实验一薄层板的制备

1、实验一薄层板的制备、活度测定及应用1. 目的要求 掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 掌握吸附剂活度测定的原理及方法 应用薄层层析法检测以中草药化学成分 2实验原理 薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于 混合物的分离、提纯及含量的测定。还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的 洗脱条件。根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所 进行的层析为吸附薄层层析；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属 于分配薄层层析。薄层层析中以吸附簿层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化 销和硅胶。吸附簿层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，

2、及展开剂对它们的解吸 附能力的小同，使各成分达到分离。吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络 合、静电引力、范德华力等产生。吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附 成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。分配簿层层析的原理是，用极性溶剂吸附在同体支持剂上所形成的混合物，铺成簿 层（或装柱），然后活化、点样（或上样），再用极性较弱的展开剂（或洗脱剂） 进行展开。在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配。由于 各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。 由于化合物的极性不同， 吸附能力不相同， 在展开剂上移动， 进行不同程度的解析， 根据原点至主斑点中心及展开剂

3、前沿的距离，计算比移值 （Rf） ： 化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和 展开剂移动的距离之比是一定的，即 Rf 值是化合物的物理常数，其大小只与化合物 本身的结构有关，因此可以根据 Rf 值鉴别化合物 薄层层析可适用小量样品 （几到几十微克甚至 0.01 g ）的分离：也可用于多达 500mg 样品的分离，是近代有机化学中用于定性、定量的一种重要手段。特别适用于那些 挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。3 实验材料材料：硅胶 GF254，硅胶（

4、H），羧甲基纤维素钠，玻璃片，市售薄层板 溶剂：石油醚，乙酸乙酯，二乙胺等4 实验步骤硅胶（H） 羧甲基纤维钠 （CMC-Na）薄层板的制备取%羧甲基纤维纳 10ml，倒入烧杯中，然后逐步加入薄层层析用硅胶克，不断 振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅 胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附 硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上， 让其自然阴干， 100下烘 30 分钟。 冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。吸附剂的活度测定 一般选用三种染料的薄层层析法进行测定， 即用 %二甲基黄（）。苏丹红（Sudan

5、 ），靛酚蓝（ Indophenolblue4-Tapnthoquinone-4-dimethylaminoaniline ）的 苯溶液各 10l点滴于硅胶 H薄层上，以苯为展开剂，展开 10cm（约 20 分钟）， 观察染料分离情况。薄层层析的应用 湖北贝母生物碱成分的 TLC检识 分别用毛细管吸取湖北贝母总生物碱氯仿溶液点滴在硅胶 CMC-Na薄层上，以C6H5-EtoAc-NHEt 2（6：4：1）的比例配成展开剂展开，待展开剂展开至离薄板上端边 缘约 1cm时，取出薄板自然吹干，然后喷洒显色剂改良碘化铋钾喷雾，晾干，观察 并记录 TLC分离结果。丹参色素的 TLC 检识分别用毛细管吸取

6、丹参乙醚提取液点滴在硅胶 CMC-Na薄层上，以石油醚 - 醋酸 乙酯（9 ：1） 的比例配成展开剂展开，待展开剂展开至离薄板上端边缘约1cm时，取出薄板自然吹干，然后喷洒显色剂改良碘化铋钾喷雾，晾干，观察并记录TLC分离结果。5 实验结果及讨论实验制备的硅胶 CMC-Na薄层表面均匀，无明显气泡出现，但活化后触碰薄层时， 容易出现掉粉现象，粘合效果欠佳，这表明薄层板的质量仍有待提高。对薄层板进行活度测试，观察薄板，可以看到拖尾现象，且薄板经溶剂浸泡后有少 许地方吸附剂出现明显脱落现象，这可能是由于羧甲基纤维钠加入的量不够引起 的。用%二甲基黄、苏丹红，靛酚蓝的苯溶液各 10l点滴于硅胶 H 薄层上，以苯为 展开剂，展开后，三种染料分离明显：靛酚蓝斑点接近于起始线，二甲基黄斑点靠 近薄层中间位置，苏丹红斑点则于两种染料斑点之间。取硅胶 Gf 高效板对湖北贝母生物碱成分进行检识， 在展开剂 C6H5-EtoAc-NHEt 2（6:4 ： 1）展开之后，吹干，观察薄层板无明显现象，放在紫外灯下明显看到样品点接近原点，无展开现象，而喷洒显色剂之后，原点上的两个样品变成黑色。换成展开剂为C6H5-EtoAc-NHEt 2（3：4：1），其极性提高，样品点有稍微的上升，说明样品中生物 碱的极性较高，需要换成极性高的展开剂才能得到好的分离效果。取硅胶 Gf 高效板对