课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数培训资料

1、课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路一、研究思路(一一)筛选菌种筛选菌种寻找耐高温的寻找耐高温的DNA聚合酶聚合酶耐高温耐高温的酶的酶耐高温耐高温生物体生物体耐高温耐高温环境（热泉、火山口）环境（热泉、火山口）寻找寻找寻找寻找Taq细菌细菌思考：思考： 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？氮源的分别是什么物质？碳源碳源：葡萄糖、尿素：葡萄糖、尿素氮源氮源：尿素：尿素 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而原则上能。只有产

2、生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。生存。该菌数量上升该菌数量上升如何对细菌进行计数？101102103104105106方法方法 运用运用稀释涂布平板法稀释涂布平板法来来统计统计样品中的样品中的活菌活菌数。数。原理原理 1 1个菌落个菌落1 1个活菌个活菌选择菌落数在选择菌落数在3030300300的平板上计数。的平板上计数。需培养计算出需培养计算出三个或三个以上三个或三个以上的平板菌的平板菌落求落求平均数平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低低。注意事项注意事项看课本看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？

3、如果有问题，错在哪？果有问题，错在哪？ 第一位同学：没有第一位同学：没有重复实验重复实验（至少涂布（至少涂布3 3个平板）个平板）第二位同学：第二位同学：A A组结果误差过大，不应用于计算平均值组结果误差过大，不应用于计算平均值计算公式：计算公式：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 B每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数 =（CV）M阅读阅读P22P222323页页“（三）设置对照（三）设置对照”一段讨论教材中提出一段讨

4、论教材中提出的问题。的问题。(1)A(1)A同学出现此结果的可能原因？同学出现此结果的可能原因？(2)(2)设置对照实验，帮助设置对照实验，帮助A A同学排除上述两个可能影响实验同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？结果的因素？实验流程：实验流程：样品稀释涂布平板样品稀释涂布平板微生物的培养与观察微生物的培养与观察 菌落计数菌落计数二、实验设计土壤取样土壤取样制备培养基制备培养基（一）土壤取样（一）土壤取样从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去先铲去表层土表层土3cm3cm左右左右，再取样，将样品装入事先准备好的信，再取样，将样品装入事先准备好

5、的信封中。封中。（二）制备培养基（二）制备培养基制备制备选择培养基（尿素为唯一氮源）选择培养基（尿素为唯一氮源）制备制备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显数目应明显多于多于选择培养基上的数目，因此，选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了到了选择选择作用。作用。（三）样品稀释涂布平板（三）样品稀释涂布平板稀释倍数为稀释倍数为 10101 1 10106 6。每个稀释度均用。每个稀释度均用3 3

6、个选择培养基个选择培养基和和1 1个蛋白胨培养基个蛋白胨培养基。（四）微生物的培养与观察（四）微生物的培养与观察不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。菌落菌落菌落菌落1 1、取土用的、取土用的小铁铲小铁铲的盛土样的的盛土样的信封信封在使用前都需要在使用前都需要灭菌灭菌。2 2、应在、应在火焰旁火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞

7、。中，塞好棉塞。3 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁火焰旁操作。操作。注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。三、操作提示三、操作提示四、结果分析与评价四、结果分析与评价 1. 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？是否筛选出菌落？ 对照的培养皿对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染无菌落说明培养基没有污染。 牛肉膏培养基的牛肉膏培养基的菌落数目多余选择培养基的菌菌落数目多余选择培养基的菌落数目落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落

8、。，说明选择培养基已筛选出一些菌落。四、结果分析与评价四、结果分析与评价 2. 2.获得某一稀释度下，菌落数获得某一稀释度下，菌落数3030300300的平板，的平板，在这以稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相在这以稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相接近？接近？ 相接近，说明操作成功。相接近，说明操作成功。五、课题延伸五、课题延伸巩固练习1.1.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区

9、别2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是别是( )( ) A.COA.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚 合酶。合酶。B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、 M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值。作为该样品菌落数的估计值。C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。4.4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（