pH对酶活性的影响

1、一、实验原理一、实验原理 酶的活性，受环境酶的活性，受环境pHpH的影响极为显著，通的影响极为显著，通常只在一定的常只在一定的pHpH范围内，酶才表现出活性，当酶范围内，酶才表现出活性，当酶活性达到最高时的活性达到最高时的pHpH值称为该酶的最适值称为该酶的最适pH(pH(optimum pH optimum pH ) )，低于或高于最适，低于或高于最适pHpH时，酶的活时，酶的活性依次降低，酶的最适性依次降低，酶的最适pHpH受底物性质和缓冲液性受底物性质和缓冲液性质的影响。质的影响。 不同酶的最适不同酶的最适pHpH不同。但与该酶在生物体不同。但与该酶在生物体内存在的部位有关，例如高等动物

2、的胃蛋白酶最内存在的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适适pHpH为为1.51.52.52.5，而胃液的，而胃液的pHpH与此相近，胰蛋白与此相近，胰蛋白酶的最适酶的最适pHpH为为8 8左右，而十二指肠附近肠道的左右，而十二指肠附近肠道的pHpH值近乎中性。值近乎中性。 本实验使用唾液淀粉酶本实验使用唾液淀粉酶( (salivary amylasesalivary amylase ) )来说明来说明pHpH对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适pHpH为为6.86.8，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适pHpH为为6.46.46.

3、66.6。 二、实验用品二、实验用品1 1、材料、材料 新鲜并稀释新鲜并稀释200200倍的唾液倍的唾液2 2、试剂、试剂（1 1）0.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液: :称取称取0.5g0.5g淀粉溶于淀粉溶于0.3%NaCl0.3%NaCl溶液中。溶液中。（2 2）0.2M0.2M磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液（3 3）0.1M0.1M柠檬酸溶液柠檬酸溶液（4 4）碘化钾）碘化钾碘液碘液: :将将KI 20gKI 20g及碘及碘10g10g，溶于，溶于100ml100ml蒸馏水中，蒸馏水中，使用前，稀释使用前，稀释1010倍。倍。3 3、仪器设备、仪器设备 试管及试管架、试管及试管架、2ml2

4、ml和和5 ml5 ml吸量管、恒温水浴锅、滴定管、吸量管、恒温水浴锅、滴定管、50 ml50 ml锥形瓶锥形瓶三、方法和步骤三、方法和步骤1 1、取、取8 8个个5050毫升锥形瓶，编号。毫升锥形瓶，编号。 按下表中的比例，用吸量管加入按下表中的比例，用吸量管加入0.2M0.2M磷酸氢二钠溶液和磷酸氢二钠溶液和0.1M0.1M柠檬酸溶液，制备柠檬酸溶液，制备 pH 5.0pH 5.08.0 8.0 的的8 8种缓冲溶液。种缓冲溶液。表1.pH 5.08.0 的8种缓冲溶液的制备锥形瓶号锥形瓶号0.2M磷酸氢磷酸氢二钠二钠/ml0.1M柠檬柠檬酸酸/ml 缓缓 冲冲 液液pH123456785

5、.156.056.617.287.728.249.089.724.853.953.392.722.281.760.920.285.05.86.26.66.87.07.48.02 2、由、由8 8个锥形瓶中，各取缓冲液个锥形瓶中，各取缓冲液3ml3ml，分别注入，分别注入8 8支带有编号的试支带有编号的试管中，随后于每个试管中，添加管中，随后于每个试管中，添加0.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液2 ml2 ml和稀释和稀释200200倍的唾液倍的唾液2 ml2 ml。( (增加增加1 1个和个和5 5号内容相同的试管，作为检验淀粉号内容相同的试管，作为检验淀粉的水解程度的水解程度) )向各试管加入稀

6、释唾液的时间间隔各为向各试管加入稀释唾液的时间间隔各为1 1分钟。将分钟。将各试管内容物混匀，并依次置于各试管内容物混匀，并依次置于3737恒温水浴中保温。恒温水浴中保温。3 3、5 5分钟后（视酶的活性而定，一般分钟后（视酶的活性而定，一般5 51010分分钟），每隔钟），每隔1 1分钟由第分钟由第5 5号试管之一吸取号试管之一吸取1 1滴混合滴混合液，置于白磁板上，加一小滴碘化钾液，置于白磁板上，加一小滴碘化钾碘溶液，碘溶液，检查淀粉的水解程度，使实验结果成为橙黄色检查淀粉的水解程度，使实验结果成为橙黄色时，向所有试管依次添加时，向所有试管依次添加1 12 2滴碘化钾滴碘化钾- -碘溶液，

7、碘溶液，充分混匀。加碘化钾溶液时间间隔，由第一管充分混匀。加碘化钾溶液时间间隔，由第一管起，也均为起，也均为1 1分钟，摇匀，观察各试管内容物的分钟，摇匀，观察各试管内容物的颜色。颜色。四、实验结果四、实验结果根据各试管内容物呈现的颜色，可以看出根据各试管内容物呈现的颜色，可以看出pHpH对唾液淀粉酶活性的对唾液淀粉酶活性的影响。指出其最适影响。指出其最适pHpH值。值。注意事项注意事项掌握第掌握第5 5号试管的水解程度是本实验成败的关键。号试管的水解程度是本实验成败的关键。五、思考题五、思考题1.pH1.pH对酶活性有何影响？对酶活性有何影响？2.2.如何测定一个酶的最适如何测定一个酶的最适pH?pH?二、实验用品二、实验用品1 1、材料、材料 新鲜并稀释新鲜并稀释200200倍的唾液倍的唾液2 2、试剂、试剂（1 1）0.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液: :称取称取0.5g0.5g淀粉溶于淀粉溶于0.3%NaCl0.3%NaCl溶液中。溶液中。（2 2）0.2M0.2M磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液（3 3）0.1M0.1M柠檬酸溶液柠檬酸溶液（4 4）碘化钾）碘化钾碘液碘液: :将将KI 20gKI 20g及碘及碘10g10g，溶于，溶于100ml1