13章需氧革兰阳性杆菌检验

1、第第13章章 需氧革兰阳性杆菌需氧革兰阳性杆菌 芽胞杆菌属芽胞杆菌属炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌 李斯特菌属李斯特菌属产单核李斯特菌产单核李斯特菌 丹毒丝菌属丹毒丝菌属红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌 加特纳菌属加特纳菌属阴道加特纳菌阴道加特纳菌 第一节第一节 炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌 引起动物和人类炭疽病引起动物和人类炭疽病 是人类历史上第一个被发现的病原菌，俗是人类历史上第一个被发现的病原菌，俗称炭疽杆菌称炭疽杆菌一、临床意义一、临床意义1.致病物质致病物质 荚膜荚膜抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 炭疽毒素炭疽毒素保护性抗原、致死因子、

2、水肿因子保护性抗原、致死因子、水肿因子2. 所致疾病所致疾病 炭疽病：炭疽病：传染源：患病食草动物及其制传染源：患病食草动物及其制品或被污染物品或被污染物传播途径：接触传播途径：接触皮肤炭疽皮肤炭疽 食用食用肠炭疽肠炭疽 吸入吸入肺炭疽肺炭疽 可并发败血症，可并发败血症，死亡率极高死亡率极高3. 免疫力免疫力持久性免疫力持久性免疫力二、生物学特性二、生物学特性形态与染色形态与染色致病菌中致病菌中最大的最大的G G+ +粗大杆菌粗大杆菌，两端平切、，两端平切、排列呈竹节状排列呈竹节状有毒株有荚膜有毒株有荚膜芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，小于芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，小于菌体，位于菌体中央

3、菌体，位于菌体中央无鞭毛无鞭毛 培养特性培养特性 需氧需氧营养要求不高营养要求不高在普通培养基中生长旺盛在普通培养基中生长旺盛菌落直径菌落直径2mm2mm4mm4mm灰白色、无光泽、不透明、扁灰白色、无光泽、不透明、扁平、边缘不整齐的粗糙型平、边缘不整齐的粗糙型在低倍镜下观察菌落边缘呈在低倍镜下观察菌落边缘呈“卷发状卷发状” 在液体培养基中呈絮状沉淀生长在液体培养基中呈絮状沉淀生长明胶培养管明胶培养管3718371824h24h表面表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成线向四周扩散形成“倒松树状倒松树状”。抗原性抗原性 细菌性抗原细菌性抗原菌体多糖抗原菌体

4、多糖抗原荚膜多肽抗原荚膜多肽抗原芽胞抗原芽胞抗原 炭疽毒素炭疽毒素保护性抗原保护性抗原致死因子致死因子水肿因子水肿因子抵抗力很强抵抗力很强 耐高温耐高温 干燥土壤、皮毛中存活数年至几十年干燥土壤、皮毛中存活数年至几十年 对碘和氧化剂敏感对碘和氧化剂敏感 对青霉素等敏感对青霉素等敏感三、微生物学检验三、微生物学检验检验程序检验程序见图见图13-2标本的采集与处理标本的采集与处理 皮肤炭疽：病灶深部标本皮肤炭疽：病灶深部标本/分泌物分泌物 肺炭疽：痰、血液肺炭疽：痰、血液 肠炭疽：粪便、呕吐物肠炭疽：粪便、呕吐物 脑血炭疽：脑脊液、血液脑血炭疽：脑脊液、血液 其它：内脏、耳、舌尖、淋巴结、污染物等

5、其它：内脏、耳、舌尖、淋巴结、污染物等标本直接检查标本直接检查1、直接镜检、直接镜检2、荚膜荧光抗体染色、荚膜荧光抗体染色荧光显微镜荧光显微镜3、核酸检测、核酸检测PCR、核酸杂交、核酸杂交分离培养与鉴定分离培养与鉴定1、分离培养、分离培养血琼脂平板血琼脂平板普通琼脂平板普通琼脂平板2、鉴定、鉴定形态学特征形态学特征生化反应生化反应 见表见表13-1噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验串珠试验串珠试验 青霉素串珠试验青霉素串珠试验：炭疽杆菌在含微量（：炭疽杆菌在含微量（0.050.5U/ml）青霉素的培养基上，）青霉素的培养基上， 37 6h，细胞壁细胞壁合成受阻，细胞膜受胞质压力膨出，其形态变异合成

6、受阻，细胞膜受胞质压力膨出，其形态变异为大而均匀的圆球形，呈串珠状排列。为大而均匀的圆球形，呈串珠状排列。 类炭疽无此现象类炭疽无此现象青霉素抑制试验青霉素抑制试验 炭疽芽胞杆菌一般在含炭疽芽胞杆菌一般在含5U/ml的青霉素平板的青霉素平板上仍能生长，在含上仍能生长，在含10、100U/ml青霉素的平青霉素的平板上受到抑制而不生长。板上受到抑制而不生长。串珠和青霉素抑制联合试验串珠和青霉素抑制联合试验荚膜肿胀试验等荚膜肿胀试验等荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验 1 ） 待测菌待测菌 待测菌待测菌 2）炭疽荚膜抗血清）炭疽荚膜抗血清 兔血清兔血清 3） 1%亚甲蓝亚甲蓝 1%亚甲蓝亚甲蓝 4）加盖玻片，

7、湿盒，室温）加盖玻片，湿盒，室温510min 5）镜检：蓝色细菌周围可见厚薄不等、边）镜检：蓝色细菌周围可见厚薄不等、边界清晰的环状物为阳性界清晰的环状物为阳性 主要引起食物中毒主要引起食物中毒 以夏秋季最为多见以夏秋季最为多见 引起的食物中毒有两型：腹泻型和呕吐型引起的食物中毒有两型：腹泻型和呕吐型一、临床意义一、临床意义第二节第二节 蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌二、生物学特性二、生物学特性1、形态染色、形态染色 革兰阳性大杆菌，两端较钝圆革兰阳性大杆菌，两端较钝圆 多呈链状排列多呈链状排列 可形成芽胞可形成芽胞 引起食物中毒的菌株多为周毛菌引起食物中毒的菌株多为周毛菌 不形成荚膜不形成荚膜2、

8、培养特性、培养特性 营养要求不高营养要求不高 形成较大、灰白色、粗糙似毛玻璃状或白蜡状的形成较大、灰白色、粗糙似毛玻璃状或白蜡状的菌落菌落 在血琼脂平板上呈在血琼脂平板上呈溶血溶血三、微生物学检验三、微生物学检验检验程序检验程序见图见图13-5标本采集标本采集排泄物、呕吐物和可疑食物排泄物、呕吐物和可疑食物标本直接镜检标本直接镜检分离培养与鉴定分离培养与鉴定1、活菌计数、活菌计数涂布法涂布法倾注平板法倾注平板法细菌数大于细菌数大于105个个/克或大于克或大于105个个/毫升，即有毫升，即有发生食物中毒的可能发生食物中毒的可能2、分离培养、分离培养普通琼脂平板普通琼脂平板血琼脂平板血琼脂平板3、

9、鉴定、鉴定依据形态、染色、菌落特点、生化反应、血依据形态、染色、菌落特点、生化反应、血清学试验等清学试验等药敏试验药敏试验第四节第四节 阴道加特纳菌阴道加特纳菌一、临床意义一、临床意义 在正常妇女阴道内也可检出在正常妇女阴道内也可检出 可引起细菌性阴道病可引起细菌性阴道病 也能引起新生儿败血症和软组织感染也能引起新生儿败血症和软组织感染二、生物学特性二、生物学特性 革兰染色性视菌株和革兰染色性视菌株和菌龄不同而异菌龄不同而异 易呈多形性易呈多形性 营养要求较高营养要求较高 形成圆形、光滑、不形成圆形、光滑、不透明，针尖大小的菌透明，针尖大小的菌落落三、微生物学检验三、微生物学检验1、检验程序、

10、检验程序 见图见图13-82、标本采集、标本采集阴道分泌物阴道分泌物3、标本直接检查、标本直接检查湿片镜检、染色镜检、湿片镜检、染色镜检、pH测定、胺试验测定、胺试验4、分离培养与鉴定、分离培养与鉴定5、药敏试验、药敏试验第三节第三节 产单核细胞李斯特菌和红产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌斑丹毒丝菌一、产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌1、临床意义、临床意义 传染源：健康带菌者传染源：健康带菌者 传播途径：粪传播途径：粪-口途径、胎盘、产道、直接接触口途径、胎盘、产道、直接接触 致病物质：溶血素、菌体表面成分致病物质：溶血素、菌体表面成分 引起疾病：传染性单核细胞增多症、脑膜炎、菌引起疾病：

11、传染性单核细胞增多症、脑膜炎、菌血症、食物中毒血症、食物中毒2、生物学特性、生物学特性 革兰阳性短小杆菌，成双排列，有鞭毛革兰阳性短小杆菌，成双排列，有鞭毛 营养要求不高，菌落小，呈灰白色营养要求不高，菌落小，呈灰白色 耐盐、耐碱，对酸、热、消毒剂敏感耐盐、耐碱，对酸、热、消毒剂敏感3、微生物学检验、微生物学检验 检验程序检验程序 见图见图13-6 标本采集标本采集 血液、脑脊液、分泌物、咽喉拭子、羊水和动物血液、脑脊液、分泌物、咽喉拭子、羊水和动物内脏等内脏等 直接镜检直接镜检 分离培养与鉴定分离培养与鉴定 药敏试验药敏试验 检验结果分析与报告检验结果分析与报告二、红斑丹毒丝菌（俗称丹毒杆菌

12、）二、红斑丹毒丝菌（俗称丹毒杆菌）1、临床意义、临床意义 是猪和其他动物的致病菌，人接触感染动物或皮革是猪和其他动物的致病菌，人接触感染动物或皮革而感染。主要感染疾病为类丹毒（是一种急性的但而感染。主要感染疾病为类丹毒（是一种急性的但进展缓慢的皮肤疾病），常发部位：手部。进展缓慢的皮肤疾病），常发部位：手部。 有时可引起关节炎、急性败血症、心内膜炎和食物有时可引起关节炎、急性败血症、心内膜炎和食物中毒。中毒。 2、生物学特性、生物学特性 革兰阳性细小杆菌，成单、成对或小丛状革兰阳性细小杆菌，成单、成对或小丛状排列。排列。 在固体培养基上可形成光滑型和粗糙型两在固体培养基上可形成光滑型和粗糙型两种菌落。种菌落。 3、微生物学检验、微生物学检验检验程序检验程序 见图见图13-7