HPLC法同时测定黄酒中4种非法食品添加剂

1、蓝色海洋书的海洋hplc法同时测定黄酒中4种非法食品添加剂 黄酒是一种低酒精度的酿造酒，含有多种氨基酸及微量元素，被誉为“液体蛋糕”。黄酒以大米、黍米等为主要原料，经加曲、酵母等糖化发酵剂酿制而成。闻名的黄酒有无锡惠泉酒、绍兴加饭酒、丹阳封缸酒、福建龙岩沉缸酒和即墨老酒等。在黄酒生产过程中生产企业可以按照需要适量添加焦糖色素(通过一般法、氨法或亚硫酸铵法制得)，但禁止添加安赛蜜(乙酰磺胺酸钾)、苯甲酸、山梨酸、糖精钠，这4种食品添加剂分离有增强甜味及防腐作用。在江苏省质量技术监督局主导的黄酒产品质量监督抽查中，按照黄酒产品质量监督抽查实施规范要求必需检测这4个指标。目前，国内已有分离测定苯甲酸

2、、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的办法，但没有出台同时测定这4种物质的国家标准。分开检测费时费劲，不但不能提高仪器用法效率，还影响囫囵监督抽查工作的进度。笔者讨论了同时检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的办法，旨在为大批量的黄酒样品的迅速、精确检测与便捷数据处理提供参考依据。 1试验部分1.1主要仪器与试剂高效液相色谱仪：1200lc型，带g1315d型二极管阵列检测器和lc3d系统化学工作站，美国安捷伦科技有限公司；电子天平：bsa2202s型，德国赛多利斯科学仪器有限公司；超声波清洗器：as20500a型，天津奥赛恩斯仪器有限公司；数显恒温水浴锅：hh6型，常州国华电器有限公司；超纯水机：dire

3、ct-q3型，法国millipore公司；黄酒样品：生产企业成品库随机抽取；亚铁氰化钾溶液：106gl；乙酸锌溶液：220gl；氨水溶液：0.1%；乙酸铵溶液：0.02moll；甲醇：色谱纯，美国sigma-aldrich公司；苯甲酸溶液gbw(e)100006、山梨酸溶液gbw(e)100007、糖精钠溶液gbw(e)100008：均为1mgml，中国计量科学讨论院；安赛蜜溶液（bw3510）：5，50，100，500，1000gml，中国计量科学讨论院；标准工作溶液：量取适量标准溶液，用水稀释配制成所需浓度混合标准溶液，其中苯甲酸、山梨酸、糖精钠为20，40，100，200gml，安赛蜜为

4、0.5，10，100，200gml；试验所用试剂除注明外均为分析纯；试验用水：一级水。1.2样品处理称取5.00g试样于50ml比色管中，在水浴锅上去除酒精，用0.1%氨水调整ph至中性，分离加入2ml亚铁氰化钾溶液和2ml乙酸锌溶液(用于沉淀蛋白质)，定容至标线，混匀，放置2h，取上清液，用0.45m微孔滤膜过滤，待上机分析。1.3液相色谱条件色谱柱：zorbaxeclipsexdbc18柱（250mm×4.6mm，5m，美国安捷伦科技有限公司）；流淌相：甲醇乙酸铵溶液(体积比为595)，流量为0.7mlmin；柱温：30；检测波长：230nm；进样体积：10l。1.4测定办法按1

5、.3测定标准工作溶液和样液，以待测物色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的标准工作溶液质量浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。同时记录待测物质的光谱图，并与标准品光谱图(见图1图4)对比举行定性分析。1.5色谱图按1.3色谱条件进样分析，色谱图见图5。2结果与分析2.1色谱条件实验2.1.1检测波长在214，220，225，230nm处分离检测混合标准溶液，出峰挨次依次为安赛蜜(6.4min)、苯甲酸(7.9min)、山梨酸(11.0min)和糖精钠(13.2min)。结果表白，安赛蜜、山梨酸在214nm处峰高最小，在225，230nm处峰高较大；苯甲酸峰高变幻不大；糖精钠在230nm处峰高最小，

6、在214nm处峰高最大。综合考虑检测的适用性和敏捷度，试验挑选230nm为检测波长。2.1.2流淌相固定检测波长，分离考察乙酸铵溶液(0.02moll)、甲醇水、乙腈水、甲醇乙酸铵溶液等作为流淌相对于待测物色谱峰的影响。结果表白，采纳乙酸铵溶液作为流淌相时出峰时光较长；采纳甲醇水溶液、乙腈水作为流淌相时几乎不出峰，基线浮现漂移；采纳甲醇0.02moll乙酸铵溶液(体积比为595)作为流淌相，能够很好地分别出4个峰，15min内就可以完成一次检测，为了尽量削减黄酒中夹杂物质(如糖分)对色谱柱的污染，试验设置检测时光为25min，以保证一定的时光冲洗色谱柱。2.1.3色谱柱与柱温试验选用安捷伦公司

7、配备的zorbaxeclipsexdbc18柱举行检测，待测物质的峰形和保留时光都较好，故没有考虑其它型号的色谱柱。在检测波长和流淌相固定以后，对不同的柱温(25，30，35)举行考察。结果表白，柱温的转变，对待测物质的保留时光和敏捷度影响不大，但随着柱温降低柱压有所下降，试验挑选柱温为30，既临近常温，又有较小的柱压，可以得到较为抱负的色谱峰形和保留时光。2.1.4流速的挑选固定检测波长、流淌相、柱温、色谱柱，挑选流速为0.7mlmin与1.0mlmin举行比较。结果表白，选用流速为1.0mlmin时，虽然出峰时光缩短，但4个峰紧密的罗列在一起；选用流速为0.7mlmin时峰形分别效果较好，

8、故挑选流淌相流速为0.7mlmin。2.2工作曲线及检出限按照所确定的试验条件，取系列浓度的混合标准溶液注入高效液相色谱仪中举行检测，其中安赛蜜的浓度为0.5，10，100，200gml，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的浓度为20，40，100，200gml。在上述质量浓度范围内，质量浓度c与其对应的峰面积a呈良好线性关系(r0.9997)，线性方程与线性相关系数见表1。按3倍信噪比除以线性方程的斜率计算检出限，本次检测的仪器噪音为0.0081，进样量10l。则各待测物质检出限：安赛蜜为0.57gl；苯甲酸为0.53gl；山梨酸为0.29gl；糖精钠为0.74gl。2.3精密度实验与加标回收实验在1.3色谱条件下，以未检出本底的某黄酒样品做基质，在0.5，1.0，2.5，5.0，7.5mg添加水平常，每个添加水平重复6次测定，计算平均回收率及相对标准偏差(rsd)，结果见表2。结果表白，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的加标平均回收率在95.6%104.0%范围内，测定结果的相对标准偏差在