 、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孑L、阳性对照3孔，空白对照 2 孔。 、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100卩l，用封板膜封板后置37C温育60min。 、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5次程序，洗板后在干净纱布 上拍干。 、加酶：每孔加酶结合物100卩l （空白对照孔除外），充分混匀，用封板 膜封板后置37r温育30min。 、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5次程序，洗板后在干净纱布 上拍干。 、显色：每孔加入底物缓冲液 50卩l，TM

4、B 50卩l，轻轻振荡混匀，封板 后置37E避光显色10min。 、测定：每孔加终止液50卩l，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为 450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630 nm）,空白调零，读取各孔 OD值。 、判断结果：计算临界值（cut-off ）值。临界值=阳性对照值X 10% （若阳性对照OD值2.5按2.5计算）正常情况下，阴性对照孔的ODfiw 0.08。样品ODfiv临界值者为HIV抗体 阴性。若1孔阴性对照的ODfi>0.08应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的 ODfi> 0.08，应重复实验。正常情况下，阳性对照孔的ODfi0.80。样品OD

5、4;临界值者为HIV抗体 阳性。若1孔阳性对照的OD值V 0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的 ODfiv 0.8，应重复实验。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照全国 HIV检测管理规范送HIV确证实验室进行确证试验。10、质量控制：每块板设阴阳性及空白对照， 并于每次试验用自制质控血清作质控， 将质控 血清孔0D值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、 储藏温度、试验温度是否正常、 操作步骤是否正确， 直至重新试验使其在控。11、干扰和交叉反应12、生物参考区间 正常人阴性。13、 患者检验结果的可报告区间阳性表示 HIV 病毒感染。14、 临床意义用于HIV感染的