实验五叶绿素含量的测定

1、深圳大学实验报告课程名称:植物学生理实验实验项目名称： 五、叶绿素含量的测定学院专业:生物科学指导教师邹永东报告人：张嘉慧 学号：2010300077班级:3实验时间：2012年4月12日实验报告提交时间：2011年4月19日教务处制一、实验目的：1、熟悉使用分光光度计。2、学会如何测定叶绿素的含量。二、实验原理：叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或 二甲基亚砚等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长 的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度（也称为 光密度）,再根据叶绿素在该波的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据 色素分子

2、在长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。根据比尔定律，利用叶绿素a和b吸收光谱该波长下的消光系数，计算出浓 度.叶绿素a的80%丙酮提取液的最大吸收峰为663nm,叶绿素b的吸收峰为 645nm.这样,叶绿素a和b在两种波长下浓度与光密度的关系可用下式表示：D663= 82.04 Ca + 9.27 CbDM5= 16.75 Ca +45.60 Cb（单位:毫克/升）解得：Ca = 12.7 D663 - 2.69 D64?Cb = 22.9 D645 4.68 D663Ct = Ca + Cb = 20.2 D645 + 8.02 D663Ck = 4.7D440 -0.27 C a+b式中：C

3、a、Cb分别为叶绿素a和b的浓度，CT为叶绿素总浓度，Ck为 类胡萝卜素浓度.式中单位:毫克/升三、实验设备与材料：天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、表面皿、剪刀、90-95%乙醇、漏斗、滴管 新鲜菠菜叶、层析液配方：石油醴:乙醸：4： 1 （V/V）四、实验步骤:1、叶绿体色素的提取及叶绿体色素的含量测定：取菠菜（或其他植物）叶子2g,剪碎，放在研钵中，加石英砂和碳酸钙少 许，80%丙酮约2-3ml,研磨成匀浆，再加80%丙酮定容至25ml,用漏斗过 滤，即为色素提取液。叶片洗净、吸干、去大叶脉I称lg叶用丙酮研磨匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液）I滤液用80%W酮定容至25mLI适

4、.'勺稀释后测 A（X5、Af）63' A652、A4402、叶绿体色素的分离：（1）点样。取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液。点样后 晾干，再重复操作数次。（2）分离。在烧杯中加入推动剂，然后将滤纸插入试管中，使尖端浸入溶剂内（点样原点要高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁）。（3）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。五、实验现象：测得：D440=1.85D645=0301D663=0.688六、分析与讨论：Ca= 12.7D663-2.69D645= 12.7*0.688-2.69*0.301 =8.7376-0.80969=7.9279

5、1Cb=22.9Dm5-4.67D663=22.9*0.301-4.68*0.688=6,8929-3.21984=3.67306Ct=Ca+Cb=20.2Dm5+&02D663=20.2*0.301+ &02*0.688二6.0802+5.51776=11.59796Ck = 4.7D440 -0.27 C a+b=4.7* 1.85-0.27* 11.59796=8.695-3.131 =5.564CT+Ck=ll .59796+5.564=17.162色素在叶片中的含量（匸色素浓度（m£/l）x提取液总体积（L） x稀释倍数重量（g） x 1000=17.162*0.025*3/（2*1000）=0.064%七、实验结论：1、叶绿素a的浓度为7.928 mg/L2、叶绿素b的浓度为3.673 rng/lo3、叶绿素总量为11.598 mg/lo4、类胡萝卜素的浓度为5.564 mg/lo5、色素在叶片中的含量为0.064%o6、色素带上蓝绿色为叶绿素a,黃绿色为叶绿素b,黃色为叶黄素，橙黃色 为胡萝卜素。八、思考K为什么植物在不同生长环境下其Chi含量有差异？ Chia /Chib有何适应意义？ 答：不同的生境下营养元素是有差异的，会影响叶绿素的含量。Chi含量受自 然环境的影响，Gs、