2013微生物的实验室培养

1、微微生物的培养与应用生物的培养与应用一一. . 培养基培养基 概念：概念：按按照微生物对照微生物对营养物质营养物质的不的不同需同需求求，配制出供其，配制出供其生长繁殖生长繁殖的营养基质。的营养基质。1 1、 营养成营养成分：分：水、无机盐、碳源、氮源水、无机盐、碳源、氮源、生、生长长因子因子2 2、条件、条件: :pHpH值、特殊营养物质、氧气值、特殊营养物质、氧气3 3、培养基的配制：、培养基的配制： 计算计算 称量称量 溶化溶化 灭菌灭菌 倒平板倒平板 1 1）配置固体培养基时加）配置固体培养基时加琼脂的目的是什么琼脂的目的是什么? ? 思考思考作为凝固剂作为凝固剂2 2）平板冷凝后平板冷

2、凝后，将，将平板倒平板倒置目的是什么？置目的是什么？答：可以使培养基表面的水分更答：可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染水珠落入培养基，造成污染4 4、培养基的、培养基的种类种类液体培液体培养基、半固体培养基养基、半固体培养基固固体培体培养基：养基：按按照功能分照功能分 选选择培养基择培养基鉴鉴别培养基别培养基按按照成分划分照成分划分 合成培合成培养基养基天然培养基天然培养基半半合成培养基合成培养基按物理形态分按物理形态分需加凝固剂（如琼脂）需加凝固剂（如琼脂）用于分离纯化、计数等用于分离纯化、计数等选择培养基选择培养基 根据

3、根据微微生物生物的的特殊营养特殊营养要求或要求或对一些物对一些物理、化理、化学条件的抗性学条件的抗性而而设计设计的用于筛选所需的用于筛选所需微微生生物的培养基如：物的培养基如：1 1、加入、加入唯一氮源唯一氮源( (尿素尿素) )的培养基的培养基: :2 2、加入、加入唯一碳源（纤维素）唯一碳源（纤维素）的培养基：的培养基：3 3、不加氮源的、不加氮源的无氮无氮培养基培养基: : 4 4、加入、加入高浓度的食盐高浓度的食盐的培养基的培养基: : 分离出尿素分解菌分离出尿素分解菌分离固氮菌分离固氮菌分离耐盐的微生物分离耐盐的微生物分离出纤维素分解菌分离出纤维素分解菌鉴别培养基鉴别培养基如：如：1

4、 1、伊、伊红红美蓝培美蓝培养基：养基：鉴别鉴别大大肠杆菌肠杆菌 大肠杆菌代谢产生的大肠杆菌代谢产生的有机酸有机酸，和，和伊红伊红- -美蓝反应美蓝反应使菌落使菌落呈深紫色呈深紫色，且，且有金属光泽有金属光泽。 概念：微生物在培养基中生长概念：微生物在培养基中生长产生的某种产生的某种代谢产物代谢产物，能与培养基中的，能与培养基中的特殊化学物质特殊化学物质发生化学反应，产生明显的特征性变化发生化学反应，产生明显的特征性变化，将该种微生物与其他微生物区分开来。将该种微生物与其他微生物区分开来。 天然培养基有天然培养基有血清、血浆、和组织血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。提取液（如鸡胚和

5、牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限; ;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析; ;易发生支原体污染。易发生支原体污染。天然培养基：天然培养基：下下列常用的无菌操作中错误的是列常用的无菌操作中错误的是A A、用酒精擦拭双、用酒精擦拭双手消毒手消毒B B、用氯气消毒水源、用氯气消毒水源C C、实验操作应在酒精灯火焰附近进行、实验操作应在酒精灯火焰附近进行D D、玻璃器皿可用酒精擦拭、玻璃器皿可用酒精擦拭D三、微生物三、微生物病毒界：病毒界：病毒病毒原核生物界：原核生物界

6、：细菌、放线菌细菌、放线菌真核生物界：真核生物界：真菌、原真菌、原生动物生动物特点：特点：结结构简构简单单, ,个个体微体微小小. .通常要用光通常要用光学显微镜或电子显微镜才能学显微镜或电子显微镜才能看到。看到。1 1、微生物的纯化培养、微生物的纯化培养 原理：原理： 在培养基上将细菌稀释或分散在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，繁殖形成单个细胞，繁殖形成一成一个个肉个个肉眼眼可见可见的菌落（的菌落（根据菌落特征鉴别根据菌落特征鉴别）。接种、纯化培养的接种、纯化培养的方法：方法：平平板划板划线法：线法：用于分离、纯化用于分离、纯化稀稀释涂布平释涂布平板法：板法：分离、纯化、鉴定、计数分离、

7、纯化、鉴定、计数2 2、微生物的分离与计数、微生物的分离与计数筛选菌株：筛选菌株：计数方法：计数方法：培养：培养：过程过程利用利用选择培养基选择培养基筛选筛选稀释涂布平板法、稀释涂布平板法、 显微镜直接计数法显微镜直接计数法土壤取样土壤取样样品稀释样品稀释（无菌水）（无菌水）微生物的培养与观察微生物的培养与观察恒温箱中培养恒温箱中培养3 3、微生物的鉴定、微生物的鉴定 鉴定尿素鉴定尿素 分解菌分解菌 鉴定纤维鉴定纤维 素分解菌素分解菌以尿素为唯一氮源的选择培以尿素为唯一氮源的选择培养基养基+ +酚红指示剂酚红指示剂培养细培养细菌菌指示剂指示剂变红变红证明该菌证明该菌能分解尿素能分解尿素以纤维素

8、为唯一碳源的选择以纤维素为唯一碳源的选择培养基培养基+ +刚果红指示剂刚果红指示剂培养培养细菌细菌菌落周围红色消失并菌落周围红色消失并出现透明圈出现透明圈证明该菌能分证明该菌能分解纤维素解纤维素实例：土壤中纤维素分解菌的分离纯化实例：土壤中纤维素分解菌的分离纯化原理：原理：流程：流程：土壤取样：土壤取样：选择培养：选择培养：梯度稀释梯度稀释涂布平板：涂布平板：（加刚果红：鉴别培养基）（加刚果红：鉴别培养基）挑选红色消失并产生透明圈的菌落挑选红色消失并产生透明圈的菌落富富含纤维素含纤维素的环境的环境含纤维素唯一碳源含纤维素唯一碳源的的选择培养基选择培养基分离方法：稀释涂布平板法分离方法：稀释涂布平板法一类复合酶一类复合酶四、微四、微生物实验室培