分解纤维素的微生物的分离

1、课题3 分解纤维素的微生物的分离专题二 微生物的培养与应用 纤维素是一种由葡萄糖首位相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖纤维二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素取二支取二支20mL20mL的试管的试管3、实验、实验：纤维素酶分解纤维素的实验：纤维素酶分解纤维素的实验各加入一张滤纸条各加入一张滤

2、纸条各加入各加入pH4.8pH4.8，物质量为，物质量为0.1mol/L0.1mol/L的醋酸醋酸钠缓冲液的醋酸醋酸钠缓冲液11ml11ml和和10ml10ml甲甲 乙乙在乙试管中加入在乙试管中加入1mL1mL纤维素酶纤维素酶两支试管固定在锥形瓶中，放在两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min140r/min的摇床上振荡的摇床上振荡1h1h结果：乙试管的滤纸条消失结果：乙试管的滤纸条消失 讨论讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？什么？土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培

3、纤维素分解菌的培养基上养基上挑选产生透挑选产生透明圈的菌落明圈的菌落 取样环境：富含纤维素的环境中 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 原因 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 讨论:如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？ 1、选择培养的目的：，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物培养基成分分析培养基成分分析培养基组成培养基组成提供提供主要的营养物质主要的营养物质纤维素纤维素粉粉 5g5g碳碳源（能源）源（能源）N

4、aNO3 NaNO3 1g1g氮氮源、无机盐源、无机盐 KClKCl 0.5g 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gNa2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g KH2PO4 0.9g MgSO4 MgSO4 7H2O 0.5g7H2O 0.5g无机盐无机盐酵母膏酵母膏 0.5g0.5g生长因子生长因子、碳源、氮源、碳源、氮源水解水解酵素酵素 0.5g0.5g氮氮素、生长因子素、生长因子溶解溶解后，蒸馏水定容至后，蒸馏水定容至1000mL1000mL水水2、制备选择培养基提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉

5、膏蛋白胨培养基与之对照培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤或者将纤维素改为葡萄糖。维素改为葡萄糖。有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。分解纤维素的微生物可以大量繁殖。3、操作方法：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养12天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用1

6、011021031041051061、 制备培养基:参照旁栏中的比例2、 涂布平板：将稀释度为104106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30倒置培养培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子KH2PO4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100mL碳源、生长因子碳源、生长因子琼脂琼脂 15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸上述物质溶解后，加蒸馏水定容至馏水定容至1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别纤维素分解菌的培养基鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠) 在培养基中挑取产生明显的透明圈的菌落，该菌落即为分解纤维素的菌落。方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 优点是操作简便，不存在菌落混杂问题缺点一是由于